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质粒常被用做基因的载体．纯化质粒DNA的方法可以分为3种：碱裂解法、煮沸裂解法和SDS碱裂解法．这些方法可以纯化共价闭合环结构质粒DNA,而大量获得高纯度的闭环结构质粒DNA最经典方法是氯化铯．溴化乙锭密度梯度离心法．该方法经过我们的实践与优化,减少了质粒中蛋白质和基因组DNA的污染,提高了质粒的纯度和得率,所得到的质粒用于拟南芥原生质体转化,效率高达60％～70％,明显高于普通的质粒小量抽提试剂盒所提取的质粒DNA． 相似文献
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本研究对大肠杆菌进行紫外照射诱变后,获得了通过其内部的SOS修复系统产生的突变菌株,采用异丙醇沉淀法对各组菌种进行质粒DNA提取.通过测定各组OD值,经过比较与分析得出了经紫外处理10min后的大肠杆菌质粒DNA浓度最高,为215ug/ml,其次为正常组的190ug/ml.经紫外照射30min后的大肠杆菌质粒DNA浓度最低,仅为65ug/ml.紫外处理时间与质粒DNA浓度整体呈现下降趋势.初步推测是由于大肠杆菌SOS修复系统的RecA蛋白促进了不完全同源的DNA序列之间的重组,产生大量的错配碱基,从而引起突变,进而影响到其质粒DNA的浓度. 相似文献
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沙棘体内酚类物质和蛋白质含量较高,影响了基因组DNA提取的产量。采用改良CTAB法对观光木基因组DNA进行提取,经过紫外吸收、琼脂糖凝胶电泳、双酶切和AFLP标记检测,结果表明:改良CTAB法提取的基因组DNA吸光值OD260/OD280为1.7～1.9,DNA无降解现象和杂质污染;基因组DNA双酶切彻底,并且APLP扩增的条带较多而且清晰。从而建立了适合沙棘AFLP分子标记的反应体系,为利用AFLP标记对沙棘进行分子生物学研究及分子育种奠定了基础。 相似文献
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1从原核生物中分离纯化出来的限制酶是否会切割自身的DNA？构建好的重组质粒若以大肠杆菌等原核生物为受体细胞,是否会被其中的限制酶切开而不能起作用呢？ 相似文献
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利用CTAB法提取蝴蝶兰的基因组DNA 总被引：1，自引：0，他引：1
利用CTAB法对蝴蝶兰的根、叶、花等不同部位进行基因组DNA的提取，然后分别用紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳法检测DNA的质量，结果表明，3个部位都可以获得较完整的基因组DNA，电泳条带清晰，无拖尾现象．其中根部提取的DNA纯度最高，OD260／OD280为1．6545；其次为叶，OD260／OD280为1．5351；花的DNA纯度最低，仅为1．3820． 相似文献
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为了建立一套基于大肠杆菌表达系统的嵌合式高保真DNA聚合酶的重组表达与纯化的工艺,首先将含有目的基因的质粒转化至大肠杆菌BL21中,通过高压破碎仪进行细胞破碎,再用离子交换层析方法获得嵌合型高保真聚合酶。优化反应条件显示在28℃自动诱导下表达的嵌合DNA聚合酶蛋白产量较高。利用高压破碎仪将细胞破碎获得可溶蛋白,然后利用硫酸铵沉淀将蛋白粗纯,并采用离子交换层析柱纯化,最终获得较纯的DNA聚合酶。通过对获得的嵌合DNA聚合酶进行活性分析,证实该聚合酶具有高效的活性,为以后大规模生产高保真DNA聚合酶奠定基础。 相似文献
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通过两种从大肠杆菌中提取重组质粒pRSETDNA不同方法的比较,寻找提取重组质粒pRSET DNA的切实可行的方法.将含有目的质粒的菌株分别采用SDS碱裂解法和煮沸法进行质粒DNA小量提取,采用DU800核酸蛋白分析仪测定质粒DNA的产量及纯度.结果SDS碱裂解法获得质粒DNA产量为5.61 μg/ml菌液,A260/280=1.95;煮沸法获得质粒DNA产量为4.36μg/ml菌液,A260/280=1.78.与煮沸法相比,SDS碱裂解法获得质粒产量更多,纯度更高,更适合分子生物学常规实验的要求. 相似文献
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邓宁 《商丘师范学院学报》1996,(Z4)
质粒ＤＮＡ的提纯是现代分子遗传学和基因工程的重要技术，本实验对质粒ＤＮＡ的提取和纯化方法进行了比较研究．并通过改进，建立了简便、快速提取和纯化质粒ＤＮＡ的方法．利用此法所提质粒ＤＮＡ收率大，纯度高，能适于细菌转化、细胞转染及酶切分析等进一步实验研究． 相似文献
