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1.
目的:优化建立二联胶体金免疫层析试纸条,实现对玉米、面粉和饲料中赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的同时快速定量检测。创新点:采用纳米金颗粒标记真菌毒素单克隆抗体,基于竞争反应模式,通过对金颗粒尺寸、免疫层析相关组成材料及缓冲液配方的系列优化,同时借助手持式信号读取装备,实现对谷物和饲料中赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的同时定量检测。该方法简单、快速且成本低,与液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)一致性良好,便于基层单位的推广使用。方法:采用柠檬酸钠还原法制备纳米金颗粒并标记获得金标抗体。通过在基于竞争反应的免疫层析检测体系中,同时设置两条检测线(T1、T2)以实现两种毒素的同时检测,最终采用金标信号读数仪实现定量检测。结论:制备的二联定量胶体金试纸条对赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的检测限分别为0.32和0.58 ng/ml(图5),在玉米、小麦和饲料样本中的加标回收率为77.3%～106.3%,且变异系数均小于15%(表2)。制备的二联定量胶体金免疫层析试纸条和LC-MS/MS对玉米、小麦和饲料等天然样本中赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的定量检测结果相关性较好(表3和图7),具有较好的应用价值。 相似文献
2.
以烟草花叶病毒（TMv）为例研究了制备植物病毒抗血清的一般方法．以家兔和小白鼠为免疫动物，运用饱和硫酸接沉淀法制备出高效价的兔和瓦抗TMV血清，并运用先进的ELISA方法测定了抗血清中抗体IgG的效价；用醋酸纤维凝胶电泳技术分析了抗血清中抗体的lgG纯度，应用免疫双扩散法检测了提纯的IgG的生物活性．同时还运用成二醛一步法制出高结合率的IgG与过氧化氢酶（HRP）标记的抗体，形成了一整套制备抗血清、纯化IgG并对IgG进行酶标的技术，为植物病毒检测提供了快速简便的方法． 相似文献
3.
制备并纯化小鼠腹水IgG,鉴定IgG纯度;免疫新西兰大白兔制备兔抗小鼠IgG的抗血清并纯化血清IgG;用改良过碘酸钠法制备兔抗小鼠IgG酶标抗体,对其进行鉴定,并与市场上的同类产品对比。结果,纯化的小鼠腹水IgG,其纯度约为80%—90%;免疫新西兰大白兔所制备的抗血清免疫双扩散效价在1:32以上;用改良过碘酸钠法制备酶标兔抗小鼠IgG酶标结合物与市场同类产品相比质量优良,特异性较强,亲和力较好,并在较长时间内效价稳定。结果表明,制备的小鼠IgG抗血清和酶标抗体,适合于小鼠的血清学检测体系的建立。 相似文献
4.
通过醛化法将膝沟藻毒素(GTX2,3)分别与血蓝蛋白(KLH)、牛血清白蛋白(BSA)偶联制备完全抗原,高效液相色谱法(HPLC)检测醛化反应前后游离GTX2,3的浓度,完全抗原免疫Balb/C小鼠,间接酶免疫吸附试验检测免疫后血清中抗体效价。GTX2,3与KLH及BSA偶联反应前溶液中毒素的浓度分别为760μg·mL-1和660μg·mL-1,偶联反应后毒素的浓度分别为191μg·mL-1及256μg·mL-1,Balb/C小鼠经过5次免疫后血清的效价为1：500。结果表明,反应后游离的GTX2,3的浓度降低,制备的GTX2,3完全抗原免疫小鼠后小鼠产生抗GTX2,3抗体,说明GTX2,3与载体蛋白发生偶联反应,偶联物具有免疫原性。 相似文献
5.
细菌毒素分为外毒素和内毒素。外毒素经甲醛溶液处理可成为类毒素,将类毒素免疫大型动物,从其血清中可分离出能中和细菌毒素的抗毒素。 相似文献
6.
7.
用电泳纯的小麦多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白免疫新西兰雄兔,获得了特异性强,效价较高的小麦.多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白抗血清.用此抗血清采用Dot—immunobinding assay,对流免疫电泳二种方法测定PGIP的检出限量,由此建立了多聚半糖醛酸酶抑制蛋白的Dot—immunobinding检测方法,并对制备该抗血清的意义予以讨论. 相似文献
8.
在使用CMOS图像传感器获得金免疫层析试条的图像的基础上,使用多副图像平均法和PDE去除试条图像的噪声,再用Snake分割和Hough变换提取金免疫层析试条的检测窗口,然后使用积分扫描法较精确地提取金免疫层析试条的检测线,输出检测线内的总灰度值。实验结果表明,该方法比较理想地实现了金免疫层析试条的定量检测。 相似文献
9.
