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1.
目的:建立基于单克隆抗体的检测马铃薯植物中马铃薯S病毒(PVS)的血清学方法,为我国PVS的田间调查和检测及无毒种薯的生产提供快速、实用的检测技术。创新点:首次制备了抗PVS的高度特异和灵敏的单克隆抗体,并以制备单抗为核心建立三种能快速、准确、灵敏、特异地检测PVS的血清学检测方法。方法:以差速离心方法提纯的PVS病毒粒子作为免疫原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术获得了能稳定传代并分泌PVS单克隆抗体的杂交瘤细胞株;扩繁的杂交瘤细胞注射到小鼠腹腔获得单抗腹水,并以纯化的制备单抗为核心,根据血清学原理建立检测马铃薯植物中PVS的双抗夹心酶联免疫吸附试验(DAS-ELISA)、斑点酶联免疫吸附试验(dot-ELISA)和组织印迹酶联免疫吸附试验(tissue print-ELISA)血清学检测方法;并对田间马铃薯样品进行PVS检测,分析建立的血清学方法检测PVS的有效性。结论:利用杂交瘤技术获得了五株能稳定传代并分泌PVS单克隆抗体的杂交瘤细胞株,以制备杂交瘤细胞分泌的单抗为核心建立了检测马铃薯植株中PVS的DAS-ELISA、dot-ELISA和tissue print-ELISA三种血清学方法。三种血清学方法检测感染PVS的马铃薯植株呈阳性反应,而检测健康的马铃薯及感染其他三种马铃薯病毒的植株呈阴性反应,且建立的DAS-ELISA和dot-ELISA方法检测马铃薯病叶的灵敏度分别达到1:163 840和1:10 240倍稀释(w/v,g/ml)。田间样品检测结果发现,建立的血清学方法的检测结果与逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的检测结果一致,表明建立的血清学方法可有效地用于马铃薯植物中PVS的检测,从而为我国PVS的田间调查和检测及无毒种薯的生产提供快速、实用的检测技术。 相似文献
2.
De-qing HUANG Rui CHEN Ya-qin WANG Jian HONG Xue-ping ZHOU Jian-xiang WU 《Journal of Zhejiang University. Science. B》2019,(4):343-354
目的:制备一种检测水稻植物和传毒介体灰飞虱中水稻条纹病毒(RSV)的胶体金免疫层析试纸条,为水稻条纹叶枯病的田间调查和检测以及预测预警提供快速、实用的检测试剂。创新点:利用制备的RSV单克隆抗体,首次制备了能在5～10 min内快速、准确、灵敏、特异地检测水稻植物和灰飞虱体内RSV的胶体金免疫层析试纸条。方法:以差速离心方法提纯的RSV病毒粒子作为免疫原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术获得了高度特异和灵敏的RSV单克隆抗体。采用柠檬酸钠还原氯金酸的方法制备胶体金并标记一个RSV单克隆抗体,另一个RSV单克隆抗体和羊抗鼠抗体分别包被到硝酸纤维素膜的检测线和质控线,将吸水滤纸制成的样品垫、RSV免疫胶体金垫、结合有RSV单抗和羊抗鼠抗体的硝酸纤维素膜和吸水纸依次粘贴到聚氯乙烯(PVC)胶板上研制检测水稻植物和传毒介体灰飞虱中RSV的胶体金免疫层析试纸条。对田间样品进行RSV检测,分析试纸条检测RSV的有效性。结论:利用杂交瘤技术获得了2株RSV单克隆抗体(16E6和11C1),胶体金标记16E6单克隆抗体包被在聚酯膜制成的结合垫上,以11C1单克隆抗体和羊抗鼠抗体分别包被到硝酸纤维素膜的检测线和质控线,制成能在5～10 min内快速、特异、灵敏、准确地检测田间水稻及单头灰飞虱样品中RSV的胶体金免疫层析试纸条。试纸条检测感染RSV的水稻植株和灰飞虱呈阳性反应,而检测健康水稻和感染其它5种常见水稻病毒的植株及其传毒介体呈阴性反应,且试纸条检测RSV感染水稻植物组织的灵敏度达到1:20 480倍稀释(w/v, g/mL),检测携带RSV单头灰飞虱的灵敏度达到1:2560倍稀释(单头灰飞虱/μL)。田间样品检测结果发现,试纸条检测结果与反转录聚合酶链反应(RT-PCR)的检测结果一致,表明制备的试纸条可有效地用于田间RSV的检测,从而为水稻条纹叶枯病的诊断、监测预警、抗病育种、流行病学研究及科学防治提供技术和物质支撑。 相似文献
3.
