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1.
RNA干扰作用(RNAi)是通过双链RNA介导的特异性转录后基因沉默，这一过程已在拟南芥、线虫和真菌等多种模式生物中得到揭示．RNAi主要通过双链RNA被核酸酶切割成的小干扰RNA(siRNA)，由siRNA介导识别并靶向切割同源靶mRNA分子而实现的．RNAi具有高效性和高特异性，已成为关闭基因的一项新技术，在基因功能研究和疾病的基因治疗中具有广阔的应用前景． 相似文献
2.
Qiao-ling GU Yan ZHANG Xi-mei FU Zhao-lian LU Yao YU Gen CHEN Rong MA Wei KOU Yong-mei LAN 《Journal of Zhejiang University. Science. B》2020,21(1):77-86
目的:通过3-溴丙酮酸(3-BrPA)处理秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans),观察3-BrPA对线虫的毒性和生存周期的影响。通过秀丽隐杆线虫RNA干扰(RNAi)和突变株,分析3-BrPA对线虫糖酵解途径己糖激酶家族和药物代谢的关键酶细胞色素P450(cytochrome P450,CYP)家族的影响。创新点:首次报道了3-BrPA对秀丽隐杆线虫有毒性作用,己糖激酶是3-BrPA对线虫作用的重要靶点,而CYP-35A家族是线虫代谢3-BrPA的主要酶类。方法:用不同浓度的3-BrPA处理秀丽隐杆线虫,每24 h监测一次存活率;用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测代谢相关基因的表达;通过RNAi沉默己糖激酶家族基因hxk-1、hxk-2和hxk-3;计算3-BrPA处理hxk家族RNAi株和细胞色素P450 cyp-35家族突变株后的致死中浓度(LC50)。结论:3-BrPA对线虫有明显的毒性效应(图1);与对照组比较,3-BrPA处理组的线虫平均寿命明显缩短(图2);3-BrPA处理线虫后hxk-1、hxk-2和hxk-3的信使RNA(mRNA)表达明显升高(P<0.05,图5);3-BrPA处理hxk RNAi株后的LC50均减小(P<0.05,表5);3-BrPA处理cyp-35突变株后的LC50也均减小(P<0.05,表6)。综上所述,3-BrPA的毒性与其对秀丽隐杆线虫己糖激酶代谢的影响密切相关;CYP-35家族在线虫中对3-BrPA代谢中起着关键作用。 相似文献
3.
肿瘤基因治疗是用正常或野生型基因矫正或置换致病基因或引入有治疗价植的其它来源基因的一种治疗方法.基因治疗一般是引入修饰基因于病人体内而并非该基因的产物,即是一种疗法而非新产品.但是,通过体内直接途径可将外湖DNA象传统的药物一样注射到机体内,帮、故有人称这些外源的DNA的基因药物.肿瘤基因治疗研究中,通常采用基因转移和基因灭活方法.基因转移是指将外源性目的基因导入病变细胞或其他细胞,目的基因的表达产物修饰缺陷细胞,使其恢复功能或使原有的功能得到加强,故又称为基因修饰.肿瘤基因修饰治疗研究包括免疫基因治疗、增强抑癌基因表达、靶向化疗或提高机体化疗耐受性等内容.基因灭活是应用反义技术特异性封闭某些基因的表达.反义技术是指利用针对特异性DNA和RNA片段按碱基配对的原则人工合成小分子核苷酸序列(反义寡苷酸),与其目的DNA和RNA序列互补结合,以选择性抑制目的基因翻译或转灵过程的技术和方法.在肿瘤基因灭活治疗中,订要是利用反义寡核苷酸抑制或封闭某些癌基因的表达.基因转移疗法一般分为两类:一是体细胞系基因转移,主要用于防治遗传性及非遗传性疾病;二是胚胎基因转移,用于预防遗传性疾病.临床上,基因治疗是指体细胞基因治疗.基因治疗基本上分为三步:(1)基因导入:是指把基因或合有基因的载体导入机体;(2)基因传递:是指基因从导入部位进入靶细胞核;(3)基因表达:是指细胞中治疗性基因产物的形成. 相似文献
