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通过两种从大肠杆菌中提取重组质粒pRSETDNA不同方法的比较,寻找提取重组质粒pRSET DNA的切实可行的方法.将含有目的质粒的菌株分别采用SDS碱裂解法和煮沸法进行质粒DNA小量提取,采用DU800核酸蛋白分析仪测定质粒DNA的产量及纯度.结果SDS碱裂解法获得质粒DNA产量为5.61 μg/ml菌液,A260/280=1.95;煮沸法获得质粒DNA产量为4.36μg/ml菌液,A260/280=1.78.与煮沸法相比,SDS碱裂解法获得质粒产量更多,纯度更高,更适合分子生物学常规实验的要求. 相似文献
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碱裂解法是目前最为广泛应用的质粒DNA的提取方法,本人利用0.9%NaC l溶液代替常规方法中的溶液Ⅰ,并缩短了一些步骤的反应时间,既达到了快速、简便提取质粒DNA的目的,又可以满足分子生物学后续实验的要求. 相似文献
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质粒常被用做基因的载体．纯化质粒DNA的方法可以分为3种：碱裂解法、煮沸裂解法和SDS碱裂解法．这些方法可以纯化共价闭合环结构质粒DNA,而大量获得高纯度的闭环结构质粒DNA最经典方法是氯化铯．溴化乙锭密度梯度离心法．该方法经过我们的实践与优化,减少了质粒中蛋白质和基因组DNA的污染,提高了质粒的纯度和得率,所得到的质粒用于拟南芥原生质体转化,效率高达60％～70％,明显高于普通的质粒小量抽提试剂盒所提取的质粒DNA． 相似文献
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质粒DNA提取方法的比较 总被引：1，自引：0，他引：1
以含有原核表达载体pet21a和真核表达载体EGFP的DH5α系列菌株为材料,分别采用碱裂解法和试剂盒提取法提取质粒DNA,通过凝胶电泳分析,对两种质粒提取方法的各自特点进行了比较与分析。认为碱裂解法和试剂盒提取法提取质粒DNA均可进行后续试验,但试剂盒提取法具有省时、简洁、高效的优势。同时根据在实验过程中所遇到的问题,说明了在进行质粒DNA提取过程中应当注意的问题。 相似文献
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20 0 3年高考 (新课程全国卷 )选择题 7:采用基因工程的方法培育抗虫棉 ,下列导入目的基因的做法中正确的是 :①将毒素蛋白注射到棉的受精卵中②将编码毒素蛋白的DNA序列 ,注射到棉的受精卵中③将编码毒素蛋白的DNA序列 ,与质粒重组 ,导入细菌 ,用该细菌感染棉的体细胞 ,再进行组织培养④将编码毒素蛋白的DNA序列 ,与细菌质粒重组 ,注射到棉的子房并进入受精卵A .①② B .②③C .③④D .①④2 0 0 4年考试大纲、试题分析中对此题是这样解析的 :分析 本题通过培育抗虫棉的实例 ,主要考查基因工程的基本原理 ,同时涉及植物细胞的… 相似文献
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为获取抽提水溞基因组DNA的最适方法,本研究采用酚-氯仿法,CTAB法和试剂盒法3种方法提取水溞基因组DNA,并用琼脂糖凝胶电泳检测DNA提取的效果.结果表明3种DNA提取方法均获得较好的DNA,其中试剂盒方法提取的DNA最为理想,完全可满足后续分子生物学实验. 相似文献
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“DNA粗提取与鉴定”是现行高中生物学课程的必做实验。实验的主要目的是让学生学会DNA粗提取和鉴定方法，观察提取出的DNA。但由于实验材料和试剂不易获得，实验成本昂贵，而且实验方法步骤繁琐。对学生的技能要求高，很多中学，尤其是农村中学无法开设此实验。经过几年与学员一起摸索和实践，总结出一套最简易的DNA粗提取与鉴定方法，降低了成本、简化了操作步骤，完全能达到实验的目的及要求。现将实验的简易步骤介绍如下： 相似文献
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本文采用文献资料法、观察法、访谈法、现场测量法、实验对比法,对天津市第一中学中距离跑运动员速度训练方法进行实验研究.在常规的训练方法中,加入了加强速度训练的方法与常规的中长跑训练方法进行对比研究.最后得出结论,在常规的教学方法中加入加强速度训练的方法后,运动员成绩有了明显提高. 相似文献
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本实验考察了基因工程茵Ecoli TOP10F’重组质粒pBAD／gⅢA—NTF2的稳定性。结果表明,该基因工程菌在连续传代30代后,质粒的目的基因片断没有缺失,具有结构稳定性;在无抗生素选择压力下,经传10代后,菌株的质粒没发生质粒丢失现象,20代后各代菌种质粒保有率低于100％,但50代后的菌种质粒保有率仍高达88％。因此,表现出一定的分离稳定性。该基因工程菌在优化培养基和优化条件下的整个发酵过程中,始终表现出良好的结构和分离稳定性。 相似文献
