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1.
Chao LIU Xian ZHANG Zhi-ming RAO Ming-long SHAO Le-le ZHANG Dan WU Zheng-hong XU Hui LI 《Journal of Zhejiang University. Science. B》2015,(4):286-295
目的:获得一株高产雄甾-4-烯-3,17-二酮(AD)的Mycobacterium neoaurum突变株。创新点:获得了一株3-甾酮-Δ1-脱氢酶(KSDD)酶活缺陷型的高产AD的诱变菌株Mycobacterium neoaurum ZADF-4,并采用菌落显色法筛选KSDD酶活缺陷型M.neoaurum突变株。方法:(1)诱变方法:采用常压室温等离子体(ARTP)诱变技术来处理出发菌株M.neoaurum ZAD。ARTP诱变条件如下:功率40 W,气流量12.5 L/min,辐射距离1 cm,样品体积10μl,辐射时间为60、90、120、150和180 s;致死率统计优化后,最适辐射时间为150 s,致死率为90%~96%。(2)筛选方法:将ARTP诱变处理后的菌株点种在硝酸纤维滤膜上,30°C培养2 d,然后将长有菌落的滤膜小心取出并漂浮在4 mg/ml二氯靛酚(DCPIP)溶液(0.1 mmol/L磷酸缓冲液p H 7.0),30°C培养1 d直到全部菌落染成蓝色。然后将该滤膜取出,漂浮在250 mmol/L AD溶液(2%甲醇和50 mmol/L Tris p H 7.0缓冲液),室温放置15 min左右,观察菌落颜色变化。KSDD在底物AD存在时会脱氢产生雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮(ADD)和H+,H+可以使被DCPIP染成蓝色的菌株褪色。因此,酶活缺陷型的菌株会仍保持蓝色,而酶活高的菌株会褪色为黄色(图3)。(3)对获得的潜在的高产AD菌株进行进一步的酶活检测以及产量验证,以期获得最优的突变株。结论:获得了4株具有潜在的高产AD能力的菌株,其中,最优的突变株ZADF-4的KSDD酶活相较于出发菌株ZAD下降了81.2%(图4),活性胶也证明其KSDD酶活相较于出发菌株下降明显(图5)。薄层色谱法(TLC)和高效液相色谱法(HPLC)实验证明突变株ZADF-4中,AD的产量有了明显的提高(图6和图7),提高到了(6.28±0.11)g/L,AD/ADD提高到8:1,AD的摩尔产率达到60.3%(表1)。对出发菌株ZAD和突变株ZADF-4的ksdd基因进行克隆和序列比对,发现ZADF-4的ksdd序列在5’端缺失9个核苷酸(atgttctac),导致3个氨基酸(MFY)的缺失;还发生了两个点突变,其中一个是无义突变(g.15a>6t),另一个是有义突变(g.413c>404t),并引起了相应位置上的氨基酸变化(p.138S>135L)。上述的基因突变及其引起的氨基酸序列的变化可能是引起M.neoaurum ZADF-4中KSDD酶活降低及AD产量提高的主要原因。 相似文献
2.
Chao LIU Xian ZHANG Zhi-ming RAO Ming-long SHAO Le-le ZHANG Dan WU Zheng-hong XU Hui LI 《Journal of Zhejiang University. Science. B》2015,(4)
目的：获得一株高产雄甾-4-烯-3,17-二酮（ AD ）的Mycobacterium neoaurum突变株。
创新点：获得了一株3-甾酮-Δ1-脱氢酶（KSDD）酶活缺陷型的高产 AD的诱变菌株 Mycobacterium neo-aurum ZADF-4,并采用菌落显色法筛选 KSDD酶活缺陷型M. neoaurum突变株。
方法：（1）诱变方法：采用常压室温等离子体（ARTP）诱变技术来处理出发菌株 M. neoaurum ZAD。ARTP 诱变条件如下：功率40 W ,气流量12.5 L/min,辐射距离1 cm,样品体积10μl,辐射时间为60、90、120、150和180 s;致死率统计优化后,最适辐射时间为150 s,致死率为90%~96%。（2）筛选方法：将ARTP诱变处理后的菌株点种在硝酸纤维滤膜上,30°C培养2 d,然后将长有菌落的滤膜小心取出并漂浮在4 mg/ml二氯靛酚（DCPIP）溶液（0.1 mmol/L磷酸缓冲液pH 7.0）,30°C培养1 d直到全部菌落染成蓝色。然后将该滤膜取出,漂浮在250 mmol/L AD溶液（2%甲醇和50 mmol/L Tris pH 7.0缓冲液）,室温放置15 min左右,观察菌落颜色变化。KSDD在底物 AD 存在时会脱氢产生雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮（ADD）和H+,H+可以使被DCPIP染成蓝色的菌株褪色。因此,酶活缺陷型的菌株会仍保持蓝色,而酶活高的菌株会褪色为黄色（图3）。（3）对获得的潜在的高产AD菌株进行进一步的酶活检测以及产量验证,以期获得最优的突变株。