采用琥珀酸酐法将氯睾酮(CLO)衍生化,再用碳二亚胺法(EDC)将氯睾酮的半抗原与BSA和OVA偶联,制备免疫原和检测抗原,紫外扫描和红外光谱鉴定表明人工抗原合成成功,CLO与BSA偶联比为16.5∶1.利用CLO-BSA免疫Balb/C小鼠制备多克隆抗血清,间接ELISA结果表明:3只小鼠抗体效价分别为1.6×104、3.2×104和1.6×104;间接竞争ELISA检测2号鼠抗血清的灵敏度为64 ng/mL.氯睾酮人工抗原的合成为开发ELISA试剂盒检测食源性动物产品中CLO残留奠定基础. 相似文献
10.
贝类毒素分析技术的研究进展 总被引：1，自引：1，他引：0
林晶 《黎明职业大学学报》2010,(4):35-41
总结麻痹性贝毒、腹泻性贝毒、神经性贝毒、记忆缺失性贝毒、西加鱼毒及Azaspiracids（AZAs）贝毒的检测方法,包括小白鼠生物分析法、免疫学法、高效液相色谱法、液相色谱/质谱法、毛细管电泳法等。分析各检测方法存在的问题与不足,展望贝类毒素分析技术的研究前景。 相似文献
11.
采用经典的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法,比较冬眠期和活动期的黄山尖吻蝮蛇毒蛋白组分的差异,结果显示黄山尖吻蝮在冬眠期的蛇毒蛋白组分和表达量是高于活动期的. 相似文献
12.
13.
Rui Liu Ying Liu Mei-jing Lan Niusha Taheri Jing-li Cheng Yi-rong Guo Guo-nian Zhu 《Journal of Zhejiang University. Science. B》2016,17(4):282-293
A water-soluble adjuvant named QuickAntibody (QA) was introduced into the procedure of mouse immunization for the development of hapten-specific monoclonal antibodies (mAbs), using four kinds of pesticides as model compounds. Compared with conventional Freund;’s adjuvants, QA treatments offered relatively low but acceptable antiserum titers after three inoculations, gave little adverse effects to the experimental animals, and were preferable in harvesting splenocytes during the steps of cell fusion. Afterwards, hybridomas from the QA group were prepared and screened by both non-competitive and competitive indirect enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs). The efficiency of gaining immune-positive hybridomas was satisfactory, and the resultant mAbs showed sensitivities (half maximal inhibitory concentration (IC50)) of 0.91, 2.46, 3.72, and 6.22 ng/ml to triazophos, parathion, chlorpyrifos, and fenpropathrin, respectively. Additionally, the performance of QA adjuvant was further confirmed by acquiring a high-affinity mAb against okadaic acid (IC50 of 0.36 ng/ml) after three immunizations. These newly developed mAbs showed similar or even better sensitivities compared with previously reported mAbs specific to the corresponding analytes. This study suggested that the easy-to-use adjuvant could be applicable to the efficient generation of highly sensitive mAbs against small compounds. 相似文献
14.
15.
目的：应用数目可变串联重复序列（VNTR）分子分型技术,对大理地区60株肺结核临床分离株进行分型研究,探讨大理地区菌株DNA多态性及基因型特征。方法：采用VNTR分子分型技术对60株结核分枝杆菌3个VNTR位点进行检测,应用Quantity one软件和BioNumerics 6.6软件进行聚类分析。结果：60株结核分枝杆菌可以分为4个基因群（Ⅰ群、Ⅱ群、Ⅲ群、Ⅳ群）,28个基因型。Ⅰ群占15.0%,含有5个基因型,Ⅱ群占31.7%,含有8个基因型,Ⅲ群占40.0%,含有11个基因型,Ⅳ群占13.3%,含有4个基因型。结论：大理地区的结核分枝杆菌存在基因多态性,其主要流行群为Ⅲ群。 相似文献
16.
王雅丽 《浙江教育学院学报》2011,(1):106-112
目的：对非学业自我描述量表进行修订和信效度检验.方法：以浙江师范大学492名学生为被试,使用SPSS16.0和Amos5.0进行探索性和验证性因素分析.结果表明：（1）经过探索性因素分析,量表包含7个因子,共45个项目,各个项目负荷在0.416~0.810之间,7个二级因子解释了总方差的54.611%;（2）将7个二级因子按Marsh的多层次自我描述量表依托的理论合并为4个一级因子,提高了内部一致性水平,4个因子及总量表内部一致性系数为0.651~0.821.各因子间相关呈中等偏低相关,结构效度良好;（3）通过验证性因素分析,4个一级因子的模型拟合优度指标分别为：χ2/df〈5,RMSEA〈0.05,GFI,NFI,TLI,CFI为0.989~0.997;（4）在体能、与双亲关系和一般自我3个因子上存在性别的显著性差异,男生比女生评价更积极.鉴于以上结果,非学业自我描述量表的信效度水平达到了测量学的要求. 相似文献
17.
