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采集20例南阳牛的血液,采用酚/氯仿法分离白细胞提取基因组DNA,并且对ANGPTL4基因部分序列(677～998 bp)PCR扩增条件进行了优化。结果表明,获得的牛基因组DNA经0.8%琼脂糖凝胶电泳检测,主条带清晰,表明获得的南阳牛基因组DNA可以用于后续实验;以所提取的基因组DNA为模板,优化ANGPTL4基因片段扩增的条件,结果表明,最理想的PCR扩增条件是模板量为2μL(50 mg/L),Taq聚合酶(5 u/μL)的量为0.8μL,退火温度为56℃,循环次数为35次。 相似文献
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目的:建立猴源溶组织内阿米巴原虫巢式PCR检测方法并初步应用于临床检测;方法:根据溶组织内阿米巴原虫16S r DNA基因序列,设计1对阿米巴属原虫保守引物和1对溶组织内阿米巴原虫特异性引物,建立猴源溶组织内阿米巴原虫巢式PCR检测方法,摸索出了该检测方法的最佳反应条件,进了行特异性和敏感性试验,并对96份猕猴粪便样品进行检测;结果:该巢式PCR方法能特异性地扩增出猴源溶组织内阿米巴原虫目的片段,与莫氏内阿米巴、波氏内阿米巴、迪斯帕内阿米巴、大肠内阿米巴、微小隐孢子虫等11种相关原虫基因组DNA无交叉反应;最低能检测到0.3 fg的阳性参照DNA;对临床样品检测结果表明该PCR技术检查阳性者显微镜检查均为阳性;结论:建立的巢式PCR方法具有高度的特异性和敏感性,对于溶组织内阿米巴原虫病的诊断和流行病学调查具有重要的应用价值。 相似文献
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固定标本DNA提取方法优化的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
刘娟 《赤峰学院学报(自然科学版)》2007,23(4):18-19
本研究报道了一种在福尔马林固定标本中提取DNA的方法:使用磷酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液和乙醇共同处理保存标本,蛋白酶K消化后再用改进的酚氯仿法提取标本基因组总DNA.检验结果证明该方法提取的标本组织DNA可用于PCR等后续分子生物学研究. 相似文献
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目的:建立一种定量、简单、快速、敏感的微小RNA(miRNA,miR)检测方法,并用其观察一些病理状态下有关miRNA的变化.方法:通过特殊设计的茎环结构的反转录引物,对miRNA进行反转录,然后用相应miRNA的正反向引物对该miRNA进行定量检测,观察重复性和特异性.用此法检测了人巨细胞病毒(HCMV)对滋养细胞(HPT-8)细胞内miR-513表达水平的影响,也检测了结直肠癌组织miR-145水平.结果:用该法扩增miRNA特异性强,结果重复性好,该法检测到HCMV感染对miR-513表达的梯度效应.也发现癌组织和正常组织间miR-145的表达有明显的差异.结论:用荧光定量PCR可以对微小RNA快速有效的检测,在临床工作中可得到很好的应用. 相似文献
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根据禽源隐孢子虫GP20基因,设计1对保守引物和1对特异性引物,建立巢氏PCR检测方法,并进行验证.该巢氏PCR能特异性地扩增出496bp的禽源隐孢子虫基因组DNA中相应片段,最低能检测到0.52fg的阳性参照DNA.建立的巢氏PCR方法具有高度的特异性和敏感性,可以用于样品的检测.通过该方法鉴定山东省德州地区养鸡场中感染鸡的隐孢子虫种类为C.baileyi,感染率为31.5%. 相似文献
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为提高实验室病毒核酸检测能力,减少检测人员暴露风险,该研究利用机械臂取代人工操作,整合病毒样本前处理、核酸提取纯化、PCR体系构建、PCR扩增检测4个子系统,并通过优化开盖功能、吸液防堵塞功能及液面追踪功能,实现全流程自动化病毒核酸检测系统稳定运行。优化后,开盖成功率提高至99.13%(P<0.001),吸液成功率提高至99.31%(P<0.001),构建PCR扩增体系成功率提高至98.89%(P=0.005)。通过优化时序管理,实现24小时千人份病毒样本全流程自动化核酸检测,满足高通量精准病毒核酸检测需求。 相似文献
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为了快速检测出实验动物临床样品中的金黄色葡萄球菌（SA），建立了一种普通PCR方法。同时合成3对引物，用金黄色葡萄球菌的阳性核酸DNA做模板，进行引物扩增，筛选出一对能扩增出270 bp单一目的片段的引物。逐一对该引物灵敏度、重复性和特异性进行了测试。实验结果显示，该方法具有高度的特异性，除了识别金黄色葡萄球菌基因组外，对小鼠其他常见病原菌均不发生交叉反应，具有优良的敏感性和稳定性。两个不同操作人员，在两个不同时间段，利用两台不同品牌的PCR仪器，用金黄色葡萄球菌阳性样品进行测试，结果显示此方法再现性良好。用该方法检测待测样本，效果也良好。 相似文献