结论：获得了4株具有潜在的高产AD能力的菌株,其中,最优的突变株ZADF-4的KSDD酶活相较于出发菌株ZAD下降了81.2%（图4）,活性胶也证明其KSDD酶活相较于出发菌株下降明显（图5）。薄层色谱法（TLC）和高效液相色谱法（HPLC）实验证明突变株 ZADF-4中,AD的产量有了明显的提高（图6和图7）,提高到了(6.28±0.11) g/L, AD/ADD提高到8：1,AD的摩尔产率达到60.3%（表1）。对出发菌株ZAD和突变株ZADF-4的ksdd基因进行克隆和序列比对,发现ZADF-4的ksdd序列在5'端缺失9个核苷酸（atgttctac）,导致3个氨基酸（MFY）的缺失;还发生了两个点突变,其中一个是无义突变（g.15a>6t）,另一个是有义突变（g.413c>404t）,并引起了相应位置上的氨基酸变化（p.138S>135L）。上述的基因突变及其引起的氨基酸序列的变化可能是引起M. neoaurum ZADF-4中KSDD酶活降低及AD产量提高的主要原因。 相似文献
创新点：获得了一株3-甾酮-Δ1-脱氢酶（KSDD）酶活缺陷型的高产 AD的诱变菌株 Mycobacterium neo-aurum ZADF-4,并采用菌落显色法筛选 KSDD酶活缺陷型M. neoaurum突变株。
方法：（1）诱变方法：采用常压室温等离子体（ARTP）诱变技术来处理出发菌株 M. neoaurum ZAD。ARTP 诱变条件如下：功率40 W ,气流量12.5 L/min,辐射距离1 cm,样品体积10μl,辐射时间为60、90、120、150和180 s;致死率统计优化后,最适辐射时间为150 s,致死率为90%~96%。（2）筛选方法：将ARTP诱变处理后的菌株点种在硝酸纤维滤膜上,30°C培养2 d,然后将长有菌落的滤膜小心取出并漂浮在4 mg/ml二氯靛酚（DCPIP）溶液（0.1 mmol/L磷酸缓冲液pH 7.0）,30°C培养1 d直到全部菌落染成蓝色。然后将该滤膜取出,漂浮在250 mmol/L AD溶液（2%甲醇和50 mmol/L Tris pH 7.0缓冲液）,室温放置15 min左右,观察菌落颜色变化。KSDD在底物 AD 存在时会脱氢产生雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮（ADD）和H+,H+可以使被DCPIP染成蓝色的菌株褪色。因此,酶活缺陷型的菌株会仍保持蓝色,而酶活高的菌株会褪色为黄色（图3）。（3）对获得的潜在的高产AD菌株进行进一步的酶活检测以及产量验证,以期获得最优的突变株。
结论：获得了4株具有潜在的高产AD能力的菌株,其中,最优的突变株ZADF-4的KSDD酶活相较于出发菌株ZAD下降了81.2%（图4）,活性胶也证明其KSDD酶活相较于出发菌株下降明显（图5）。薄层色谱法（TLC）和高效液相色谱法（HPLC）实验证明突变株 ZADF-4中,AD的产量有了明显的提高（图6和图7）,提高到了(6.28±0.11) g/L, AD/ADD提高到8：1,AD的摩尔产率达到60.3%（表1）。对出发菌株ZAD和突变株ZADF-4的ksdd基因进行克隆和序列比对,发现ZADF-4的ksdd序列在5'端缺失9个核苷酸（atgttctac）,导致3个氨基酸（MFY）的缺失;还发生了两个点突变,其中一个是无义突变（g.15a>6t）,另一个是有义突变（g.413c>404t）,并引起了相应位置上的氨基酸变化（p.138S>135L）。上述的基因突变及其引起的氨基酸序列的变化可能是引起M. neoaurum ZADF-4中KSDD酶活降低及AD产量提高的主要原因。 相似文献
3.
采用紫外诱变方法对实验室保藏的粗酶活为10 U/mL的野生微球菌SX-1进行诱变处理以获得高产酶能力的菌株,实验得到最佳诱变条件为:15 W紫外灯,垂直照射距离为30 cm,处理时间为90 s,通过荧光圈初筛和摇瓶复筛,筛选出一株突变菌株,酶活可达到22.5 U/mL,比出发菌株脂肪酶活力提高了125%,将其连续传代5次,酶活稳定,是一株比较理想的脂肪酶产生菌. 相似文献
4.
