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1.
以质粒pSC101为载体,用鸟枪法将短小芽孢杆菌A3染色体的β—内酰胺酶基因,克隆至大肠杆菌HB101。经质粒检测及酶切电泳分析证明,克隆的β—内酰胺酶基因位于2.6kb的EcoRI片段上,将此片段连接到质粒PAL32转化枯草杆菌,亦能表达并向胞外分泌β—内酰胺酶。 相似文献
2.
用PCR方法从地衣芽孢杆菌WH-08基因组DNA中分别扩增α-淀粉酶基因amyL启动子PamyL和终止子TT,用重叠PCR技术将两者连接,重叠PCR产物用Hind III和EcoR I双酶切后,与经相同酶切的载体PHY300 PLK连接,构建重组质粒PHY-PamyL-TT。该重组载体的构建为外源蛋白在地衣芽孢杆菌中的高效表达奠定了基础。 相似文献
3.
克隆、构建弹状胭脂鱼弹状病毒糖蛋白基因重组质粒,并进行表达和鉴定.用RT-PCR方法扩增出大小为1.5kb的CSRV-G基因片断,构建重组克隆质粒pRSET-C/CSRV-G,并将其转化进入大肠杆菌DH5α原核表达系统,酶切鉴定证明重组质粒的正确性.经IPTG诱导后表达重组蛋白,利用SDS-PAGE对表达产物进行分析鉴定,诱导后能够表达预期的分子量为55 kD的融合蛋白. 相似文献
4.
目的：构建福氏志贺菌重组双歧杆菌Bb-ipaB疫苗。方法：以福氏志贺菌DNA为模板扩增福氏志贺菌ipaB基因,双酶切后克隆到pGEX-1λT质粒上,构建重组质粒pGEX-ipaB,电穿孔法将该质粒转化入Bb,构建福氏志贺菌重组Bb-ipaB疫苗。结果：成功扩增出分子量约为1 711 bp的ipaB基因,双酶切证实基因成功插入pGEX-1λT中,并成功转化入双歧杆菌,构建rBb-ipaB疫苗。结论：成功构建福氏志贺菌重组rBb-ipaB疫苗,为该疫苗的进一步研究奠定了基础。 相似文献
5.
为了克隆多重耐药肺炎克雷伯菌质粒介导的DHA-1型β-内酰胺酶并探测其序列的结构特征,抽提接合菌的质粒,用限制性内切酶HindIII消化,酶切粘末端用Taq酶补平并在末端加单个的脱氧腺苷(A),与pGEM-TEasy载体进行T-A克隆.在含氨苄西林和头孢西丁的平板上筛选重组菌,抽提重组质粒,酶切分析,克隆片段用步移法测序.通过以上方法,克隆筛选到含5.2kb插入片段的重组质粒pT948,插入片段测序发现其含有一个DHA-1基因和一个ampR基因,依次在DHA-1结构基因的侧翼发现一个插入序列IS26.因此,可以认为成功克隆了质粒介导的DHA-1基因,并在其相邻序列中存在插入序列IS26. 相似文献
6.
以λEMBL3为载体,以大肠杆菌Q358及Q359为宿主成功地构建了枯草芽胞杆菌808的基因文库。采用Marmur的方法从供体菌中提取大于50Kb的染色体DNA,酶切后用5～25％NaCl梯度离心,分部收集15～20Kb的DNA片段作为供体,从甘油梯度纯化的噬菌体提取λEMBL3 DNA经BamHI,EcoRI双酶解,退火处理,纯化得左、右臂作为载体,供体与载体DNA以1:2浓度进行连接反应,连接产物用大肠杆菌SMR10单菌系统制备的包装抽提物进行体外包装,感染大肠杆菌Q358及Q359,测定重组噬菌体数目,实验结果表明:重组体滴定达7.5×10~4pfu/μgDNA,超过Clarke和Carbon公式的理论值的要求,并从该文库中钓出淀粉酶基因,证明所建文库是有效的。 相似文献
7.
陆军 《常熟理工学院学报》1996,5(4):40-49
ｐＧＡ４６－４是一个带有谷氨酸棒杆菌妄动功能片断的质粒。用ＰＣＲ技术从ｐｇａ４６－４中扩增该启动子片断，将该启动子Ｔ４噬菌体Ｐ３２基因的终止子克隆到大肠杆菌质粒ｐＫ１８上，再接入棒状杆菌粒ｐＸＺ１０１４２构建一穿梭表达载体。 相似文献
8.
