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抑癌基因PTEN载体构建及在LOVO细胞中的表达 总被引：1，自引：0，他引：1
目的:构建抑癌基因PTEN的表达载体并在LOVO细胞中表达。方法:从人外周血中提取总RNA,通过RT-PCR扩增出PTEN基因片段,将PTEN基因连入pLenti6/V5载体。测序鉴定后,经脂质体转染入LOVO细胞,对细胞株进行RT-PCR和Western blot检测。结果:DNA测序证实pLenti6/V5-PTEN表达载体为阳性克隆;该表达载体转染LOVO细胞后上调了PTEN mRNA和蛋白的表达。结论:成功构建了pLen-ti6/V5-PTEN表达载体,为进一步研究PTEN在LOVO细胞中的功能奠定了基础。 相似文献
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根据Genbank数据库已知的链霉菌的查尔酮合成酶基因的保守区设计chs基因特异简并引物,土壤总DNA为模板,利用PCR技术扩增得到该1条chs基因编码区,通过TA克隆、测序和同源比对及进化分析表明：该基因为放线菌来源chs基因．分别在该基因5＇末端和3’末端分别引入的限制酶NcoI和EcoRI酶切位点,利用上述2种限制酶分别酶切导入到psimple—T／chs载体和原核表达pET32a,凝胶回收目的片段后,将二者连接并转化大肠杆菌感受态细胞,转化子经菌液PCR筛选、双酶切鉴定后,3730测序结果表明,该基因全长编码区为1089bp,推测该基因编码全长为362个氨基酸残基,等电点（PI）为5．41、分子量为3965道尔顿含有cHs保守功能区的酸性蛋白质．分析表明,该基因与Streptomyceslividans来源的查尔酮合成酶RppA基因核苷酸相似性高达93％,氨基酸序列相似性高达87．70％．测序结果表明,该基因已经成功插入到pET32a载体中． 相似文献
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基于基因工程技术 ,用PCR法扩增出编码ICA6 9的cDNA片段 ,直接克隆到pSPORT 1质粒上 ,经DNA序列测定 ,插入到GST融合蛋白表达载体 pGEX 2T ,构成重组质粒 p2T ICA6 9,得到的表达产物GST ICA6 9融合蛋白用间接ELISA法检测其免疫原性 .测序结果表明 ,所获PCR产物已正确重组到PGEX 2T表达型质粒中 .重组质粒在原核细胞中表达的融合蛋白具有免疫原性 ,并能应用于Ⅰ型糖尿病病人血清中抗ICA6 9抗体的检测 .所获得的表达产物为重组ICA6 9融合抗原 ,有助于提高Ⅰ型糖尿病的预报率和确诊率 . 相似文献
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Objective: To investigate the infection of human embryo fibroblast cell line HF cells by CMV as well as the effects of CMV
on β-actin mRNA and microfilaments. Methods: HF cells shape was observed after the infection of CMV. RT-PCR assay was used
to detect the mRNA expression of CMV immediate early (IE) gene, β-actin and GAPDH genes of HF cells infected by CMV. CMV particles
and cell microfilaments were detected with electron microscope. Results: Shape of HF cell changed after the infection by CMV.
HF cells infected by CMV could express IE mRNA and the expression of β-actin mRNA decreased in a time-and titer-dependent
manner compared with the uninfected HF cells whose expression of GAPDH mRNA did not change much. CMV particles were found
with electron microscope in the cells. Microfilaments were ruptured and shortened after the infection of CMV. Conclusion:
CMV can not only infect human embryo fibroblast cells line HF cells and replicate in the cells, but can also affect the expression
of β-actin mRNA and the microfilaments.
