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利用均匀设计法对Bacillus sp．ZJU318产酶的最佳培养基进行了快速优化研究。结果表明，其最适产酶培养基为：3．28％黄豆粉，0．023％蔗糖，0．075％K2HPO4，配制时的pH为12（灭菌后pH为8～9）；此外，其发酵的最佳条件为：发酵温度28℃，接种量20％，摇瓶装量20mL（250mL三角瓶）。在最适的发酵条件下，脂肪酶的发酵水平可达24．7U／mL。Bacillus sp．ZJU318脂肪酶作用的最适温度为45℃，40℃保温1h，活力几乎没有损失；但是，在50℃和60℃的条件下保温1h后，酶活降低得比较明显；酶作用的最适pH为9．0。在pH7～10，该脂肪酶较稳定，但是在酸性的环境中，酶的稳定性较低。 相似文献
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对黑曲霉HYA4菌株所产果胶酶的酶学性质进行了研究。结果表明：该酶反应最适温度为48℃,果胶酶最适pH值为4.8,果胶酶活力稳定的pH范围为3.0-6.0;Km值为4.33mg/mL;金属离子Ca2＋、Mg2＋对果胶酶有较强的激活作用,Ba2＋对果胶酶也有一定的激活作用,Ag＋、Mn2＋、Zn2＋、Fe3＋、K＋对果胶酶有抑制作用。由SDS-PAGE测定果胶酶的相对分子量为46000＆#177;3000Da;IEF电泳测定其等电点为4.7＆#177;0.2。 相似文献
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厌氧真菌能够产生高比活力的纤维素酶,但由于对厌氧环境的生产条件要求严格,生长速度缓慢,并不适合规模生产。本研究将厌氧真菌内切型-β-葡聚糖酶基因af1与大肠杆菌表达载体pET-28a(+)连接,得到重组质粒pET-28a(+)-af1。以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主,重组质粒转化后获得重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET-28a(+)-af1。采用SDS-PAGE蛋白电泳对重组大肠杆菌的表达产物进行分析,在40 kDa附近得到与目的基因af1表达蛋白理论值相当的明显条带。AF1酶蛋白的最适pH为6.0,最适温度为45°C。重组大肠杆菌的摇瓶产酶试验结果显示:诱导培养18 h时,内切型-β-葡聚糖酶(CMC酶)活力可达410 U/mL。该项研究工作为进一步构建内切型-β-葡聚糖酶高产菌株奠定了良好的基础。 相似文献
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糖化型淀粉酶催化淀粉水解生成葡萄糖,可供葡萄糖工业、酿酒和氨基酸工业应用。准确测定糖化型淀粉酶活力,合理用酶对提高生产效率,降低成本具有重要意义。碘量法是测定糖化型淀粉酶活力的常用方法。其基本原理糖化型淀粉酶可催化淀粉水解,生成葡萄糖。葡萄糖具有还原性,能被碘氧化。用碘量法测定糖化型淀粉酶活力,操作稍有不慎,误差很大,结合酶作用理论,体会到提高糖化型淀粉酶活力测定的准确性,必须注意几点：一酶反应时间的选择。二是酶的控制。 相似文献
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黑曲霉Aspergillus nigerS菌株所产β-葡糖苷酶 的纯化和酶学性质 总被引：1，自引：0，他引：1
利用黑曲霉Aspergillus niger S菌株, 通过液体发酵的方法, 得到了一种可同时高效水解大豆异黄酮糖苷成大豆异黄酮,水解白藜芦醇苷成白藜芦醇的糖基水解酶.该酶经硫酸铵分级沉淀、离子交换层析及分子排阻色谱纯化得单一条带, 经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测得该酶的表观分子量约为165ku 1u=1.660540×10-27kg。 ,比通常所报道的传统β-葡糖苷酶都大,该酶的最适反应温度为50℃; 最适pH值为5~10. 相似文献