Yun-mei CHEN Hai-yang XU Yang WANG Jian-fa ZHANG Shi-ming WANG 《Journal of Zhejiang University. Science. B》2014,15(11):979-985
研究目的：提高胞外多糖索拉胶的产量。
创新要点：透明颤菌血红蛋白基因在质粒上表达,不加抗生素发酵生产索拉胶。
研究方法：将透明颤菌血红蛋白基因构建到广谱质粒pCM158上得到重组质粒pCM158-vgb,重组质粒转入土壤杆菌ZX09中,使透明颤菌血红蛋白在土壤杆菌ZX09中表达。
重要结论：在土壤杆菌ZX09中颤菌血红蛋白的表达解决了发酵过程中氧受限的问题,提高了宿主菌的呼吸速率、蔗糖酶活性和黏度,将发酵产物索拉胶的产量提高了30％。 相似文献
9.
Yun-mei CHEN Hai-yang XU Yang WANG Jian-fa ZHANG Shi-ming WANG 《Journal of Zhejiang University. Science. B》2014,(11)
研究目的:提高胞外多糖索拉胶的产量。创新要点:透明颤菌血红蛋白基因在质粒上表达,不加抗生素发酵生产索拉胶。研究方法:将透明颤菌血红蛋白基因构建到广谱质粒pCM158上得到重组质粒pCM158-vgb,重组质粒转入土壤杆菌ZX09中,使透明颤菌血红蛋白在土壤杆菌ZX09中表达。重要结论:在土壤杆菌ZX09中颤菌血红蛋白的表达解决了发酵过程中氧受限的问题,提高了宿主菌的呼吸速率、蔗糖酶活性和黏度,将发酵产物索拉胶的产量提高了30%。 相似文献
10.
分别构建成两个克隆了邻苯二酚双加氧酶基因的棒状杆菌－大肠杆菌表达质粒ｐＪＬ１３和ｐＪＬ２３,质粒ｐＪＬ２３中ｘｙｌＥ基因下游带有ｐＪＬ１３中没有的Ｔ３２终止子。比较两个质粒的邻苯二酚双加氧酶表达活性,发现Ｔ３２可在棒状杆菌中有效地促进外源原表达。 相似文献
11.
本文综述了蜡状芽胞杆菌群分子分类的最新研究进展,重点阐述了蜡状芽胞杆菌、炭疽芽胞杆菌和苏云金芽胞杆菌这三个种之间的分子鉴定关系。 相似文献
12.
从新疆某铀矿厂采集土样,通过光学显微镜观察其伴胞晶体,并经生理生化特征和cry基因的鉴定确认为苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt),将其命名为BRC-ZYR4。利用PCR-RFLP方法和SDS-PAGE方法对该菌株进行了cry基因型和杀虫晶体蛋白(Insecticidal Crystal Proteins,简称ICPs)的鉴定。结果表明,BRC-ZYR4可能含有cry1Ad、cry1Cb和cry1Ea基因,含有约130、75、50、30和25kDaICPs。 相似文献
13.
采用圆形纸片法,对鼠尾藻脂溶性物质及经柱层析分离得到的不同洗脱组分进行抗食物腐败菌实验.结果表明,鼠尾藻粗脂对大肠杆菌的抑菌圈为1.25mm.乙醇洗脱组分具有较强的抗4种食物腐败菌的活性,其对枯草杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和假单胞杆菌的抑菌圈分别达到3.0mm,4.0mm,5.0mm,2.5mm. 相似文献
14.
目的:探测细胞氧化低密度脂蛋白(LDL)过程中人α-防御素-1(HNP-1)基因的表达水平并构建人HNP-1的克隆载体。方法:提取人单核细胞系(THP-1)的总RNA,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法获得cDNA,采用pBS-T克隆HNP-1。结果:用RT-PCR在THP-1细胞总RNA中扩增出一条285 bp的DNA片段,与HNP-1 cD-NA片段大小一致。重组质粒经PCR和测序鉴定获HNP-1基因克隆。另外,LDL可诱导THP-1细胞HNP-1的mR-NA表达增加。结论:HNP-1可能参与LDL的细胞氧化过程,成功构建HNP-1克隆载体将为进一步亚克隆到原核及真核的表达载体提供了基础。 相似文献
15.