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本实验考察了基因工程茵Ecoli TOP10F’重组质粒pBAD／gⅢA—NTF2的稳定性。结果表明,该基因工程菌在连续传代30代后,质粒的目的基因片断没有缺失,具有结构稳定性;在无抗生素选择压力下,经传10代后,菌株的质粒没发生质粒丢失现象,20代后各代菌种质粒保有率低于100％,但50代后的菌种质粒保有率仍高达88％。因此,表现出一定的分离稳定性。该基因工程菌在优化培养基和优化条件下的整个发酵过程中,始终表现出良好的结构和分离稳定性。 相似文献
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"DNA粗提取与鉴定"实验是中学阶段一个重要的实验.根据高中二年级生物(必修)第二册实验九"DNA的粗提取与鉴定"的实验操作方法,很难得出实验结果.其原因是:实验成本太高,一般中小城市及农村中学的实验经费承受不了;实验准备工作繁重、步骤复杂,操作时间长,很多学生不能当堂完成;需要药品较多,一般中学很难配齐.为了改变这种状况,我市多数中学采用白菜叶、洋葱、蒜等作为实验材料提取DNA,即"植物DNA的粗提取与鉴定"实验,其效果明显.现将该实验方法介绍如下. 相似文献
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本研究对大肠杆菌进行紫外照射诱变后,获得了通过其内部的SOS修复系统产生的突变菌株,采用异丙醇沉淀法对各组菌种进行质粒DNA提取.通过测定各组OD值,经过比较与分析得出了经紫外处理10min后的大肠杆菌质粒DNA浓度最高,为215ug/ml,其次为正常组的190ug/ml.经紫外照射30min后的大肠杆菌质粒DNA浓度最低,仅为65ug/ml.紫外处理时间与质粒DNA浓度整体呈现下降趋势.初步推测是由于大肠杆菌SOS修复系统的RecA蛋白促进了不完全同源的DNA序列之间的重组,产生大量的错配碱基,从而引起突变,进而影响到其质粒DNA的浓度. 相似文献
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生物制药就是把生物工程技术应用到药物制造领域的过程,其中最为主要的是基因工程方法.即利用克隆技术和组织培养技术对DNA进行切割、插入、连接和重组,从而获得生物医药制品. 相似文献
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文章初步探讨了用不同DNA提取方法,对盐土中微生物总DNA的提取效果.实验结果表明,由于盐土中微生物数量较少,溶菌酶-SDS-冻融裂解法、溶菌酶-SDS-蛋白酶K-冻融裂解法均无法提取到盐土中微生物的总DNA;变性剂-SDS-高盐法和试剂盒提取法能获得DNA,但效果不佳;只有用变性剂-SDS-高盐修改法能快速、有效地提取盐土中微生物的基因组DNA. 相似文献
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人生长激素基因转化花叶芋及PEG在转化中的作用 总被引：1，自引：0，他引：1
将人生长激素基因插入pBR322衍生质粒载体pLGV1103 DNA中,通过三亲交配,将重组原粒pLB-9引入携带Ti质粒pGV3850的农杆菌,经同源重组,获得共整合重组体pGL198(hgh)Ti质粒。用叶盘共培养法,将pGL198(hgh)转化单子叶植物花叶芋,获得转基因再生植株。经胭脂碱测定、新霉素磷酸转移酶分析和DNA分子杂交,证明人生长素基因已整合到花叶芋DNA中。还探讨了聚乙二醇(PEG)在植物转化中的作用。 相似文献
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芪合酶是白藜芦醇合成的关键酶。本文分别以传统CTAB法、传统SDS法和改良SDS法对虎杖基因组DNA进行提取,获得符合分子生物学试验要求的高质量DNA。利用芪合酶基因保守区段的特异引物进行PCR扩增,将获得的片段进行测序分析,长度为809bp,成功克隆出虎杖芪合酶基因的保守区段,为芪合酶基因工程奠定基础。 相似文献
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<正> 基因工程是指把体外核酸分子组合到任何病毒、细菌质粒或其它载体系统,形成遗传物质的新组合,并使之进入到原来没有这类分子的宿主体内,而能持续稳定地繁殖。基因工程诞生于1973年,在短短的20多年的时间内,已经取得了许多激动人心的成果。它的最大特点是以重组DNA的技术,开僻了在短时间内改造生物遗传性的新天地。它填补了生物种属间不可逾越的鸿沟,克服了常规育种的盲目性,使人类有可能按照需要定向培育出生物新品种、新类型乃至创造自然界从未有过的新生物。目前基因工程正以新的势头迅猛发展,成为生物科学研究领域中最有生命力、最引人注 相似文献
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该实验通过SDS高盐法（常规法）、SDS高盐法（改良法）和Soil gDNA Kit法提取土壤微生物基因组DNA,用DNA Nanophotometer仪测定样本DNA的纯度和浓度,以确定最佳提取方法.结果表明,用SDS高盐法（常规法）、SDS高盐法（改良法）和Soil gDNA Kit法和土壤微生物基因组DNA的浓度分别为41.45 ng/μl、96.48 ng/μl和58.40 ng/μl,纯度（OD260/OD280）分别1.45、1.57和1.82.由结果可知,改良法提取DNA的浓度最高,而Soil gDNA Kit法的纯度最高,但其成本较高,因此,SDS高盐法（改良法）是节省成本且适合提取大批量土壤微生物基因组DNA的方法,今后在提取DNA过程中进一步优化,以提高其纯度. 相似文献