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碱性纤维素酶产生菌的筛选及其产酶条件 总被引：4，自引：0，他引：4
从土壤样品中筛选到一株产碱性纤维素酶的菌株ＳＹＨ－１,产酶的最适碳源为麸皮,最适氮源为豆饼粉,摇瓶发酵最高酶活２５ｕ／ｍＬ,酶反应的最适温度为５０℃,ｐＨ为９．６,主要作用底物为ＣＭＣ,对滤纸,纤维素粉和结晶纤维素几乎作用。 相似文献
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采用磷酸盐作为缓冲溶液从金针菇中提取多酚氧化酶,并对其特性进行研究。以邻苯二酚为底物,采用分光光度法对金针菇(PPO)活性进行研究,该酶的适宜温度35℃,最适pH值为6.5,抗坏血酸和柠檬酸可以有效抑制PPO的酶活力,柠檬酸对PPO抑制随浓度不同而改变。 相似文献
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一株嗜热梭菌β-葡聚糖酶基因的克隆和表达 总被引：1，自引：0，他引：1
提取嗜热梭菌(Clostridium.sp)基因组DNA,首次通过PCR克隆了该菌的β-葡聚糖酶基因全长,结果表明:该基因全长1040bp,ORF为1003bp,编码334个氨基酸,计算分子量为37.8kD,等电点为7.67。经Blast分析,该序列与热纤梭菌同源性最高(99%),而与基因库中嗜热梭菌的同源性为94%,该基因已被GenBank接受(AY225318)。用BamHⅠ和XhoⅠ双酶切目的片段和表达载体pET鄄30a( )后相连接,构建重组表达载体pET鄄clo,并导入BL21细菌中表达.酶学特性表明:SDS鄄PAGE电泳在37kD左右有表达蛋白带,该工程菌最适酶活29.4U/mL,是出发菌的15倍,最适温度在80℃左右,最适pH在9左右。该工程菌可构建耐热性好、酶活高的杂合基因工程菌。 相似文献
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纤维素分解菌的分离、筛选及其环境适应性初步研究 总被引：14，自引：0，他引：14
以滤纸平板和羧甲基纤维素钠培养基为基础培养基,从采集的样品中筛选出具有分解纤维素能力的38株菌株。采用纤维素刚果红培养基进行粗选,得到10株透明圈较大的菌株。将这10株菌株进行液体发酵培养,测定其酶活力,得到4株分解纤维素能力较强的菌株。对这4株菌株进行碳源、温度、pH值的适应性研究。结果发现,真菌3和真菌6的适应性都比较好。 相似文献
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南极假丝酵母(Candida antarctica)脂肪酶A在毕赤酵母中的表达、纯化及性质 总被引：1，自引：0，他引：1
将编码南极假丝酵母脂肪酶A的基因进行克隆,与pPIC9K连接构建成重组载体,并将其电转化入毕赤酵母GS115中。通过MD和MM平板及PCR扩增,筛选和鉴定重组子。重组细胞经过120 h培养后,发酵液上清酶活达到13 U/mL。聚丙烯酰胺凝胶电泳显示,重组脂肪酶分子量约为50 kD,比原始脂肪酶略大。粗酶液经中空纤维素膜超滤浓缩、硫酸铵分级沉淀和离子柱交换层析后,得到在SDS-PAGE上显示为单一条带的重组脂肪酶。该酶最适反应温度为75℃,在70℃保持30 min后,仍具90%以上的活性,最适反应pH值为7.0,在pH6.0～8.0的范围内,具有一定的稳定性。 相似文献
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南极假丝酵母(Candida antarctica)肪酶A在毕赤酵母中的表达、纯化及性质 总被引：1，自引：0，他引：1
将编码南极假丝酵母脂肪酶A的基因进行克隆,与pPIC9K连接构建成重组载体.并将其电转化入毕赤酵母GS115中.通过MD和MM平板及PCR扩增,筛选和鉴定重组子.重组细胞经过120 h培养后.发酵液上清酶活达到13 U/mL.聚丙烯酰胺凝胶电泳显示,重组脂肪酶分子量约为50 kD.比原始脂肪酶略大.粗酶液经中空纤维素膜超滤浓缩、硫酸铵分级沉淀和离子柱交换层析后.得到在SDS-PAGE上显示为单一条带的重组脂肪酶.该酶最适反应温度为75 ℃,在70℃保持30 min后,仍具90%以上的活性,最适反应pH值为7.0,在pH6.0～8.0的范围内,具有一定的稳定性. 相似文献