Project (No. 001103058) supported by the Key Program of Science and Technology Bureau of Zhejiang Province, China 相似文献
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Assignment of <Emphasis Type="Italic">CCR7</Emphasis> gene to chicken chromosome 27 by radiation hybrid panel mapping 总被引：1，自引：0，他引：1
Tian Y Lu LZ Fu Y Tao ZR Shen JD Wang DQ Yuan AP Yin ZZ 《Journal of Zhejiang University. Science. B》2007,8(5):314-317
The protein encoded by CC chemokine receptor 7 （CCR7） is a member of the G protein-coupled receptor family. This receptor was identified as a gene induced by the Epstein-Barr virus （EBV）, and is thought to be a mediator of EBV effects on B lymphocytes. This receptor is expressed in various lymphoid tissues and activates B and T lymphocytes. It has been shown to control the migration of memory T cells to inflamed tissues, as well as stimulate dendritic cell maturation. To map the CCR7 gene in chicken chromosome, a 6000 rads chicken-hamster radiation hybrid panel （ChickRH6） was used. PCR of samples from ChickRH6 revealed that the location of CCR7 gene is linked to the maker SEQ0347 （6 cR away） with LOD score of 16.6 and that the marker SEQ0347 is located on chromosome 27 at 27 cR of RH （radiation hydrid） map. We compared the corresponding human mRNA sequence with the predicted coding sequence of chicken CCR7 gene, and found that the assembled contig shared a high percentage of similarity with that of the human gene. 相似文献
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INTRODUCTION Diabetes is the largest morbidity of patients with heart failure and adversely affects outcomes of car- diovascular diseases (Beller, 2001). Oxidative stress has been associated with the pathogenesis of chronic diabetic complications including cardiomyopathy (Cai and Kang, 2003). The ability of antioxidants to inhibit these injuries has raised the possibility of newer therapeutic treatment for diabetic heart dis- eases. Recently, Bcl-2 gene has been focused because it was in… 相似文献
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肌动蛋白（actin）在维持细胞结构、细胞运动和细胞分裂等过程中发挥着重要的作用.为了克隆鳡（Elopichthys bambusa）β-肌动蛋白（β-actin）全长cDNA,采用反转录PCR（RT-PCR）和cDNA末端快速扩增（rapid amplification of cDNA ends,RACE）技术,从鳡肌肉获得全长为1775bp的β-actin cDNA序列,其中包含1128bp的开放性阅读框,编码375个氨基酸,5′-非翻译（UTR）区为98个核苷酸,3′-UTR区为549个核苷酸.核苷酸与氨基酸的同源性分析发现,鳡β-actin与鲤形目类硬骨鱼的同源性均在98%以上,其中与团头鲂（Megalobrama amblycephala）的同源性最高,分别为98.94%和99.73%,而与其他脊椎类动物如哺乳类、鸟类、两栖类的同源性也分别在85%和97%以上,说明该基因在生物的分子进化过程中具有很高的保守性.采用核苷酸系统发育分析结果显示鳡β-actin与鲤形目类硬骨鱼聚类在一起,且与团头鲂的亲缘关系最近.RT-PCR分析结果显示,β-actin基因在鳡的肝脏、肾、肠、脑、心脏、鳃和肌肉等7个组织均有表达. 相似文献
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谷胱甘肽过氧化酶2(GPx2),是生物体内重要的一类抗氧化酶,能够通过酶解过氧化氢阻断活性氧(ROS)的有害作用。本研究从七鳃鳗的血液c DNA文库中克隆了GPx2 c DNA全长和基因组DNA序列。序列分析表明,其c DNA全长为868 bp(Gen Bank序列号KM211710),包括53bp 5′非编码区、251bp 3′非编码区和564 bp开放阅读框,编码由187个氨基酸组成的多肽。基因组DNA序列(Gen Bank序列号KM211711)揭示了基因组特征含有2个外显子和1个内含子结构。系统发育分析表明,七鳃鳗GPx2(Lj GPx2)与其它的GPx2具有很高的同源性。利用实时荧光定量PCR检测到GPx2基因在七鳃鳗各组织中广泛表达,其中在口腔腺、心脏、卵、生殖腺中表达量较高。此外,用脂多糖(LPS)体内刺激七鳃鳗后发现,Lj GPx2 m RNA在生殖腺中表达量显著升高。本研究为探讨GPx2在七鳃鳗的免疫应答中的作用提供了理论依据。 相似文献