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1基因沉默基因沉默是生物体内特定基因由于种种原因不表达或表达量极低的遗传现象。一般认为基因沉默有三种情况:位置效应的基因沉默、转录水平的基因沉默和转录后水平的基因沉默。RNA干扰(RNA interference,RNA i)是正常生物体内抑制特定基因表达的一种现象,它是指当细胞中导入与内源性mRNA编码区同源的双链RNA(double stranded RNA,dsRNA)时,该mR-NA发生降解而导致基因表达沉默的现象,这种现象发生在转录后水平,又称为转录后基因沉默。题1 2006年诺贝尔生理学奖授予美国科学家安德鲁·法尔和克雷格·梅洛,以表彰他们发现了RNA… 相似文献
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RNA干扰(RNA interference, RNAi)是近年来发展起来的研究生物体基因表达、调控与功能的一项崭新技术,它利用了由小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)引起的生物细胞内同源基因的特异性沉默(silencing)现象,其本质是siRNA与对应的mRNA特异结合、降解,从而阻止mRNA的翻译.RNAi是生物进化的结果,是生物体对病毒基因外源核酸侵入的一种保护性反应.它普遍存在于各种生物中,具有抗病毒、稳定转座子及监控异常表达mRNA的生物学功能.RNA干扰现象不仅能提供一种经济、快捷、高效的抑制基因表达的技术手段,而且有可能在基因功能测定、基因治疗等方面开辟一条新思路. 相似文献
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RNA干扰(RNAi)是双链RNA(dsRNA)介导的,由特异性引起的转录后基因沉默现象.RNA干扰技术作为基因沉默的有效手段,在肿瘤治疗方面显示出良好的前景.本文就RNAi的作用机制,作用特点及目前在女性卵巢癌治疗中的应用作一简单综述. 相似文献
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《教育教学论坛》2019,(50)
文章探讨了siRNA干扰DNALI1基因对HEK-293细胞增殖、迁移的影响。通过培养HEK-293细胞株,分别转染siRNA DNALI1组(DNALI1-homo-66组、DNALI1-homo-426组与DNALI1-homo-777组)和对照组。siRNA DNALI1组细胞中DNALI1 mRNA表达量均低于对照组,三个干扰组中DNALI1-homo-66组干扰效率最高,差异均具有统计学意义(P<0.05);与阳性对照组和阴性对照组相比,siRNA DNALI1组细胞转染24—48h细胞增殖能力明显减弱,差异均具有统计学意义(P<0.05)。在细胞水平可通过RNA干扰特异性抑制DNALI1基因来抑制细胞的增殖和迁移能力,为研究DNALI1基因在细胞中的作用机制奠定了基础。 相似文献
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张西玉 《乐山师范学院学报》2006,21(12):51-53
miRNA(microRNA)是一类长约22个核苷酸的小分子非编码RNA。近年来,科学家发现miRNA与基因表达调控密切相关,miRNA可通过与靶mRNA特异性的碱基配对,引起靶mRNA的降解,抑制其翻译,或以其它形式的调节机制抑制靶基因的表达。本文概述了miRNA特点、生物合成过程、功能以及作用机制。 相似文献
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微RNA（miRNA）是近年来在小分子RNA中发现的一类与基因表达调控密切相关的分子,其长度约为21-22个核苷酸,能够通过与靶mRNA特异性的碱基配对引起靶mRNA的降解或抑制其翻译,从而对基因进行转录后表达的调控。本文对miRNA的特性及功能进行综述。 相似文献
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张新环 《河南科技学院学报》2006,34(1):5-8
RNA干扰作用（RNAi）是通过双链RNA介导的特异性转录后基因沉默，这一过程已在拟南芥、线虫和真菌等多种模式生物中得到提示。RNAi主要通过双链RNA被核酸酶切割成的小干扰RNA（siRNA），由siRNA介导识别并靶向切割同源靶mRNA分子而实现的。RNAi具有高效性和高特异性，已成为关闭基因的一项新技术，在基因功能研究和疾病的基因治疗中具有广阔的应用前景。 相似文献
