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目的应用PCR-DGGE（denaturing gradient gel electrophoresis,变性梯度凝胶电泳）技术对孤独症家庭成员肠道微生物菌群结构进行研究.材料和方法提取粪便细菌总基因组DNA,PCR扩增细菌16S rDNA基因V3可变区,DGGE方法检测PCR产物.结果建立了孤独症家庭成员肠道菌群组成的DGGE指纹图谱,分析结果显示孤独症儿童肠道菌群结构的相似度为0.42-0.65,家庭内孤独症儿童与父母之间的相似度为0.42-0.68.结论 PCR-DGGE技术是一种快速有效的用于分析研究人体肠道菌群结构的技术.孤独症儿童肠道菌群结构与父母的相似度较高,提示生活环境对肠道菌群的组成有影响. 相似文献
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肠道菌群结构多样性初筛研究 总被引：1，自引：0，他引：1
目的：探讨研究肠道菌群结构的初筛方法,为进行有效、高质量的高通量测序奠定基础.方法：用粪便采样器采集健康儿童粪便进行粪便标本预处理后,采用酚—氯仿方法提取样本菌群基因组DNA,并进行16S rDNAV3区片段PCR扩增,扩增产物用变性梯度凝胶电泳法（denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE）检测分析.结果：采用该方法成功地扩增出16S rDNA V3区230bp的片段,经DGGE的方法可以比较出不同儿童粪便样本菌群结构的不同.结论：基于16S rDNA V3区的PCR-DGGE技术能够应用于研究肠道微生物多样性,对于肠道微生物的研究起到了初筛的作用. 相似文献
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实时荧光定量PCR(real- time quantitative PCR)由Higuchi等人在1992年第一次报告,是一种新兴的分子生物学技术,这项技术灵敏、简便、快速、不需使用放射性同位素.它将EB加入PCR反应体系,再通过改装的带有CCD的PCR仪检测样品的荧光强度,这不仅是一种高敏感、高特异的检测核酸分子的定性方法,同时也可以对核酸分子进行精确定量.而且随着PCR技术的不断发展,使得实时荧光定量PCR日益成熟,极大的推动了分子生物学的发展,更是在疾病诊断中发挥了很重要的作用. 相似文献
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实时荧光定量PCR技术的操作实践 总被引：5，自引：0，他引：5
采用Mx3000P型实时荧光定量PCR仪,以SYBR(R) Green I法相对定量技术为例,设计1例检测针对HIV-1 vpr基因的特异性siRNA基因沉默效果的实验.介绍了实时荧光定量PCR技术上机前样本的制备过程、检测程序及相关参数的设置方法等操作流程;结合熔解曲线、扩增曲线进行结果分析;强调了实验整体设计、引物设计与PCR反应体系的优化和内参的恰当选择在实时荧光定量PCR技术中的重要性. 相似文献
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酸奶在储存过程中菌群结构变化研究 总被引：1，自引：0，他引：1
张红琳 《南京晓庄学院学报》2010,26(6):44-46
为了探究酸奶储存过程中微生物菌群结构的变化,为其长期贮存奠定理论基础.采用酚/氯仿法抽提细菌基因组DNA,以此作为PCR反应的模板,进行16S rDNA基因有效扩增,并将PCR扩增产物进行DGGE电泳.用Bionumerics软件对DGGE分子指纹图谱进行舌苔菌群结构相似性分析.实验结果表明,采用该方法成功地扩增出16S rDNA V3区片段,为230 bp.DGGE分子指纹图谱结果表明,1、2号酸奶样品高相似性为93%,1-3号与4-7号的相似仅为6%,表明酸奶贮存过程中,菌群结构发生了变化. 相似文献
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王志平 《渭南师范学院学报》2012,(10):61-64
荧光定量PCR技术是在普通PCR技术基础上建立起来的一种利用标准曲线对未知模板进行定量分析的方法.它特异性强、灵敏度高、操作简便、快速高效,在疾病诊断、食品检测、环境监测以及生物学研究等方面具有广泛的应用前景.在阐述荧光定量PCR技术原理的基础上,系统论述了该技术在各方面的应用. 相似文献
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黄国韦 《赤峰学院学报(自然科学版)》2013,(15):57-58
在不提取RNA的情况下,激光切割少量细胞进行基因转录本的定量检测,目前尚未有报道,本研究以大鼠海马神经元中的NGF为例,定量PCR技术检测了激光切割的20个细胞中的NGF转录本含量,为进一步研究特定神经元细胞中NGF功能提供参考依据. 相似文献