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好川文化是我省继河姆渡文化、马家浜文化、良渚文化之后确立的又一支考古文化。文章重点分析了浙西南遂昌好川出土的四大类器物———玉器、石器、漆器、陶器的器型、色彩及装饰纹样,展示了浙西南山区先民们在新石器时期精湛的工艺技术和高雅的审美情趣。 相似文献
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丽水创建森林城市的必要性及实施策略 总被引：1，自引：0，他引：1
丽水是浙江省最大的林区市、全国南方重点林区市之一,森林覆盖率80．8％。从丽水创建森林城市是生态文明建设、城市科学发展、人民生活水平提高、增加城市综合竞争力的需要出发,提出了丽水创建森林城市的基本理念、基本要求和要处理的基本关系。 相似文献
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Perception of sign language and its application to visual communications for deaf people 总被引：1，自引：0，他引：1
Video communication systems for deaf people are limited in terms of quality and performance. Analysis of visual attention mechanisms for sign language may enable optimization of video coding systems for deaf users. Eye-movement tracking experiments were conducted with profoundly deaf volunteers while watching sign language video clips. Deaf people are found to fixate mostly on the facial region of the signer to pick up small detailed movements associated with facial expression and mouth shapes. Lower resolution, peripheral vision is used to process information from larger, rapid movements of the signer in the video clips. A coding scheme that gives priority to the face of the signer may be applied to improve perception of video quality for sign language communication. 相似文献
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杨玄博 《湖州师范学院学报》2011,33(6):80-83
沪杭甬铁路是清末修建的一条贯通江南经济重镇间的铁路,它的诞生与英帝国主义的经济侵略意图息息相关。在江浙人民的不懈斗争之下,沪杭甬铁路的修建、管理及营运事业均摆脱了英帝国主义的控制,并成为全国商办铁路的典范。民国创立不久,这条倾注了江浙人民心血的模范铁路,却无奈遭到国有化之命运。 相似文献
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根据GenBank发布的基因序列,设计PCR引物,分别从诸葛菜(Orychophragmus violaceus)的花瓣基因组DNA和cDNA克隆到查尔酮合成酶基因,并定名为OvCHS,序列已上传至NCBI数据库,登陆号为EF408918。序列分析表明,OvCHS基因的基因组全长为1263 bp,具一个75 bp的内含子,编码区全长为1188 bp,编码395个氨基酸。与模式植物拟南芥(Arabidopsis thaliana)查尔酮合成酶基因AtCHS比较发现,两基因编码区有135个碱基不同,相似性为88.64%,氨基酸序列中仅16个氨基酸残基的差异,相似性达95.95%。 相似文献
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目的探讨孕妇外周血分离胎儿有核红细胞与FISH分析技术在无创性产前诊断中的应用。方法选取于2018年1月至2019年1月期间,20例11~24周妊娠高危孕妇,对外周血均按照常规密度梯度法,对单个核细胞进行分离,并选择红细胞特异性抗体CD71,HbF结合运用流式细胞仪设备行FACS分选富集NRBC,并行FISH分析技术。结果完成20例孕妇的外周血标本NRBC分选,达100%的分选率,其中CD71及HbF双阳性细胞(3.46±1.65)×10-2;对其中18例孕妇运用FISH分析技术均成功分析,未发现任何异常问题。结论经孕妇外周血内分离富集所得胎儿有核红细胞,运用FISH分析技术对胎儿特定染色体进行检测,能够实现无创性产前诊断及时发现遗传性疾病,可为临床改善母婴分娩预后结局提供指导。 相似文献
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[目的]新的大肠癌相关性抗原EID3的基因克隆及其诊断价值研究.[方法]利用大肠癌病人体内血清中所含的对肿瘤抗原产生的特异性抗体筛选睾丸组织cDNA噬菌体表达文库和大肠癌组织cDNA噬菌体表达文库(SEREX),并用RT-PCR技术研究EID3 mRNA在正常组织和大肠癌传代细胞表达.[结果]睾丸组织cDNA噬菌体表达文库筛选得到了可以诱导大肠癌病人抗体免疫应答的新抗原EID3基因(Gen-bank NM_001008394.1).它们定位于染色体19q13.2,EID3含1个外显子.通过RT-PCR分析发现,EID3基因在43例大肠癌传代细胞株中,39例阳性,阳性率为90.7%.在正常组织中,除睾丸组织外不表达或有极低水平转录.[结论]EID3 mRNA表达检测用于诊断大肠癌,可能具有高特异性和高敏感性的特点.EID3蛋白被首次发现在大肠癌病人中能够诱导机体的抗体免疫应答,为一个新的大肠癌相关性抗原分子.其功能可能与抑制细胞的恶性增殖相关,并可进一步研究其用于治疗和诊断大肠癌的可行性. 相似文献