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1.
目的应用双向电泳及串联质谱技术，研究不同剂量三氯乙烯（TCE）诱导L-02肝细胞蛋白质表达谱的差异。方法L-02肝细胞分别用不同剂量TCE和溶剂对照（DMSO）处理后，提取细胞总蛋白，双向凝胶电泳分离蛋白质组成分，银染显色，经ImagerMaster 2D Platinum 5．0软件分组分析比较四组图谱，并对差异蛋白斑点进行基质辅助激光解吸／电离飞行时间串联质谱（MALDI-TOF-TOF-MS）分析鉴定。结果得出差异较明显的蛋白质斑点15个，不同剂量TCE刺激后表达分别上调、下调或消失，提示TCE可引起肝细胞蛋白表达发生改变。通过质谱鉴定和IPI human数据库检索，鉴定了其中9个TCE诱导L-02肝细胞相关的蛋白质。结论这些结果为深入研究TCE毒作用相关的蛋白质及TCE毒作用的分子标志物提供依据，并为阐明TCE毒作用的分子机制提供线索。 相似文献
2.
目的研究氧化型低密度脂蛋白(oxidized LDL, ox-LDL)是否能在基因和蛋白两个水平诱导内皮细胞表达凝集素样氧化低密度脂蛋白受体(lectin-like oxidized LDL receptor, LOX-1),以探讨LOX-1在动脉粥样硬化形成和发展中的作用.方法将不同浓度ox-LDL(20,40,60,80 mg/L)与内皮细胞共孵育24 h及浓度40 mg/L的ox-LDL作用内皮细胞不同时间(0、3、6、12、24 h),反转录聚合酶链反应检测LOX-1 mRNA水平表达,细胞酶联免疫法测定LOX-1蛋白水平表达.结果加入Ox-LDL 20 mg/L使LOX-1 mRNA和蛋白表达量增加(P＜0.01),40 mg/L使其表达量达最高峰,随后逐渐下降.而同一浓度下从0 h～24 h的趋势是LOX-1 mRNA和蛋白逐渐增加(P＜0.01),在12 h增加最明显.结论氧化型低密度脂蛋白呈剂量依赖性和时间依赖性地上调LOX-1 mRNA和蛋白表达,LOX-1可能在动脉粥样硬化形成和发展中起重要作用. 相似文献
3.
研究了细胞内存在的分子伴侣、蛋白质聚集和大分子拥挤环境对蛋白质折叠的影响.首先,发现分子伴侣GroEL与底物蛋白的结合有 半位 "和 全位"两种模式,它是由底物蛋白的分子形状、分子大小以及与GroEL的相互作用性质决定的.接着,发现两种不同的蛋白质一起复性时相互不干扰,提示细胞内蛋白质折叠可能不受其他蛋白聚集的影响;后又发现α 乳清蛋白的前熔球态不仅是分子伴侣也是蛋白质聚集体的作用对象.最后,研究大分子拥挤环境对蛋白质折叠热力学和动力学的影响,揭示了这种影响的复杂性和多样性. 相似文献
4.
毒鼠强(tetramine)是一种极强的神经毒,它对所有哺乳动物都有毒性作用,其毒理作用是法医毒理学研究的重要课题。本文通过 对23例毒鼠强中毒的临床表现、尸体征象和运用气相色谱／质谱(GC／MS)联用法对相关检材毒物检验的分析,讨论与法医学鉴定有关 的问题。 相似文献
5.
研究了细胞内存在的分子伴侣、蛋白质聚集和大分子拥挤环境对蛋白质折叠的影响.首先,发现分子伴侣GroEL与底物蛋白的结合有"半位"和"全位"两种模式,它是由底物蛋白的分子形状、分子大小以及与GroEL的相互作用性质决定的.接着,发现两种不同的蛋白质一起复性时相互不干扰,提示细胞内蛋白质折叠可能不受其他蛋白聚集的影响;后又发现α-乳清蛋白的前熔球态不仅是分子伴侣也是蛋白质聚集体的作用对象.最后,研究大分子拥挤环境对蛋白质折叠热力学和动力学的影响,揭示了这种影响的复杂性和多样性. 相似文献
6.
hCLP46(human CAP10-like protein46)是从MDS-AML患者的CD34+干细胞cDNA文库中筛选出的基因.我们利用串联亲和纯化技术来筛选与hCLP46有相互作用的蛋白.通过体内交联-甘氨酸洗脱策略,检测到7条有差异的蛋白带,经液相色谱-质谱联用鉴定,得到了CNX和PDI等一系列内质网伴侣蛋白.所以hCLP46可能是一个糖蛋白,其成熟过程利用了BiP/Grp94和CNX/CRT 2套伴侣蛋白系统. 相似文献
7.
文中分别以苯、甲苯、苯和甲苯为碳源,直接采用地下水和采用加入铁和三氯乙烯(TCE)浸泡过的地下水进行微生物培养和驯化,得到6种不同的菌液,结合PCR-16S rDNA分子生物学鉴定技术,分析其中微生物的群落差异。结果表明:在铁渗透反应格栅(Fe0-PRB)下游的水化学环境中,降解苯和甲苯的微生物优势群落减少,芽孢杆菌属和自养黄色杆菌属是其中的优势群落。地下水地球化学环境变化是微生物落群减少的主要因素。 相似文献
8.
《科学中国人》2015,(26)
目的:构建Visfatin原核表达质粒,诱导表达并纯化重组人内脂素(Visfatin)。方法:从人LO2细胞中提取总RNA后,经RT-PCR法得到人Visfatin的c DNA序列,用以构建带HIS标签的Visfatin重组质粒。然后将重组质粒转化到大肠杆菌BL21中,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,用Ni柱亲和层析纯化融合蛋白。结果:PCR扩增出的目的基因片段为1600 bp左右,与理论大小一致。SDS-PAGE、Western blot、质谱分析数据证明了蛋白是Visfatin融合蛋白。结论:成功的表达并纯化得到带HIS标签的Visfatin融合蛋白。 相似文献
9.
目的:研究穿心莲内酯对小鼠肝细胞色素P450的影响。方法:小鼠给药穿心莲内酯或3-甲基胆蒽后,分别测量小鼠肝脏内P450酶的总含量、CYP1A1/2的活性和蛋白表达等指标。结果:穿心莲单独给药时,对CYP1A1/2的活性及蛋白表达没有影响。穿心莲内酯和3-甲基胆蒽联合给药时对CYP1A1/2的活性呈诱导作用,同时CYP1A1/2的蛋白表达均显著高于空白对照。结论:穿心莲内酯与3-甲基胆蒽联合用药时对小鼠肝P450的活性及蛋白表达均显示出一定的调控作用。 相似文献
10.
《科学中国人》2015,(26)
目的构建SLO原核表达质粒,重组蛋白的诱导表达并纯化。方法提取链霉菌溶血素O模板DNA,PCR法扩增slo基因。构建融合表达重组质粒p GEX-6p-1-slo和pet32a-tev-slo,将正确的重组质粒转化至大肠杆菌BL21和大肠杆菌BL21-DE3,使用异丙基硫代βD半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组融合蛋白。采用亲和层析纯化重组蛋白,切除标签后,再通过亲和层析纯化,获取SLO重组蛋白。结果 PCR扩增出slo基因,基因片段(1700 bp)与理论一致。经SDSPAGE,蛋白质印迹显示重组蛋白相对分子质量为55 k Da,与数据库中的相对分子质量结果相符。结论成功构建了slo原核表达质粒,表达并纯化了SLO重组蛋白。 相似文献