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1975年,克勒和尔斯坦发现,将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合,形成的杂交细胞既可产生抗体,又可无限增值,从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。他们因此获得1984年的诺贝尔医学或生理学奖。制备单克隆抗体的过程要包括动物免疫、细胞融合、选择杂交瘤、检测抗 相似文献
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DNA芯片技术及其应用 总被引：1，自引：0，他引：1
DNA芯片技术是近年发展起来的DNA分析技术，它采用高速打印或光刻合成技术可在硅片、玻璃或尼龙膜上制造DNA微阵列，样品DNA通过PCR扩增、体外转录等技术掺入荧光标记分子，与微阵列杂交后，通过荧光扫描仪扫描及计算机分析即可获得样品中大量基因序列及表达信息，该技术可应用于DNA序列测定、基因表达水平检测、基因及多态性检测、发现新基因等多个研究领域。 相似文献
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DNA芯片技术是近年发展起来的DNA分析技术，它采用高速打印或光刻合成技术可在硅片、玻璃或尼龙膜上制造DNA微阵列.样品DNA通过PCR扩增、体外转录等技术掺入荧光标记分子，与微阵列杂交后，通过荧光扫描仪扫描及计算机分析即可获得样品中大量基因序列及表达信息.该技术可应用于DNA序列测定、基因表达水平检测、基因及多态性检测、发现新基因等多个研究领域. 相似文献
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以cDNA微阵列检测313个已知基因在萌发期水稻幼苗中的表达谱 总被引：1，自引：0，他引：1
使用含512个已知水稻基因3′表达序列标签的cDNA微阵列检测了萌发期水稻幼苗的基因表达谱，313个基因产生了可靠的杂交信号．其中，天冬氨酸氨基转移醇基因和4个具有核糖体功能的基因表达丰度非常高，表明萌发期幼苗中的氨基酸和蛋白质的合成代谢很活跃．β—l，3一葡聚糖酶基因是一种典型的病程相关基因，该基因的高水平表达，表明幼苗中存在着一种高度发育的抗病机制．实验也发现编码一种重要的抑制细胞凋亡的基因-Bax inhibitor-1，在幼苗中的表达丰度很高；该结果可解释为什么正常的幼苗中很少发生细胞程序性死亡现象．实验所测定的大量基因的表达丰度有助于从基因组转录水平理解萌发幼苗的生理特点． 相似文献
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范韵敏 《黎明职业大学学报》2012,(2):37-41
总结阿魏酸酯酶的理化性质及可释放羟基肉桂酸的特性,探讨阿魏酸酯酶与其他细胞壁降解酶间存在的协同作用及其纯化方法,并展望阿魏酸酯酶未来的研究方向。不同的阿魏酸酯酶对阿魏酸的作用方式不同,作用的底物位点不同,释放的产物也不同,与木聚糖酶或β-木糖苷酶或Endo-Arabinanase、α-L-Arabino-Furanosidase协同作用,可促进其释放作用。 相似文献
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目的:探讨RNA干扰T细胞mTOR表达后诱导T细胞分化对小肠移植免疫耐受的影响。方法:通过shRNA干扰T细胞mTOR表达后,诱导T细胞向Foxp3+Tregs细胞分化。对60只雄性SD大鼠施行30次异位节段小肠移植,随机分为A组(mTOR-shRNA转染组)、B组(mTOR抑制剂RAD001干预)和C组(移植对照组、注射生理盐水)。观察小肠移植后受体大鼠的体重变化、生存时间及移植小肠病理切片评估排斥反应程度。结果:构建的mTOR-shRNA质粒表达载体在体外能有效地抑制大鼠骨髓细胞mTOR基因mRNA和蛋白的表达。RNA干扰大鼠T细胞mTOR基因可调节T细胞的定向分化,Tregs细胞增多,而Th17细胞分化减少。抑制mTOR基因可诱导大鼠异位小肠移植的免疫耐受,减轻受体抗移植物的排斥反应,显著延长移植物的存活时间。结论:RNA干扰T细胞mTOR表达后诱导T细胞分化对小肠移植耐受的研究为mTOR抑制剂(RAD001)在移植后的临床应用提供理论和实验依据。 相似文献
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三、《细胞生物学》解题示例
1．要探知细胞内某一蛋白质的表达水平，可以通过哪些技术实现 A. Southern blot B. Northern blot C. Western blot D．原位分子杂交
解析 Southern blot用于DNA经限制酶酶切后分析DNA的结构，Southern blot根据其发明者Southern EM的姓名命名。Northern blot或RNA印迹分析被用于确定RNA样品中特定基因转录的mRNA的分子大小及量的情况；而将分析蛋白质的印迹技术称为Western blot。 相似文献
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绿色荧光蛋白基因在转基因金鱼中的整合与表达 总被引：2，自引：0，他引：2
通过分子克隆技术将鲤鱼β-肌动蛋白启动子(carpβ—actin promoter A)与编码绿色荧光蛋白(GFP)的cD-NA融合构建成能在真核生物体内表达的质粒载体pAGFP。质粒pAGFP经Pvu线性化后采用显微注射法导入金鱼受精卵，在胚胎发育初期，经紫外光激发能观察到少数胚胎发绿色荧光。在通过PCR实验检测出的5个阳性个体染色体DNA中，经点杂交实验证实有2个个体染色体基因组上整合了GFP基因。 相似文献
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杂交节瓜种子的几种同工酶分析 总被引：1，自引：0，他引：1
肖望 《广东教育学院学报》2001,21(2):71-73
用聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳(IEF)方法对杂交节瓜种子的过氧化物酶同工酶(PER)、酸性磷酸酶同工酶(ACP)、酯酶同工酶(EST)进行了电泳分析，发现几种节瓜种子的ACP没有显的差异，EST有一定的差异，而PER具有显的品种间的差异． 相似文献
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目的:研究新城疫病毒(NDV)感染对小鼠肉瘤S180细胞p53蛋白的表达及细胞周期的影响。方法:通过NDV体外感染小鼠肉瘤S180细胞,经倒置显微镜观察细胞形态变化,噻唑蓝(MTT)比色法检测小鼠肉瘤S180细胞的增殖状况;经流式细胞仪分析检测NDV体内感染后荷瘤鼠腹水中S180细胞分裂周期各时相的变化、细胞凋亡情况及细胞表面p53蛋白的表达情况。结果:NDV体内、外感染对小鼠肉瘤S180细胞的杀伤作用明显,NDV体内感染后荷瘤鼠腹水中S180细胞高表达p53蛋白,细胞凋亡率增加,G2/S期细胞减少,增殖指数(PI)降低,与阴性对照组比较有显著性差异(P<0.05)。结论:NDV感染可增强小鼠肉瘤S180细胞p53蛋白的表达,影响其细胞周期,诱导其凋亡且有较强的杀瘤作用。 相似文献
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一、基因表达的选择性
科学家利用分子杂交技术发现任何时期细胞基因组中只有少数基因在活动,而不是同时都表达,进行表达的基因只占5%-10%.而且不同细胞中表达的基因各不相同,形成不同的蛋白质,从而细胞的形态、功能各不相同.不同基因表达的时间也不尽相同,有些基因表达得早,而有些基因表达得晚,这样在生物体的不同细胞中,DNA虽然一样,但RNA种类却各不相同. 相似文献
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采用基因枪法,将SCaM4-Citrine、PepA-mRFP和ECBP21-mRFP 3种融合蛋白基因转化到洋葱内表皮细胞.同时,将SCaM4-Citrine、PepA-mRFP基因以及SCaM4-Citrine、ECBP21-mRFP基因分别等量混合,共转化入洋葱内表皮细胞,23℃光照培养18~22 h,利用激光共聚焦显微镜可观察到大量融合蛋白的表达,基因枪转化技术获得成功.并发现,对于洋葱表皮细胞来说,幼嫩部分的细胞转化率比老的高,并且枪击压力为7 580 kPa或9 300 kPa时为最适压力. 相似文献
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探讨体外条件下骨骼肌卫星细胞的原代培养、纯化及鉴定的方法。取新生3～5 d的SD大鼠处死清洗后,采用Ⅰ型胶原酶、胰蛋白酶联合酶消化30 min,细胞悬液过滤离心后,用含有10%胎牛血清的培养液悬浮细胞,1 h后重新接种,重新接种2次,最后接种于L-多聚赖氨酸铺底的培养瓶中;采用骨骼肌肌动蛋白(α-sarcometric actin)免疫荧光方法鉴定骨骼肌细胞。肌卫星细胞培养5～6 h后开始贴壁,48 h完全贴壁,之后细胞进一步增多并相互融合,逐渐按一定方向呈有序排列。当细胞增殖至70%密度时,有融合趋势,加入分化培养基培养48 h后可形成多核的肌管,行免疫荧光染色,90%以上的细胞α-sarcometric actin染色阳性,证明培养的为骨骼肌细胞。 相似文献
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临床上，Ph^1阳性、bcr／abl阳性见于慢性粒细胞白血病的病人．本病例则在外周血淋巴细胞绝对值、骨髓淋巴细胞形态和数值异常、免疫学B细胞表型的高表达以及临床表现等方面均符合慢性淋巴B细胞型白血病诊断的病人，染色体检查发现细胞Ph染色体阳性，即t(9；22)，经RT-PCR检测，bcr／abl融合基因转录本阳性． 相似文献
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BpHi008A是一种水稻诱导性防卫基因，以单拷贝序列存在，当秧苗受到褐飞虱咬食或机械损伤后，该基因便大量表达，编码一个含82个氨基酸的蛋白质．将此基因重组到表达型载体pET28a后，转化入能产生T7RNA聚合酶的大肠杆菌菌株中，以10％SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳来分离并鉴定未经IPTG诱导和经IPTG诱导后不同时刻的表达产物．结果表明利用T7RNA聚合酶／启动子表达系统可使蛋白质在大肠杆菌中高水平表达，并且表达产物的分子量约为9．6KDa．本实验表达的蛋白质可用为抗原刺激抗体的产生，为免疫定位和Western杂交做准备． 相似文献
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目的：探讨血管内皮生长因子（VEGF）在膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义。方法：采用免疫组化、ELISA方法对45例膀胱移行细胞癌组织、血浆和10例正常膀胱黏膜组织、30例正常成人血浆中VEGF进行检测分析。结果：VEGF在膀胱移行细胞癌患者中呈高表达，且随分期、分级的增高而增高；膀胱癌手术前患者血浆中VEGF的浓度高于手术后。结论：1．VEGF的表达与膀胱移行细胞癌的病理分级、临床分期及生物学行为有密切关系；2．血浆中VEGF水平可有助于预测膀胱癌患者手术疗效。 相似文献
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用α一奈酯（α一ＮＡ）和β一奈酯（β一ＮＡ）配制成混合底物，采用偶氮色素法测定油菜不同器官或部位的酯酶总活力，同时测定其蛋白质含量。分析比较油菜不同器官或部位的酯酶总活力和酯酶比活力，结果表明，生理活动较旺盛或与生殖有关的器官或部位的酯酶总活力和酯酶比活力也高。因此推测植物酯酶与植株的生殖生长有着密切联系。 相似文献