本实验采用乳糖发酵短杆菌B_(27-12)作为出发菌株进行试验,首先,通过噬菌体敏感性试验,证明B_(27-12)对天津短杆菌T_(6-13)的五种噬菌体不敏感,从而证明B_(27-12)与T_(6-13)是不同噬菌体类型的谷氨酸生产菌。然后,将B_(27-12)用诱变效率高的原生质体诱变方法进行诱变选育,得到产酸较高的突变株,再进一步通过硫酸二酯(DES)和紫外线复合诱变法进行诱变,选育得到一株产酸较高的突变株D_(16)。 相似文献
5.
以牛肉膏蛋白胨和NA培养基为分离培养基,研究从杜鹃中分离内生细菌和抗生素测定的方法.通过组织分离法从毛白杜鹃(R mucronatum)中分离培养后并用划线法分离得到内生细菌的纯培养物.通过菌落形态的观察和鉴别,革兰氏染色并镜检初步鉴定为5株不同的内生细菌.利用利福平及链霉素梯度平板法筛选得到相应的抗性突变株(3株),此突变株可作为细菌内生性鉴定中的抗生素标记菌株.组织分离时的表面消毒条件和方法直接影响内生细菌的分离纯化结果,表面消毒条件适宜则分离得到的内生细菌多样性增加. 相似文献
6.
通过N^＋离子束诱变斜卧青霉A10,经透明圈法初筛,摇瓶发酵复筛,测定酶活,获得一株高产纤维素酶的突变菌株LA17,酶活达5．48IU／ml．与出发株相比,其产酶能力提高44．20％． 相似文献
7.
通过对钾细菌UV诱变处理,获得了两株正变株,其解钾能力分别为7.05mg/m1(K2O)和10.25mg/ml(K2O),较出发菌株提高1282.35%、1909.80%.并且通过酸碱、温度驯化,得到一株正抗性变异株,其解磷解钾能力分别是73.mg/ml(P2O5),4.41mg/ml(K2O),较出发菌株分别提高35.97%,25.53%. 相似文献
8.
生淀粉糖化菌的选育及发酵条件 总被引：1，自引：0，他引：1
以黑曲霉(Aspergillus niger)523原生质体为对象,经激光、紫外线和亚硝基胍复合诱变,选育出高产生淀粉糖化酶突变株黑曲霉NL-3,其生淀粉酶活力为156μ/ml.产酶最适培养条件为:起始pH4.5,30℃,72小时.K~+、Mg~(2+)对NL—3产生淀粉糖化酶有促进作用;Z_n~(2+)对产酶有抑制作用.酶的最适作用条件为:以玉米淀粉为底物时最适温度50℃,最适pH4.5;以甘薯淀粉、马铃薯淀粉为底物时最适温度60℃,最适pH4.0—4.5.酶在60℃保温15分钟,玉米淀粉为底物的酶剩余活力80%.甘薯淀粉、马铃薯淀粉为废物的酶剩余活力98%. 相似文献
9.
通过对钾细菌UV诱变处理，获得了两株正变株，其解钾能力分别为7．05mg／ml(K2O)和10．25mg／ml(K2O)，较出发菌株提高1282．35％、1909．80％。并且通过酸碱、温度驯化，得到一株正抗性变异株，其解磷解钾能力分别是73．mg／ml(P2O5)，4．41mg／ml(K2O)，较出发菌株分别提高35．97％，25．53％。 相似文献
10.
庄莹 《闽西职业技术学院学报》2008,10(1):120-122
建立了高效液相色谱法测定克雷伯杆菌发酵甘油产物1,3-丙二醇(1,3-propanediol 1,3-PD)含量方法;应用紫外诱变法筛选耐高浓度甘油的高产1,3-PD的变异菌株,较佳的诱变条件为菌体诱变浓度为10-5稀释度,紫外照射时间为6min,经6轮诱变,筛选出了耐90g/L甘油的变异茼株,1,3-PD产量较原始菌株的提高了30%左右. 相似文献
11.
紫外及He—Ne激光诱变猪苓菌株的筛选 总被引：1，自引：0，他引：1
以药用真菌猪苓为研究对象,通过对经紫外及He-Ne激光诱变初筛出的菌株L3-7,Ul-7,LU-7与出发茵株PSo的茵丝生长速率和胞外多糖得率的比较,筛选出了生长速率快、多糖产量高的LU-7诱变茵株.其茵落平均生长速率、茵丝体最大干重和胞外多糖产量分别较出发茵株Pso提高26.5%、25.11%和83.40%.因此,LU-7诱变菌株可作为理想菌株,在育种时有选择地利用. 相似文献
12.
紫外线复合Nd:YAG激光对Bacillus sp.产脂肪酶的诱变 总被引：3，自引：0，他引：3
以Bacillus sp．为出发菌株，经过紫外线诱变，筛选出较稳定的菌株UV-4，其产脂肪酶活力较出发菌株提高了28％；UV-4经过YAG激光诱变处理，得到变株Y-1，其产酶能力在此基础上又提高了41％，且产酶水平较为稳定。 相似文献
13.