Tossapon WONGTANGPRASERT Wirongrong NATAKUATHUNG Umaporn PIMPITAK Anumart BUAKEAW Tanapat PALAGA Kittinan KOMOLPIS Nanthika KHONGCHAREONPORN 《Journal of Zhejiang University. Science. B》2014,(2)
研究目的:抗土霉素单克隆抗体的制备和特性分析,并用于间接竞争酶联免疫吸附测定法(icELISA)分析虾样品中土霉素的残留。创新要点:本研究建立分泌抗土霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株,筛选出对虾中土霉素残留检测具有较高灵敏度的单克隆抗体2-4F。研究方法:用细胞杂交技术使土霉素-牛血清白蛋白偶联物免疫的BALC/c雌性小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合,建立三株分泌抗土霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2-4F、7-3G和11-11A),并制备它们的单克隆抗体。通过icELISA法分析单克隆抗体对土霉素的半抑制质量浓度(IC50)和交叉反应率,明确其灵敏度和特异性。重要结论:实验结果发现单克隆抗体2-4F具有最高的灵敏度,对土霉素的IC50为7.01 ng/ml,且该单抗特异性强,仅与罗利环素之间有强烈的交叉反应,而与非相关抗生素不发生交叉反应。当利用单克隆抗体2-4F检测虾样品中的土霉素含量时,其批内和批间回收率分别为82%~118%和96%~113%,变异系数分别为3.9%~13.9%和5.5%~14.9%。因此,单克隆抗体2-4F可用于虾产品中土霉素残留分析试剂盒的开发。 相似文献
4.
目的：制备并鉴定破伤风类毒素单克隆抗体杂交瘤细胞株,为破伤风的快速检测及致病机制的研究提供实验材料。方法：用破伤风类毒素做抗原免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,获得分泌高滴度针对破伤风类毒素的杂交瘤细胞株,测定单抗免疫球蛋白亚类及单抗效价,用间接ELISA和Western-blot检测单克隆细胞株的特异性。结果：通过细胞融合和克隆化,筛选出3株持续分泌抗破伤风类毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株1E12、1E11、1G10。间接ELISA和Western-blot检测结果表明1E12、1E11、1G10可以和破伤风类毒素发生特异性反应。结论：成功制备了抗破伤风类毒素单克隆抗体,为制备免疫诊断试剂盒和抗体药物的开发奠定了基础。 相似文献
5.
杀鲑气单胞菌单克隆抗体的制备及其特性分析 总被引：1，自引：0，他引：1
应用杂交瘤单克隆抗体技术制备了6株分泌抗杀鲑气单胞菌杀鲑亚种的单抗细胞株,并对其特性进行分析。结果显示:6株单抗中IgM有3株,IgG1有2株,IgG2a有1株,且抗体效价为1:12800—1:51200,检测灵敏度为1.0×105—1.0×108cfu·mL-1。进一步实验证实这些单抗与其他病原菌都无交叉反应。但单抗5C7、7H6与杀日本鲑亚种有交叉反应;单抗8A2与无色亚种存在阳性反应。表明杀鲑气单胞菌亚种之间既有独特的抗原决定簇,又有共同抗原位点。制备的单抗可用于杀鲑气单胞菌的快速诊断和亚种鉴定,为该菌的进一步研究提供必要手段。 相似文献
6.