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采用液氮研磨法、反复冻融法、反复冻融-溶菌酶法、溶菌酶法、超声波法、超声波-溶菌酶法对节旋藻TJCU-7的藻细胞进行破碎,用改进的CTAB法提取基因组DNA,通过凝胶电泳检测,核酸浓度、纯度测定及PCR扩增效果来评价各破壁方法的优劣。结果发现,6种方法对节旋藻均有较好的破壁效果:经反复冻融法、溶菌酶法及反复冻融-溶菌酶法破壁后所获得的DNA浓度(2 000 ng/μL)显著高于其他方法,其中液氮研磨法所得的DNA浓度最低(40 ng/μL)。除超声波法所得DNA的OD260/OD280值大于2.00,说明有部分RNA污染外,其余方法所得DNA的OD260/OD280的值均在1.90~2.05,纯度较高。经PCR扩增后均得到了2 kb的目的片段,可以满足基本的生物学实验要求。综合考虑,反复冻融法,溶菌酶法简单、快速,破壁效果好,是节旋藻DNA提取时的优先考虑方法。 相似文献
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快速纯化高活力基因工程Taq DNA聚合酶 总被引：3，自引：0，他引：3
用含有TaqDNA聚合酶基因的pTaq表达质粒转化E.coli DH5α菌株，IPTG诱导表态TaqDNA聚合酶。利用该酶的热，经两轮－70℃深度冷冻和75℃水浴，细菌裂解释放内容物，以高速离心除去冻融变性的细胞碎片及核酸蛋白的复合以达到快速纯化Taq DNA聚合酶的目的。PCR扩增反应表明所制备的Taq DNA聚合酶的活力、敏感性、特异性均达到试验要求。该方法具有快速简便的优点。 相似文献
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对纯化的家蚕微孢子的DNA抽提及PCR检测灵敏度进行了研究。结果显示:以0.1mol/L K2CO3 0.1mol/L KHCO3作为诱导剂诱导人工纯化的微孢子发芽是最佳选择,配合proteaseK法,能较好地抽提微孢子的DNA;PCR检测灵敏度研究发现,最低检测微孢子核酸浓度是3.25×10-2pg(25μl反应体系),溶液中只要有4粒微孢子即可检出。 相似文献
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对DNA粗提取与鉴定实验进行优化,探究植物组织的多种破碎方法对DNA粗提取的影响,并用氯仿等有机物对DNA粗提取物进一步纯化,分析DNA未纯化与纯化后的纯度差异。结果显示,相较于破壁机破碎、加液氮研钵研磨以及玻璃匀浆器研磨,不添加液氮用研钵研磨效果更好。DNA粗提液经纯化后纯度显著提高,蛋白质及盐类等污染明显减少。 相似文献
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质粒DNA提取方法的比较 总被引：1，自引：0，他引：1
以含有原核表达载体pet21a和真核表达载体EGFP的DH5α系列菌株为材料,分别采用碱裂解法和试剂盒提取法提取质粒DNA,通过凝胶电泳分析,对两种质粒提取方法的各自特点进行了比较与分析。认为碱裂解法和试剂盒提取法提取质粒DNA均可进行后续试验,但试剂盒提取法具有省时、简洁、高效的优势。同时根据在实验过程中所遇到的问题,说明了在进行质粒DNA提取过程中应当注意的问题。 相似文献
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《实验室研究与探索》2016,(3):4-8
实时荧光定量(PCR)方法已成为阪崎肠杆菌的可靠检测方法。为了保证该方法检测结果的准确性、可靠性和可比性,研制了4种质粒DNA标准物质,其分别含有一种阪崎肠杆菌PCR检测靶基因(MMS,ITS,16S r DNA,omp A)。采用紫外分光光度法(UV)和高分辨电感耦合等离子体质谱法(HR-ICP-MS)对标准物质进行定值,对该标准物质的均匀性、稳定性进行了评估,并对定值不确定度进行了评定。结果显示,4种质粒DNA标准物质量值可靠,均匀性和稳定性良好,可以在-20℃下保存1 a以上。4种质粒DNA标准物质的最终定值结果为(52.3±1.8)、(62.4±2.1)、(75.1±2.1)和(85.7±2.6)ng/μL(k=2)。对质粒DNA标准物质与阪崎肠杆菌基因组DNA的可替代性进行了研究,证明研制的质粒DNA标准物质可以替代阪崎肠杆菌基因组DNA对阪崎肠杆菌进行检测,满足阪崎肠杆菌检测实验室质量控制和方法验证的需求。 相似文献
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黄道发 《中山大学学报论丛》1992,(3)
本文介绍一种较为简便的λDNA纯化方法。经高速离心得到病毒宿主大肠杆菌的噬菌体颗粒后,采用酸、酚等处理。经纯化的λDNA样品,达到电泳纯的要求。 相似文献