以芳基甲酰氯为原料,通过与硫氰酸钾反应生成芳酰基异硫氰酸酯,再与2-氨基吡啶或3-氨甲基吡啶进行加成反应,合成8种新型含吡啶环的酰基硫脲化合物:N-苯甲酰基-N'-α-吡啶基硫脲(Ⅲ1)、N-对硝基苯甲酰基-N'-α-吡啶基硫脲(Ⅲ2)、N-对氯苯甲酰基-N'-α-吡啶基硫脲(Ⅲ3)、N-邻甲氧基苯甲酰基-N'-α-吡啶基硫脲(Ⅲ4)、N-苯甲酰基-N'-β-吡啶甲基硫脲(Ⅳ1)、N-对硝基苯甲酰基-N'-β-吡啶甲基硫脲(Ⅳ2)、N-对氯苯甲酰基-N'-β-吡啶甲基硫脲(Ⅳ3)、N-邻甲氧基苯甲酰基-N'-β-吡啶甲基硫脲(Ⅳ4),收率分别为67.3%、36.4%、62.6%、83.5%、50.6%、37.8%、89.5%和66.2%.产物的结构经元素分析、红外光谱和核磁共振氢谱表征,并对目标化合物进行了杀菌活性测试,初步的测试结果表明,化合物Ⅲ对大肠杆菌有较强的抑制作用,对枯草杆菌无明显的抑制作用,而化合物Ⅳ的抑制作用与化合物Ⅲ相反,对枯草杆菌有较强的抑制作用,对大肠杆菌无明显的抑制作用. 相似文献
18.
Objective: To determine the existence of genus-specific antigens in outer membrane proteins (OMPs) ofleptospira with different virulence. Methods: Microscope agglutination test (MAT) was applied to detect the agglutination between commercial
rabbit antiserum against leptospiral genus-specific TR/Patoc I antigen and 17 strains ofLeptospira interrongans belonging to 15 serogroups and 2 strains ofLeptospira biflexa belonging to 2 serogroups. The outer envelopes (OEs) ofLinterrogans serogroupIcterohaemorrhagiae serovarlai strainlai (56601) with strong virulence and serogroupPomona serovarpomona strainLuo (56608) with low virulence, andL. biflexa serogroupSemaranga serovarpatoc strainPatoc I without virulence were prepared by using the method reported in Auranet al. (1972). OMPs in the OEs were obtained by treatment with sodium deoxycholate. SDS-PAGE and western blot were used for analyzing
the features of the OMPs on electrophoretic pattern and the immunoreactivity to the antiserum against TR/Patoc I antigen,
respectively. Results: All the tested strains belonging to different leptospiral serogroups agglutinated to the antiserum
against leptospiral genus-specific TR/Patoc I antigen with agglutination titers ranging from 1:256–1:512. A similar SDS-PAGE
pattern of the OMPs from the three strains ofleptospira with different virulence was shown and the molecular weight of a major protein fragment in the OMPs was found to be approximately
60 Kda. A positive protein fragment with approximately 32 KDa confirmed by Western blot, was able to react with the antiserum
against leptospiral genus-specific TR/Patoc I antigen, and was found in each the OMPs of the three stains ofleptospira. Conclusion: There are genus-specific antigens on the surface ofL.interrogans andL.biflexa. The OMP with molecular weight of 32 KDa may be one of the genus-specific protein antigens ofleptospira.
Project (No. 39970678) supported by the National Natural Science Foundation of China 相似文献
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INTRODUCTIONInfectionbyL.interrogansischaracterizedbyhemorrhage,diarrhea,jaundice,severerenalim-pairment,andasepticmeningitis.Leptospirosisisspreadfromanimalurinetohumansandiscon-sideredtobethemostwidespreadanthropozoono-sisintheworld.Thisdiseaseiscommoninfarmersandveterinarians,butcanalsobetransmittedthroughcontaminatedwaterinfloodedareas.Inparticular,leptospirosisisoneofthemostimportant2001;Kupeketal.,2000).LeptospiraisdividedintoLeptospirainterrogansandLeptospirabiflexa.Theformerispa… 相似文献