7.
目的:评价一种新型水溶性免疫佐剂在制备小分子化合物单克隆抗体(单抗)中的应用效果。创新点:采用一种新型水溶性免疫佐剂,快速制备了分别针对4种农药和1种海洋毒素的高亲合力单抗,且其性能与以往采用弗氏佐剂获得的相应单抗非常接近。方法:本研究以4种农药和1种海洋毒素为目标分析物,采用一种新型水溶性佐剂与小分子抗原相互混合,直接对Balb/c小鼠进行小腿肌肉注射免疫。经过2~3次免疫后进行腹腔注射常规末次免疫,细胞融合后筛选出了相应的杂交瘤细胞株,制备并鉴定了针对上述半抗原小分子的特异性单抗。结论:采用该水溶性免疫佐剂制备抗原注射溶液无需乳化过程,免疫操作简便,且对小鼠负面效应较小;虽然该处理小鼠产生的抗血清效价并没有像常规弗氏免疫佐剂带来的效价值高,但细胞融合后筛选得到有效细胞株的概率尚可;获得的针对目标分析物的单抗在灵敏度和特异性等方面都接近于以往采用弗氏佐剂获得的单抗。试验结果表明,该水溶性免疫佐剂适用于针对小分子化合物单抗的高效制备。 相似文献
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Hui LI Mei-hua SUN Ming-fang QI Jiao XING Tao XU Han-ting LIU Tian-lai LI 《Journal of Zhejiang University. Science. B》2018,(6)
目的:探讨赤霉素对SlYABBY2b基因调控番茄心室形成过程中的作用,为进一步研究番茄畸形果发生机理提供了理论基础。创新点:首次明确了SlYABBY2b基因与赤霉素的关系,且筛选出SlYABBY2b调控赤霉素合成的关键基因方法:利用Gateway技术法构建SlYABBY2b基因超表达和沉默载体,并通过农杆菌介导转化法获得转基因植株。用酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测转基因植株中赤霉素的含量,用实时荧光定量分析(qRT-PCR)赤霉素突变体中SlYABBY2b基因表达水平和SlYABBY2b转基因植株中赤霉素相关基因的转录水平。结论:本实验中赤霉素突变体中SlYABBY2b基因表达量显示,赤霉素短缺导致番茄植株体内SlYABBY2b基因的升高。ELISA实验结果显示,SlYABBY2b基因也能够反馈调控赤霉素的合成。qRT-PCR结果显示,SlYABBY2b基因抑制GA20ox1和GA3ox2基因的表达,促进GA2ox1和GA2ox5基因的表达。综上所述,研究结果明确了SlYABBY2b基因位于赤霉素信号转导的途径上,反馈调节赤霉素的合成,感受外源赤霉素的信号,从而进一步调控番茄心室的形成。 相似文献
9.
应用植物血凝素亲合层析技术所获得的纯化抗原进行斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA).用该方法对146例囊虫病患者、40例其它寄生虫感染者及36例健康人IgG4亚型的检测.结果表明,除3例囊虫病人未能检出外,143例均为阳性.其它寄生虫感及健康人均为阴性.该试验方法敏感性为98％,特异性为100％.结论:IgG4可作为囊虫病免疫诊断指标之一. 相似文献
10.
<正> 恶性肿瘤是一直危害人类健康的主要疾病之一,随着杂交瘤单克隆抗体技术的迅速发展,肿瘤标志物实验诊断方法越来越多,我院近期主要用放射免疫方法检测三种肿瘤标志物AFP(甲胎蛋白)CEA(癌胚抗原)CA-50(糖链蛋白-50)和AIF(酸性铁蛋白),通过检测、临床观察,大大提高了对恶性肿瘤的诊断率,现将162例恶性肿瘤病人的测定结果分析报告如下: 相似文献
11.