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为了研究血管内皮生长因子VEGF-A对肾脏促红细胞生成素EPO的表达调控以及相关基因和通路的影响,我们利用VEGF可逆抑制小鼠模型,将小鼠模型分为VEGF-A正常组(dox+)和VEGF-A抑制组(dox-)(n=8)。取小鼠肾脏组织提取总RNA,qPCR检测VEGF-A以及部分相关基因的mRNA表达量,进行转录组测序,通过FPKM和log2(FC)一值筛选差异基因进行GO和KEGG通路富集分析。结果发现,dox-组较dox+组VEGF-AmRNA水平明显降低;两组小鼠转录组测序数据分析发现共有1 282个差异基因,其中上调基因803个,下调基因479个;通过对差异基因进行GO和KEGG富集分析发现,差异基因主要参与T细胞活化、脂肪细胞分化产热等,主要定位在细胞外基质以及质膜外侧等位置,且富集于PI3K-AKT信号通路。因此我们得出结论,抑制小鼠VEGF-A的表达可以促进EPO表达上调,从而影响PI3K-AKT信号通路相关基因水平表达。 相似文献
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《学周刊C版》2017,(16):25-26
目的:观察探讨C35在肝癌中的表达与靶向干预,为临床治疗提供依据。方法:设计两对C35编码区的si RNA并合成,构建到转录载体p TZU6+1上,形成重组质粒siRNA-C35,在脂质体介导下转染肝癌细胞株,RT-PCR分析RNA干扰后mRNA的变化,Western blot检测表达蛋白的变化。结果:扩增的目的基因条带亮度存在明显差异,与对照组相比,转染质粒pTZU6+1相对表达率为95.3%、siRNA1组相对表达率为40.0%,siRNA2组的相对表达率为28.4%。构建的重组质粒对C35mRNA的表达有抑制作用。只转染脂质体组和pTZU6+1的C35蛋白杂交带强于siRNA1和siRNA2,证实重组质粒可以抑制C35基因的表达,以对照组的蛋白带为标准,其图像分析可知,转染质粒pTZU6+1相对表达率为94.9%、siRNA1组相对表达率为29.6%,siRNA2组的相对表达率为32.2%。结论:通过设计C35基因敲除的si RNA可有效抑制C35基因的表达,肝癌细胞生长速度及侵袭性均发生改变,但C35基因在肝癌细胞株中及肝癌组织中低表达,不可作为肝癌的靶点干预基因。 相似文献
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目的:探讨RNA干扰T细胞mTOR表达后诱导T细胞分化对小肠移植免疫耐受的影响。方法:通过shRNA干扰T细胞mTOR表达后,诱导T细胞向Foxp3+Tregs细胞分化。对60只雄性SD大鼠施行30次异位节段小肠移植,随机分为A组(mTOR-shRNA转染组)、B组(mTOR抑制剂RAD001干预)和C组(移植对照组、注射生理盐水)。观察小肠移植后受体大鼠的体重变化、生存时间及移植小肠病理切片评估排斥反应程度。结果:构建的mTOR-shRNA质粒表达载体在体外能有效地抑制大鼠骨髓细胞mTOR基因mRNA和蛋白的表达。RNA干扰大鼠T细胞mTOR基因可调节T细胞的定向分化,Tregs细胞增多,而Th17细胞分化减少。抑制mTOR基因可诱导大鼠异位小肠移植的免疫耐受,减轻受体抗移植物的排斥反应,显著延长移植物的存活时间。结论:RNA干扰T细胞mTOR表达后诱导T细胞分化对小肠移植耐受的研究为mTOR抑制剂(RAD001)在移植后的临床应用提供理论和实验依据。 相似文献
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《莆田学院学报》2019,(2):16-20
观察Bmi-1基因沉默对A549细胞体外迁移和体内转移的影响。设计针对Bmi-1的小干扰RNA(siRNA)序列作为靶序列构建重组逆转录病毒siRNA表达载体并将其转染入肺腺癌A549细胞;应用RT-PCR和Western Blot方法检测对Bmi-1基因的沉默效果;应用划痕修复和Transwell方法检测Bmi-1-siRNA对A549细胞体外迁移的影响;通过裸鼠尾输入各组细胞,观察Bmi-1-siRNA对A549细胞在裸鼠体内转移能力的影响。结果显示:沉默Bmi-1基因的表达能够抑制A549细胞的体内外迁移能力,同时降低VEGF的分泌。Bmi-1-siRNA能抑制肺腺癌A549细胞的转移能力,VEGF可能参与其中。 相似文献
