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在农药三唑磷作用下,miRNA的表达发生改变;并通过与靶基因的配对,从而调控基因的表达.本文采用荧光定量PCR和Western blot等方法对miR-99及其潜在靶基因ckmt2的表达变化进行了研究.结果表明,三唑磷处理后miR-99表达是对照的0.062倍,助剂处理是对照的0.414倍,表达下调;三唑磷处理后ckmt2基因是其对照的0.91倍,助剂处理是其对照的0.89倍,在mRNA水平变化不显著.三唑磷及助剂处理后,斑马鱼的总蛋白含量减少,CKMT2蛋白含量增加,采用独立样本检验方法分析结果表明,处理前后的CKMT2蛋白质含量差异显著.综上所述,在三唑磷作用下,斑马鱼miR-99对潜在靶标基因ckmt2的表达可能存在抑制作用,miR-99表达的降低致使对ckmt2表达抑制的作用减弱,从而提高ckmt2的表达. 相似文献
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《科技风》2021,(15)
目的:探究microRNA-369-5p(miR-369-5p)在糖尿病心肌病心肌组织与心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts CFs)活化增殖中的表达变化。方法:通过腹腔注射链脲佐菌素(STZ)构建大鼠糖尿病心肌病模型,体外应用高糖诱导CFs细胞活化增殖模型。利用HE、Masson染色,观察心肌组织病理改变及胶原分布情况。应用qRT-PCR检测CFs细胞中miR-369-5p的表达。qRT-PCR和Western blotting实验检测α-SMA、Collagen I mRNA与蛋白的表达;结果:HE和Masson染色显示糖尿病心肌病大鼠心肌胶原沉积明显增多,细胞相对排列紊乱,细胞大小不一。Western blotting实验表明与正常组相比,糖尿病组和高糖组的α-SMA与Collagen I的表达增长;qRT-PCR实验表明与正常组相比,高糖诱导CFs细胞中miR-369-5p表达降低,而α-SMA与Collagen I的表达增加。结论:miR-369-5p在糖尿病心肌病心肌组织与高糖诱导CFs细胞中表达降低,提示miR-369-5p可能是影响糖尿病心肌病形成的潜在作用靶点。 相似文献
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<正>MicroRNA(miRNA)是一类进化上保守的,长度约22个核苷酸的内源性单链非编码小分子RNA。它能通过与靶mRNA特异的碱基配对引起靶mRNA的降解或翻译抑制,从而对基因进行转录后的表达调控。目前普遍认为miRNA在细胞的分化、增殖和凋亡,个体的发育,机体的代谢,病毒的易感性等多种疾病中都发挥着重要的作用[1],近年来的研究表明,miRNA在乳腺癌的发生发展中也有着密切的关系,本文就miRNA及其在乳腺癌发生发展中的作用进行叙述。 相似文献
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《科技风》2021,(20)
目的:探究微小RNA-146a(miR-146a)与趋化因子受体4(CXCR4)在糖尿病心肌病心肌成纤维细胞(CFs)中的表达变化。方法:提取原代心肌成纤维细胞(Cardiac fibroblasts, CFs),高糖(33.3mmol·L~(-1))作用CFs。用qRT-PCR检测CFs中miR-146a的表达,Western blotting检测CFs中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原前胶原A1(Col1A1)、CXCR4蛋白的表达情况。MTT检测高糖对CFs增殖活性的影响。结果:与正常对照组相比,高糖诱导后的CFs中miR-146a表达量降低,而高糖诱导后的CFs中α-SMA、Col1A1、CXCR4表达增加。并且高糖处理后CFs增殖活性提高。结论:糖尿病心肌病形成过程中CFs中miR-146a表达下调,而CXCR4表达上调,提示miR-146a与CXCR4糖尿病心肌病的病程中可能存在潜在的调节关系,有助于探索糖尿病心肌病的病理机制。 相似文献
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从拟南芥中克隆得到AtACO3基因的全长cDNA序列.半定量PCR实验结果表明,200 μmol/L CuCl2处理能明显抑制该基因的表达,而200 μmol/L ZnCl2处理1h则可显著促进其表达.为验证AtACO3蛋白N端的功能,构建AtACO3 5端1632 bp基因片段的原核表达载体pET30a-AtACO3-N,并转化大肠杆菌.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测结果显示,该基因片段可以在大肠杆菌中稳定表达.进一步的抗性实验表明,异源表达基因AtACO3的N端序列能提高大肠杆菌的Zn2+耐受性. 相似文献