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LI Zhen WU Ming-hong BAO Bo-rong XIANG Qun College of Sciences Shanghai University Shanghai China 《上海大学学报(英文版)》2000,(Z1)
1 IntroductionWasteWater containing phenol is a kind of industrialwaStowater that has eXtensive resources, and it isseriously hannful to our environxnent. Treatment ofwaSte water containing phenol by solvent extractionmethod generally selects extraCtants such as butylacetate, isopropyl ether, tributyl Phosphate (TBP) and N,N-di (l-methyl-heptyl) acetamide (N503) .to.['"]. Anew type of extractant, N-octanoylprplidine (OPOD),was synthesized in our laboratory for the first time.The experim… 相似文献
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The behavior of phenol of wastewater extraction by N-octanoylpyrrolidine (OPOD) in kerosene was studied. The
dependence of the extraction distribution ratios on the concentrations of extractant, phenol, acidity and temperature was investigated.
By means of the slope method, the composition of the extracted complex was deduced to be C6H5 · OPOD , and the related
thermodynamic functions were also calculated. The IR and NMR spectra showed the presence of intermolecular hydrogen bonding
between phenol and OPOD. The experimental results indicated that OPOD could extract phenol effectively. 相似文献
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目的：探讨原位检测内源性基因表达产物的灵敏方法，研究IgA样新基因SNC66在消化系统肿瘤组织中的表达及其与肿瘤之间的相关性。方法：在组织切片原位逆转录反应后进行原位PCR扩增，在扩增过程中掺入地高辛标记的尿核苷酸，再用免疫组织化学的方法加以检测。比较SNC66在大肠癌、胃癌、肝癌组织与相应的正常配对组织中的表达情况。结果：10个循环时，37例大肠癌标本中有14例呈阴性，18例弱阳性，5例强阳性；20例胃癌标本中有6例呈阴性，9例弱阳性，5例强阳性；所有肝脏组织和肝癌标本都呈阴性表达。25个循环时，大肠癌10例阴性，27例强阳性；胃癌4例阴性，16例强阳性；所有肝脏组织和肝癌组织标本都呈阳性表达。相应大肠粘膜和胃粘膜标本则无论是25个循环，还是10个循环，都呈强阳性表达，但着色程度前者高于后者。结论：原位RT-PCR是一种检测内源性基因低拷贝转录产物mRNA的灵敏方法。基因SNC66是一个消化道肿瘤相关性基因，在大肠癌和胃癌组织中存在明显的表达降低或缺陷，但与肝癌之间不存在相关性。SNC66可作为侯选的消化道肿瘤的抑癌基因加以进一步研究。 相似文献
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小鹅瘟在国内已广泛流行,雏鹅的预防和治疗以鹅抗小鹅瘟血清较为理想,但若用山羊抗小鹅瘟血清,则可获得大量的血清及长时间采血且降低成本,经笔者研制的山羊抗血清具琼扩试验效价达1:16;保护试验保护率达80—100%小范围区域试验保护率达95%。 相似文献
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以总黄酮得率为指标,采用正交试验联合星点设计-效应面法考察乙醇体积分数、提取时间和固液比对西瓜皮总黄酮提取工艺的影响。结果表明正交试验确定最佳提取工艺为30倍量90％乙醇,提取3次,每次120min;星点设计一效应面法确定最佳提取工艺为14.22倍量71.17％乙醇,提取3次,每次48.25min。通过星点设计-效应面法优选的工艺合理可行,且比正交试验设计法更为准确。 相似文献