目的:建立酶联免疫吸附法(EUSA)以检硫酸雌酮的含量.方法:首先合成硫酸雌酮-BSA,然后将其作为包被抗原,建立检测硫酸雌酮的间接EUSA法.结果:建立了检测硫酸雌酮的标准曲线y=9E-5X+0.0998,该ELISA法灵敏度为0.69 ng.mL-1,批内和批间变异系数分别为8.8%和10.3%,与孕酮、炔雌醇、睾酮的交叉反应不明显.结论:初步建立了定量测定硫酸雌酮含量的间接酶联免疫吸附试验方法(EUSA). 相似文献
12.
目的:优化建立二联胶体金免疫层析试纸条,实现对玉米、面粉和饲料中赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的同时快速定量检测。创新点:采用纳米金颗粒标记真菌毒素单克隆抗体,基于竞争反应模式,通过对金颗粒尺寸、免疫层析相关组成材料及缓冲液配方的系列优化,同时借助手持式信号读取装备,实现对谷物和饲料中赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的同时定量检测。该方法简单、快速且成本低,与液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)一致性良好,便于基层单位的推广使用。方法:采用柠檬酸钠还原法制备纳米金颗粒并标记获得金标抗体。通过在基于竞争反应的免疫层析检测体系中,同时设置两条检测线(T1、T2)以实现两种毒素的同时检测,最终采用金标信号读数仪实现定量检测。结论:制备的二联定量胶体金试纸条对赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的检测限分别为0.32和0.58 ng/ml(图5),在玉米、小麦和饲料样本中的加标回收率为77.3%～106.3%,且变异系数均小于15%(表2)。制备的二联定量胶体金免疫层析试纸条和LC-MS/MS对玉米、小麦和饲料等天然样本中赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的定量检测结果相关性较好(表3和图7),具有较好的应用价值。 相似文献
13.
为了及时准确的给临床医师提供大便隐血化验结果,联合应用联苯胺法和抗人血红蛋白单克隆抗体法(简称单抗法)对170例临床样本进行了检测。结果显示:联苯胺法阳性率高,但易受饮食的影响,如食用肉类、蔬菜、药物、铁剂等,常出现假阳性反应。单抗法敏感性高、特异性强,但对柏油便、黑便常出现假阴性反应。因此对柏油样便、黑便应以两种方法报告结果为佳。 相似文献
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目的:探讨荧光定量检测在小儿患者巨细胞病毒(HCMV)感染中的诊断价值.方法:对102例小儿患者,取尿液用荧光定量PCR(FQ-PCR)技术检测.结果:102例标本中28例阳性,阳性率为27.5%.结论:荧光定量PCR检测方法具有快速、灵敏、特异等优点,在HCMV感染的早期诊断、治疗方案选择以及疗效观察方面具有广泛的应用前景. 相似文献
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张挺 《广东轻工职业技术学院学报》2014,13(3):1-4
建立热加工食品中α-乳球蛋白的双抗夹心酶联免疫检测检测方法。以热处理的α-乳白蛋白为抗原,制备抗α-乳白蛋白的高特异性单克隆抗体,并将以此蛋白作为包被抗体,构建双抗夹心ELISA方法。本方法标准曲线的IC50为360 ng/mL,方法的灵敏度为10 ng/mL。以尿素作为提取液可以大大提高热加工食品中α-乳白蛋白的提取率,添加回收率在76%~89%之间,相对标准偏差小于15%。该方法能准确地识别热加工的奶制品,避免了传统免疫方法在热加工奶制品检测上的假阴性。 相似文献
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Shan LI Song-mei LIU Hao-wei FU Jian-zhong HUANG Qing-yao SHU 《Journal of Zhejiang University. Science. B》2018,(8)
目的:建立适用于筛选伽马射线诱发突变的、基于高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)技术的高通量定向诱导基因组局部突变技术(Targeting Induced Local Lesions IN Genomes,TILLING)体系。创新点:建立起了基于HRM技术、适用于伽玛射线诱发的小片段插入/缺失突变的高通量TILLING体系(HRM-TILLING)。方法:通过不同野生型/突变型比例混池DNA的HRM分析,确定HRM检测不同类型插入/缺失突变的能力,确定M2植株突变检测的适宜混池比例,并用一个伽玛诱变M2群体(n=4560)筛选Os LCT1和SPDT两个基因的突变体,确定实际效果。结论:以4株M2植株混样,采用HRM可以有效检出突变。建立的基于HRM的TILLING体系适用于伽玛射线诱发突变的高通量筛选。 相似文献
17.