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采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）的方法对可育转基因栽培小麦鄂恩1号（EN1）和鄂麦11号（EM11）植株的T1代种子中的谷蛋白亚基成份进行分析，验证种子中是否含有对增强小麦展弹性有显著作用的转基因胚乳特异性表达产物——优质高分子量谷蛋白亚基（HMW—GS）。转基因株D193种子中连锁表达两种亚基基因1Dx5和1Dy10，转基因株D185和D186则均表达其中的1Dx5亚基基因，不同基因型受体可能影响转基因的连锁表达。Χ^2检验表明鄂麦1号、鄂麦11号二种基因型T代种子中转基因表达蛋白1Dx5和1Dx5＋1Dy10产生的表型比均符合预期分离比3：1（P〉0．05），两种外源基因在小麦基因组中可能均为单位点整合。表明遗传转化分子育种可以成为改良我国小麦加工品质的有效途径。同时并讨论了SDS-PAGE有效检测转基因在早期世代表达的关键步骤。 相似文献
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hCLP46是从MDS-AML的CD34＋细胞cDNA文库中筛选出的一个新的基因，为了进一步对该基因进行功能、性质研究，本实验利用RT-PCR技术对该基因进行了组织特异性表达检测，并将该基因构建到真核表达载体pcDNA3.1(+)中，转染U937细胞，发现过量表达该基因的U937细胞能够抑制TGF-对p15基因的上调。此外，利用生物信息学手段对该基因进行序列分析，得到其启动子区存在一个典型的“CpG island”。提示该基因有可能参与甲基化调节途径。通过本文的研究，为进一步研究该基因的作用机制打下基础。 相似文献
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家蚕丝胶蛋白基因1(ser-1)启动子的克隆及其活性分析 总被引：1，自引：0，他引：1
家蚕ser-1基因是中部丝腺中特异表达组织特异性基因。为研究家蚕ser-1基因在时空上的调控机制,用PCR的方法克隆了家蚕ser-1基因启动子并进行序列分析,进一步构建了由ser-1基因启动子驱动报告基因DsRed的新型表达质粒pSK-ser-DsRed-PolyA,并通过蚕体和家蚕BmN细胞进行了瞬时表达。结果显示,家蚕ser-1基因启动子的TATA框的保守序列为TATAAAA,位于-24～-30处,CAAT框位于-112～-115处;ser-1基因启动子可以驱动红色荧光基因DsRed在家蚕幼虫的中部丝腺组织和培养的BmN细胞中瞬时表达。 相似文献
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目的:探讨幽门螺旋杆菌感染胃癌组织中细胞周期调节因子p27、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和巨噬细胞移动抑制因子(MIF)蛋白与幽门螺旋杆菌感染的相关性。方法:以我院2015年2月到2018年2月间的72例存在幽门螺杆菌的胃癌患者进行研究,另取30例正常胃黏膜组织标本,进行p27、Cyclin D1、MIF蛋白表达水平的测定,进行相关性的分析。结果幽门螺杆菌感染组和正常组的p27、Cyclin D1、MIF蛋白阳性表达率间有明显的统计学差异产生(P0.05);多因素结果显示,胃癌组织中p27、Cyclin D1、MIF蛋白表达与疾病临床分析和浸润程度有关,数据间有明显的统计学差异产生(P 0.05)。结论:幽门螺旋胃癌组织中p27、Cyclin D1、MIF蛋白表达与幽门螺杆菌感染间存在相关性,可能在胃癌的发生与发展中起着重要作用。 相似文献
