| 影响聚式酶链式反应实验效果的基本因素 |
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| 引用本文： | 李立群,王小利,郑锦娟,李学军.影响聚式酶链式反应实验效果的基本因素[J].实验室研究与探索,2011,30(7):37-40,161. |
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| 作者姓名： | 李立群 王小利 郑锦娟 李学军 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学农学院,陕西杨凌,712100 |
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| 基金项目： | 教育部第二类特色专业建设项目(TS2405); 西北家林科技大学大型仪器设备新功能开发项目(dysb110304) |
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| 摘 要： | 研究聚式酶链式反应(PCR)实验中影响其扩增效果的多种因素,寻求反应体系中理想的各因素浓度配比。选取含5+10优质亚基的小麦品种为材料,以特异扩增1DX5基因PCR实验为例,从模板DNA、引物终浓度、Taq酶、二价镁离子、4dNTPs混合液、缓冲液浓度几方面入手,通过设计梯度实验,研究不同因素对PCR扩增效果的影响。结果表明,反应体系6个基本因素,缺少任何1个都扩增不出产物。在反应总体积25μL的PCR反应体系中,模板DNA选用32 ng/μL,Mg2+终浓度2 mmol/L,Taq酶1.2 U/25μL,引物0.8μmol/μL,4dNTPs0.3 mmol/L,缓冲液1×buffer最为合适,能扩增出理想的结果。
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| 关 键 词： | 聚合酶链式反应 反应体系 琼脂糖凝胶电泳 |
Discussion on Main Influencing Factors of PCR Experiment |
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| LI Li-qun,WANG Xiao-li,ZHENG Jin-juan,LI Xue-jun.Discussion on Main Influencing Factors of PCR Experiment[J].Laboratory Research and Exploration,2011,30(7):37-40,161. |
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| Authors: | LI Li-qun WANG Xiao-li ZHENG Jin-juan LI Xue-jun |
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| Institution: | LI Li-qun,WANG Xiao-li,ZHENG Jin-juan,LI Xue-jun(College of Agronomy,North West A & F University,Yangling 712100,China) |
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| Abstract: | This article explored the various influencing factors of PCR experiment to find appropriate ratio of each factor concentration.The result of PCR is affected mainly by template DNA,Mg2+,Taq DNA polymerase,primer,4dntps mixture and buffer.Wheat mianyang 19 with 5+10 HMW-GS gene was taken as a material to extract the DNA.Six experiments on five conditions were designed to study the effects on PCR.The results show that it can not gain peculiar band if absent any factor in the reaction system,any factor is not t... |
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| Keywords: | polymerase chain reaction(PCR) reaction system agarose gelelectrophoresis |
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