植物人工种子是指将植物离体培养中产生的体细胞胚或能发育成完整植株的分生组织,包埋在含有营养物质和具有保护功能的外壳内,形成的在适宜条件下能够发芽出苗的颗粒体。完整的人工种子包括3部分:胚状体、人工胚乳、人工种皮。植物人工种子技术主要包括体细胞胚的诱导与同步化、包埋方法、人工种皮制备、干化、贮藏及防腐等。人工种子具有可工厂化大规模制备、贮藏和迅速推广优良种质资源等优点,应用前景十分广阔。 相似文献
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目的:建立快速、灵敏、特异的基因2型鹅星状病毒(Goose astrovirus 2,GoAstV-2)检测方法。方法:以GoAstV-2 ORF2基因为靶标,设计特异性检测引物并构建含目标基因的重组质粒作为阳性质粒标准品,以其为模板优化建立一种EvaGreen饱和染料荧光定量一步法RT-PCR检测方法。结果:所建立方法采用dUTP/UDG酶防污染体系,其标准曲线在2.58×101～2.58×107 copies/μL质粒模板量呈现良好的线性关系,斜率为-3.413,相关系数(R2)为0.995,熔解温度TM为(85.5±0.5)℃;该方法对质粒标准品检测灵敏度下限为25.8 copies/μL;该方法特异性检测GoAstV-2,而新城疫病毒(NDV)、H5型禽流感病毒(AIV-H5)、禽呼肠孤病毒(ARV)等11种常见禽传染病病原检测结果均为阴性。重复性试验显示,组内和组间变异系数均小于2%,表明其具有良好的重复性。GoAstV-2感染病死鹅组织定量检测显示,心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、腺胃、胰... 相似文献
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水生植物床去除富营养化水源水中藻毒素的机制 总被引：1，自引：0，他引：1
为净化富营养化水源水中的藻毒素,在太湖湖滨进行了水生植物床(AVB)技术试验.该技术对MC-RR和MC-LR的平均去除率分别达63.0%和66.7%.用酶联免疫吸附法检测发现水生植物根部对藻毒素的富集能力大于茎叶部位.用荧光原位杂交法在AVB的底泥中检测到2种已知的藻毒素降解细菌,证明微生物降解作用的存在.植物根系原生动物相和后生动物相丰富,盾纤虫、钟虫、旋轮虫、腔轮虫是优势种,原生动物和后生动物的捕食作用在蓝藻和藻毒素的去除中发挥着积极作用. 相似文献
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目的:建立检测MBL基因54位密码子点突变的方法,初步调查健康汉族人MBL基因54位密码子点突变的情况,检测其血浆MBL含量,找出二者的相关性.方法:根据MBL基因序列设计引物建立MBL基因点突变检测方法即PCR-RFLP;用MBL Oligomer ELISA试剂盒测定出血浆MBL的浓度.结果:建立了特异敏感的检测MBL基因54位密码子点突变的方法,测得健康汉族人基因突变频率为0.2321;健康汉族人血浆MBL含量的平均值为1999μg/L,标准差为1505;健康汉族人血浆MBL含量与其编码基因Exon 1 54位密码子的点突变频率呈负相关,X2=48.107,P＜0.001;r=-0.62.结论:所建立的MBL的PCRRFLP测定点突变的方法,特异性高,重复性好,较为灵敏(最低检出量为160pgDNA);初步测定了健康汉族人的基因突变频率及其血浆MBL含量,二者呈负相关. 相似文献