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肿瘤多药耐药 (multidrugresistance ,MDR)是临床化疗成功最为严重的障碍 .首先阐明了新拓扑异构酶II抑制剂沙尔威辛对MDR肿瘤细胞直接的细胞毒性作用及下调mdr 1基因和P 糖蛋白的作用 .沙尔威辛能有效杀伤MDR细胞株 ,如K5 62 A0 2 ,KB VCR和MCF 7 ADR细胞 ,其杀伤能力与对相应亲本细胞相当 ,而明显强于几种临床常用的抗癌药物 .沙尔威辛下调mdr 1基因和P 糖蛋白的表达 ,但并不影响MRP和LRP基因 .其次 ,揭示了转录因子c jun的激活 ,在沙尔威辛下调K5 62 A0 2细胞内mdr 1基因表达及诱导凋亡过程中起着关键作用 .沙尔威辛增加K5 62 A0 2细胞的c jun表达明显早于其减少mdr 1基因的表达 ;c jun反义寡核苷酸消除沙尔威辛升高c jun蛋白、下调mdr 1基因表达的作用 .沙尔威辛还促进JNK和c jun磷酸化并增强转录因子AP1的DNA结合活性 .此外 ,c jun反义寡核苷酸还抑制沙尔威辛的凋亡诱导和细胞毒性作用 .最后 ,进一步研究发现沙尔威辛本身不引起MDR表型 .成功建立了对沙尔威辛具有 8 91倍耐药的A5 4 9 SAL细胞株 .该细胞株对抗代谢药产生 6.70倍的耐药 ,但对多种其他天然来源的抗肿瘤药物、烷化剂以及铂类化合物则缺乏交叉耐药性 . 相似文献
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p53结合蛋白1(p53 binding protein,53BP1)是一种参与DNA损伤检查点活化和DNA损伤修复的关键蛋白之一。已知在结肠癌中,BRCA1基因的突变会使患结肠癌的风险增加,而磷酸化53BP1是其功能的表现形式。为研究磷酸化53BP1与结肠癌发生发展的关系,我们制备特异性磷酸化53BP1多克隆抗体,经RNA干扰技术、蛋白免疫共沉淀(Co-IP)、蛋白免疫印迹(WB)等实验验证抗体的特异性。随后通过免疫组织化学染色(IHC)方法对31例临床结肠癌组织标本进行染色,并结合临床病例资料进行分析。实验结果表明,磷酸化53BP1在结肠癌组织中的表达明显高于癌旁组织,且在TNM分期I-II期结肠癌患者中,磷酸化53BP1高表达病例数比例(13/16)显著高于III-IV期患者中的高表达病例数比例(7/15)(p0.05),同时磷酸化53BP1高表达病例数比例在未发生淋巴结转移和发生淋巴结转移的病例中差异显著(p0.05)。这些研究结果表明,磷酸化53BP1高表达可作为结肠癌分期(I-II期)和未发生淋巴结转移的潜在标志。 相似文献
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目的:研究巨噬细胞移动抑制因子(MIF)是否通过PI3K/AKT通路对肺腺癌A549细胞的增殖、凋亡、迁移产生影响。方法:免疫组织化学技术检测MIF抗体在肺腺癌癌组织和癌旁组织中的表达情况,DEME完全培养基培养肺腺癌A549细胞株作为对照组,加入不同浓度人重组巨噬细胞移动抑制因子(rh MIF)和PI3K/AKT特异性抑制剂LY294002预处理作为实验组,应用MTT(噻唑蓝比色法)观察A549细胞株的增殖情况,(2) FCM(流式细胞仪技术)检测A549细胞株凋亡情况(3) Western-Blot测定A549细胞株PI3K、p AKT及相关抗凋亡抗体p53、Bcl-2蛋白表达情况。结果:(1)免疫组化发现MIF在肺腺癌癌组织中高表达,且高表达率与癌旁组织有显著差异(2)经rh MIF刺激后PI3K、p AKT、p53、Bcl-2表达更明显,迁移更显著;(3) rh MIF对A549细胞株作用均呈浓度-时间依赖性,rh MIF在50 ng/ml 24 h对A549细胞增殖率最高,LY294002在25μmol/L 24 h对A549细胞抑制作用最显著。结论:MIF在肺腺癌中高表达,肺腺癌细胞中加入rh MIF,rh MIF刺激A549细胞株增殖、迁移,抑制凋亡,与LY294002共同作用下,A549细胞株增殖率和迁移力下降、凋亡率升高,表明MIF有可能通过PI3K/AKT通路对肺腺癌细胞的增殖、凋亡和迁移产生影响。 相似文献
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为探索水杨酸(SA)对草莓灰霉病防治的作用,利用0、1、2、4mmol·L-1 SA溶液喷洒处理'红颜'草莓叶片,3d后取下叶片,接种灰葡萄孢菌,检测草莓叶片发病指数、抗性相关酶活性和基因相对表达量.结果表明:SA处理能够提高草莓叶片灰霉病的抗病能力,SA浓度越高效果越明显,4 mmol·L-1 SA处理时病斑直径为最小,为6.2 mm.SA处理也能够提高抗性相关酶的活性和基因的相对表达量,4 mmol·L-1 SA处理第3天时几丁质酶活性达到了2.5 U·mg-1·min-1,是对照的1.56倍;β-1,3-葡聚糖酶的活性在5 d时达到了最高值,达到了 74 U·mg-1 protein,比第1天增加了 3.08倍,是对照的1.45倍.水杨酸处理后,抗病先关基因的相对表达量也有相似的变化,提高了草莓叶片FaCHI、FaGLU、FaPR1基因的相对表达量. 相似文献
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