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己酸乙酯酯化酶产生菌的自然选育及其酶学特性的初步研究 总被引：1，自引：0，他引：1
通过对窖泥、大曲、米曲、黑曲及红曲中微生物的分离、筛选，获得两株己酸乙酯合成能力较强的菌株，经初步鉴定，都归于曲霉属。两菌株均在３０℃、ｐＨ为５的麸皮培养基中培养６０ｈ后产酶最高；Ｍｍ－４菌株的酯化酶在适宜条件下（２％乙醇和０．２５％的己酸作底物，ｐＨ为４．０，３０℃）酶活力可达２２０ｕ／ｇ。 相似文献
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本实验首先在MS基本培养基上培养盐地碱蓬(SuaedaSalsa(L.)Pall.)的无菌苗,然后用上述无菌苗茎段为外植体在MS1培养基上诱导培养,初始愈伤组织为深黄色、非松脆型,愈伤组织诱导频率为95.64%以上.在继代培养基MS2上继代数月后得到了生长旺盛、疏松、呈乳白色的愈伤组织,用不同组成浓度的酶解液酶解松散型愈伤组织,进一步分离、提纯制备出具有活力的原生质体.以愈伤组织为材料制备原生质体的最适酶解液浓度为10g/L纤维素酶 5g/L离析酶 0.6mol/L甘露醇 0.05mol/L CaCl2.2H2O 0.1%MES.最适酶解时间为12-16h. 相似文献
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拜氏梭菌(Clostridium beijerinckii〗)NRRL-B593在葡萄糖基质中可以代谢产生丁醇、乙醇、异丙醇。乙醇脱氢酶(ADH)是产生醇类的关键酶,比较了拜氏梭菌(C.beijerinckii)NRRL-B593在葡萄糖基质与氨基酸基质中ADH活性,为进一步研究该菌株的代谢及表达调控提供理论基础。首先通过监测C.beijerinckii NRRL-B593在不同培养基中D_(600)值,绘制生长曲线,后在8000 r/min,10min下收集对数期与稳定期的细胞,利用厌氧型细胞破碎仪French Press获得无细胞抽提物(CFE),最后通过Bradford法测量蛋白质含量,在厌氧条件下利用丙酮为底物,NADPH依赖型的氧化反应测其酶活力。结果显示,稳定期的ADH酶活力远远高于对数期酶活力高,氨基酸培养基中的ADH酶活力高于葡萄糖培养基。 相似文献
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《科技风》2017,(17)
对一株产纤维素酶的黄曲霉进行发酵条件优化和酶学性质初步探究,利用DNS法测定CMC酶活、滤纸酶活,结果显示此菌株纤维素酶最佳反应温度为50℃,最佳反应pH为7.0。在金属离子中,发现Zn~(2+)具有抑制作用,最大抑制浓度为0.4 mg/m L,Mg~(2+)、Mn~(2+)、Ca~(2+)、Fe~(3+)、Fe~(2+)具有促进作用,最适浓度分别为0.4、1、1、0.8、1.4 mg/mL。蛋白胨和酵母粉具有促进作用,最适浓度分别为1.0%、0.6%,最适pH为6.0。综合优化后,测得滤纸酶活和CMC酶活分别为7.73 U/mL、11.28 U/mL,相比优化前提高了38.8%和43.7%。 相似文献
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本篇文章所涉及的菌株因为能够在实验室条件下能够较好的释放代谢产物和表面活性剂,并具有较强的产酸产气潜力,因此可以在微生物驱油上可以有发挥的空间,因此本文对菌株的最适培养条件进行了研究和探讨。确定了该菌株的最适发酵条件,从而确定了该微生物在石油工业上应用的潜质。 相似文献
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酵母茵筛选中得到可以耐14％的酒精度,在酸度较大的环境（pH3．5～4．0）中可以很好的生长繁殖,而对照菌株的最适ph是4．5～5．0之间,并且具有很强的耐酸性能。这在奶酒后期的发酵中能起到很大的作用,能够在相同的条件下,提高产酒精量与降糖量,使奶酒的整体风味非常好。基于此,本文对甜乳清发酵型乳清酒酵母茵的筛选进行了研究和探讨。 相似文献