黄原胶是由野油菜黄单胞菌发酵生产的重要的商业微生物多糖产品,实验通过微波诱变处理保藏菌株,筛选到一株能以甘蔗糖蜜为碳源发酵生产黄原胶的优良正突变株X12,实验结果表明:在初步确定的实验条件下,该菌株发酵生产黄原胶的产量达22.14 g/L,是未诱变菌株20183的1.53倍,传代实验表明,突变菌株X12的黄原胶产量及性状无大变化,遗传性状稳定。 相似文献
14.
不同诱变剂对醋酸杆菌诱变效果的研究 总被引：3，自引：0，他引：3
用紫外线、亚硝酸钠、2-氨基腺嘌呤、5-溴尿嘧啶、吖啶橙、盐酸羟胺分别诱变醋酸杆菌。在较低致死率的剂量下，用青霉素测定醋酸杆菌对各诱变剂的敏感性，比较其突变率得出，盐酸羟胺诱变效果最好。并用此诱变剂诱变醋酸杆菌，获得产酸能力比原始菌株高几倍的突变菌株，且遗传稳定。 相似文献
15.
16.
《赣南师范学院学报》2020,(3):78-82
从陡水湖、五指峰、阳明山、赣南师范大学校园和井冈山采集土壤样本103份,采用醋酸钠-抗生素法并结合形态学观察和生物测定的方法,分离得到对致倦库蚊幼虫有毒性的芽孢杆菌菌株52株,有毒株占分离菌株总数的32.70%,其中获得高毒力菌株6株.对6株高毒力菌株进行深入研究,生物测定结果表明6株分离菌株对致倦库蚊幼虫LC_(50)值在0.69～1.18μL/mL之间,都可以作为潜在的杀蚊幼微生物资源.光学显微镜观察发现伴胞晶体形态以方形晶体为主.通过16S rDNA序列比对鉴定其种属类型,结果表明6株菌均归为苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis).SDS-PAGE结果发现6株菌株均出现了明显的晶体蛋白条带.该研究结果不仅可丰富杀蚊微生物菌种资源库,还对控制蚊媒传染病爆发具有重要的理论和应用价值. 相似文献
17.
Wei HU Jing LIU Ji-hong CHEN Shu-yang WANG Dong LU Qing-hua WU Wen-jian LI 《Journal of Zhejiang University. Science. B》2014,(11)
研究目的:研究高产黑曲霉突变菌株以玉米粉为原料的生物反应器扩大发酵,以期获得适合于工业化生产柠檬酸的发酵工艺。创新要点:以玉米粉为原料,系统地研究了筛选得到的高产菌株在50 L生物反应器中不同糖浓度发酵生产柠檬酸的特性,最终优化出适合于工业化生产柠檬酸的发酵工艺。研究方法:(1)利用淀粉酶对粉碎后的玉米进行液化,然后过滤,最终得上清液;(2)以50 L生物反应器作为发酵设备,对筛选得到的高产柠檬酸菌株进行扩大培养;(3)通过测定不同培养时期中积累的柠檬酸含量和剩余的残总糖,最终优化出高效率生产柠檬酸的发酵工艺。重要结论:以不同糖浓度的液化玉米粉上清液作为碳源,突变菌株H4002能积累177.7~196.0 g/L的柠檬酸,效率能达到2.96~3.27 g/(L·h),尤其当糖浓度为210 g/L,H4002菌株表现出最佳的柠檬酸生产水平,如柠檬酸积累187.5 g/L,生产效率达3.13 g/(L·h)。上述结果说明了突变菌株H4002拥有快速生产柠檬酸的能力。 相似文献
18.
从土壤中分离得到产壳聚糖酶细菌Yg,利用紫外线对Yg菌种诱变并改变菌种的生活环境,获得4株产壳聚糖酶能力不同的菌株。其中1,2,4号菌株的产酶活性较原菌种提高了近3倍。 相似文献
19.
从土壤中分离得到产壳聚糖酶细菌Yg,利用紫外线对Yg菌种诱变并改变菌种的生活环境,获得4株产壳聚糖酶能力不同的菌株。其中1,2,4号菌株的产酶活性较原菌种提高了近3倍。 相似文献
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为了筛选对禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)具有拮抗能力的放线菌,从小麦根际土壤中分离获得1株具有较好拮抗能力的菌株21-3.根据培养特征、生理生化反应及16S rDNA序列分析的手段对其进行鉴定,并且对该菌株的抑菌活性进行分析.结果表明,菌株21-3为灰略红链霉菌(Streptomyces gri... 相似文献