| 茶树中咖啡酰辅酶A氧甲基转移酶的基因克隆及其催化活性研究(英文) |
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| 作者姓名： | Yue ZHANG Hai-peng LV Cheng-ying MA Li GUO Jun-feng TAN Qun-hua PENG Zhi LIN |
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| 作者单位： | Key Laboratory of Tea Biology and Resource Utilization of Ministry of Agriculture,Tea Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences |
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| 摘 要： | 目的:从茶树中克隆一种可以催化表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)生成甲基化EGCG的酶——咖啡酰辅酶A氧甲基转移酶(CCo AOMT),实现甲基化EGCG的酶学合成,为甲基化EGCG的进一步开发利用提供理论依据和技术指导。创新点:本研究首次从茶树中克隆了一条CCo AOMT基因组序列;分析了CCo AOMT基因在不同茶树品种和不同成熟度茶鲜叶中的基因表达规律;证明了CCo AOMT具有催化合成甲基化EGCG的生物活性。方法:采用聚合酶链式反应(PCR)和序列分析获得CCo AOMT的编码序列和基因组序列;采用高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱技术(HPLC-QTOF-MS)分析酶促反应生成的甲基化EGCG产物(图4);采用实时荧光定量PCR分析CCo AOMT基因的表达差异(图5)。结论:本研究从茶树中克隆了CCo AOMT基因的编码序列(738 bp)和基因组序列(2678 bp),明确了该基因具有4个内含子和5个外显子;揭示了CCo AOMT可以催化EGCG生成EGCG4"Me、EGCG3"Me和EGCG3’Me等多种甲基化产物;证明了CCo AOMT具有催化生成甲基化EGCG的活性;并发现该基因的表达量高低与茶鲜叶的成熟度呈正相关关系。
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| 关 键 词： | 茶树 咖啡酰辅酶A氧甲基转移酶(CCo AOMT) 催化活性 甲基化表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG) |
| 收稿时间： | 2014 Jul 8 |
Cloning of a caffeoyl-coenzyme A O-methyltransferase from Camellia sinensis and analysis of its catalytic activity
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| Yue ZHANG,Hai-peng LV,Cheng-ying MA,Li GUO,Jun-feng TAN,Qun-hua PENG,Zhi LIN.Cloning of a caffeoyl-coenzyme A O-methyltransferase from Camellia sinensis and analysis of its catalytic activity
[J].Journal of Zhejiang University Science,2015,16(2):103-112. |
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| Authors: | Yue Zhang Hai-peng Lv Cheng-ying Ma Li Guo Jun-feng Tan Qun-hua Peng Zhi Lin |
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| Institution: | Key Laboratory of Tea Biology and Resource Utilization of Ministry of Agriculture, Tea Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Hangzhou 310008, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Tea (Camellia sinensis) O-methyltransferase CsCCoAOMT Prokaryotic expression Catalytic activity Methylated epigallocatechin-3-O-gallate (EGCG) |
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