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正常上皮细胞特异性-1（normal epithelial cellspecific-1，NESI）基因是1996年Liu等用差异杂交法从正常乳腺细胞株76N及经放射照射变异细胞株76R-3中分离出的新基因。基因在RNA水平表达丢失，有别于经典的抑癌基因。最新研究表明，NESI基因在卵巢癌中具有标志物的作用，本文综述如下。 相似文献
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<正> 基因治疗(genetherapy)是近年来医学上发展起来的一项新技术,是指在基因水平上对遗传缺陷进行纠正。它主要是向靶细胞或组织中引入外源基因DNA或RNA片段,以纠正或补偿基因的缺陷,关闭或抑制异常表达的基因,从而达到治疗的目的。通常包括基因置换、基因修正、基因修饰、基因失活等。上世纪80年代初,Anderson首先阐述了基因治疗的概况。1990年美国 相似文献
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目的:以园蓝为研究材料,鉴定园蓝花青素提取物(GBBAEs)中的功能性成分的结构,建立脂多糖(LPS)诱导的体外炎症模型,并评价其抗炎作用和初步机制。创新点:首次探究了蓝莓花青素对建立的LPS诱导体外炎症模型的营养干预作用,并初步探究了发挥抗炎机制的作用通路。方法:将RAW 264.7细胞分为对照组(不作处理)和实验组(1μg/ml LPS刺激建模)。实验组进一步分为3个不同浓度组:400μg/ml GBBAEs组、800μg/ml GBBAEs组和1200μg/ml GBBAEs组。用酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测一氧化氮(NO)、前列腺素E2(PGE2)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、干扰素γ(INF-γ)等炎症因子的释放量;用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)分析IL-1β、IL-6、TNF-α、环氧合酶-2(COX-2)及单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的炎症相关基因m RNA的表达水平;用蛋白质印迹法(Western blot法)测定相关炎症蛋白COX-2和NF-κBp65表达水平。结论:试验结果表明,通过ELISA法测定GBBAEs可以显著性抑制NO、PGE2、IL-1β、IL-6、INF-γ等炎症因子的释放;RT-PCR分析阐明在LPS诱导的单核-巨噬细胞RAW 264.7中,GBBAEs可以显著性抑制IL-1β、IL-6、TNF-α、COX-2及MCP-1的炎症相关基因m RNA的表达水平。此外,Western blot法进一步显示GBBAEs对相关炎症蛋白COX-2和NF-κBp65表达具有明显抑制作用,进一步证实GBBAEs通过NF-κB机制通路来发挥抗炎作用。 相似文献
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<正> 癌症、肥胖症及心脏病等人类最大的杀手也许很快就可以用一种革命性的基因疗法来进行治疗,让造成这些疾病的基因安静下来。据美国和德国科学家最近发表在《自然》周刊上的报告说,这一技术是在近期 RNA 干扰技术(RNAi)取得重大突破的基础上发展起来的,首先被用于降低胆固醇。以前人们一直认为 RNA 会执行细胞中 DNA 的命令,但在过去10年里,科学家发现可用双链 RNA 来关闭某些特定基因。诺贝尔奖得主、麻省理工学院教授菲利普·夏普指出:“这项新发现是分子生物学研究领域内的重大突破,是历史性的进步。这项技术为治疗人类疾病 相似文献