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比较了有机溶剂提取法、酸热法和超声波提取法对于裂殖壶菌油脂的提取能力．酸热法和超声波提取法的提取得率高于有机溶剂提取法．当氯仿和甲醇以1：1的体积比混合时,油脂提取得率最高．当氯仿和甲醇以2：1的体积比混合时,提取所得油脂中的DHA含量最高．但总提取得率还是以氯仿和甲醇的体积混合比为1：1时为最佳． 相似文献
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Qi WANG Xiaoxia SHEN Tian QIU Wei WU Lin LI Zhi'an WANG Huixia SHOU 《Journal of Zhejiang University. Science. B》2021,22(2):99
Nucleic acids in plant tissue lysates can be captured quickly by a cellulose filter paper and prepared for amplification after a quick purification.In this study,a published filter paper strip method was modified by sticking the filter paper on a polyvinyl chloride resin(PVC)sheet.This modified method is named EZ-D,for EASY DNA extraction.Compared with the original cetyl trimethylammonium bromide(CTAB)method,DNA extracted by EZ-D is more efficient in polymerase chain reaction(PCR)amplification due to the more stable performance of the EZ-D stick.The EZ-D method is also faster,easier,and cheaper.PCR analyses showed that DNA extracted from several types of plant tissues by EZ-D was appropriate for specific identification of biological samples.A regular PCR reaction can detect the EZ-D-extracted DNA template at concentration as low as 0.1 ng/μL.Evaluation of the EZ-D showed that DNA extracts could be successfully amplified by PCR reaction for DNA fragments up to 3000 bp in length and up to 80%in GC content.EZ-D was successfully used for DNA extraction from a variety of plant species and plant tissues.Moreover,when EZ-D was combined with the loop-mediated isothermal amplification(LAMP)method,DNA identification of biological samples could be achieved without the need for specialized equipment.As an optimized DNA purification method,EZ-D shows great advantages in application and can be used widely in laboratories where equipment is limited and rapid results are required. 相似文献
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针禾属植物羽毛针禾基因组DNA提取方法的研究 总被引：3，自引：0，他引：3
传统的CTAB DNA提取法步骤多.较烦琐,DNA产率低,而且由于酚、单宁、色素、多糖很难完全去除,容易影响随机扩增多态、微卫星等标记工作的效率.采用SDS裂解法提取了针禾属植物幼嫩叶片的基因组DNA,所获得的DNA可用于PCR反应.并且在针禾属植物的研究中得到了较好的结果. 相似文献
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高压法提取淫羊藿苷最佳工艺确定 总被引：1，自引：0，他引：1
针对传统提取方法的局限性,在不改变其流程条件下,采用高压提出法对淫羊藿苷提取工艺条件进行了优化．实验表明,采取高压法（5－7MPa）提取淫羊藿苷是一种可行的方法,能够有效地提高目标产物收率．在提取时间、提取次数、固液比和压力四个主要影响因素中,压力因素对本方法提取淫羊藿苷的影响最大,其次是提取次数和时间,而固液比因素对实验的影响较小．高压法提取淫羊藿苷最佳工艺条件为：提取时间10分钟,提取次数2次,固液比1：20．反应温度105℃,反应压力5MPa． 相似文献