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构建了三种融合标签FLAG1(DYKDDDDK)、FLAG2(DYKDYKYK)和FLAG3(DYKGGGYK)的原核表达质粒pGEX-2t-His-NSH2-FLAG,以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主,表达并纯化重组蛋白GST-His-NSH2-FLAG。生物信息学分析表明FLAG1的亲水性和抗原性较强,FLAG2次之,FLAG3最弱。Western blotting分析表明单抗M2能够识别此三种FLAG融合蛋白。非竞争性酶免疫法测得FLAG1、FLAG2和FLAG3结合单抗M2的亲和常数分别为0.077μM,0.102μM和0.126μM。相关工作为在多肽芯片上应用FLAG标签进行蛋白质相互作用的检测奠定了一定的基础。 相似文献
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在农药三唑磷作用下,miRNA的表达发生改变;并通过与靶基因的配对,从而调控基因的表达.本文采用荧光定量PCR和Western blot等方法对miR-99及其潜在靶基因ckmt2的表达变化进行了研究.结果表明,三唑磷处理后miR-99表达是对照的0.062倍,助剂处理是对照的0.414倍,表达下调;三唑磷处理后ckmt2基因是其对照的0.91倍,助剂处理是其对照的0.89倍,在mRNA水平变化不显著.三唑磷及助剂处理后,斑马鱼的总蛋白含量减少,CKMT2蛋白含量增加,采用独立样本检验方法分析结果表明,处理前后的CKMT2蛋白质含量差异显著.综上所述,在三唑磷作用下,斑马鱼miR-99对潜在靶标基因ckmt2的表达可能存在抑制作用,miR-99表达的降低致使对ckmt2表达抑制的作用减弱,从而提高ckmt2的表达. 相似文献
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