以NCBI中的EST数据库为主要数据来源,以一系列生物信息学软件为工具,进行了超氧化物歧化酶（SOD）基因的电子克隆及生物信息学分析。结果表明：通过电子克隆方法获得了SOD基因的编码区全长序列,该预测的SOD蛋白质氨基酸序列与数据库中同类基因的蛋白质氨基酸序列具有极高的相似性,并且含有完整的保守结构域;电子克隆到的SOD基因编码的不是分泌蛋白,也不是膜蛋白,而是胞质蛋白。通过某个基因的一个EST序列采用电子克隆的手段进行基因全长的电子拼接是可行的。 相似文献
16.
以含翻译起始密码子ATG的质粒pSⅪⅤⅥ Ⅹ3/4为转移载体,将多角体蛋白及切除部分5′和3′端的乙型肝炎核心抗原(HBcAg)基因同时插入粉纹夜蛾核型多角体病毒(TnNPV)基因组中,构建了形成多角体的重组毒株。该毒株能利用合成—多角体ⅪⅤ串联启动子,表达由截短的HBcAg序列及其上下游多接头与杆状病毒DNA部分序列组成的融合蛋白基因。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、Wcstern印迹与免疫电镜观察的结果表明,融合蛋白基因表达产物的分子量约20.5KD,与理论计算值相符,并保留了HBcAg的抗原性,亦能形成典型的HBcAg颗粒。组建含多克隆点及截去两端序列的HBcAg基因转移载体质粒,使编码多肽抗原的寡聚核苷酸易于克隆,以HBcAg融合蛋白方式在杆状病毒载体系统中表达,并能形成HBcAg为蛋白载体的抗原颗粒结构。 相似文献
17.
杨俊杰 《山东教育学院学报》2012,27(5)
本研究将苏云金芽孢杆菌（bt）与半夏凝集素抗虫基因（pta）两类抗虫基因连接到具有高效性的植物表达载体pCAMBIA3300中,重组表达质粒分别经过ApaⅡ单酶切及xhoⅠ和KpnⅠ双酶切鉴定、分析后,实验结果表明含有双价抗虫基因pCAMBIA3300-bt-pta的植物重组表达质粒已构建成功。 相似文献
18.
以高拷贝克隆载体pUC118为骨架载体,在pUC118质粒Amp~r基因的Eam11057酶切位点上,以点突变的方式封闭Eam11051酶切位点,将一人工合成的具有两个Eam11051酶切位点的互补寡聚核苷酸链(两端具有BamHI接头)插入已封闭Eam1105I酶切位点的pUC118质粒的BamHI位点,构成新的克隆载体,此质粒命名为pUC118E,该载体经Eam11051酶切后,可产生3’端突出一个T碱基的T-vector,能与PCR产物直接连接,经转化大肠杆菌JM109证实,该改造过的pUC118质粒,仍可使宿主细胞具有氨苄抗性,可作为氨苄选择标记的克隆载体。 相似文献
19.
将pUC18-leg质粒上的野豌豆贮藏蛋白基因(leg)与pBR325的氯霉素抗性(Cm)基因连接在一起,构建出中间载体pJG9,通过三亲交配技术,将大肠杆菌中的pJG9转移至含pGV3850的农杆菌中,并选出含整合质粒的农杆菌.利用类似叶盘转化法的方法,将pGV3850上的外源基因转入甘蓝中,在含Cm15/μg/ml和先锋霉素500μg/ml的培养基上,选择愈伤组织并由此再生出转化植株,并得到胭脂碱测定和DNA分子杂交的证实. 相似文献
20.
根据Imbereehts等报道的EHEC F18菌毛主要亚单位(fedA)基因序列设计一对引物，以重庆地区仔猪水肿病流行强毒株W96基因组DNA为模板，采用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增到约500bp的核酸片段。用常规DNA重组技术将该片段克隆到表达载体pET28b( )的SalI-Hindm位点之间构建重组表达质粒pET28fedA，序列测定结果显示该克隆片段长447bp，同源性分析表明该基因片段与GenBank报道的fedA核苷酸序列有99．4％的同源性，W96株fedA基因三处核苷酸发生变异，其中两个为无义突变，另一个导致Q100R突变。将pET28fedA转入BL21(DE3)中进行诱导表达，经SDS—PAGE电泳检测上清存在约20KD的蛋白，6xHis affinity tag IMAC亲和层析显示该蛋白能被亲和纯化，说明是含有组氨酸标签的融合目的蛋白。 相似文献