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采用液氮研磨法、反复冻融法、反复冻融-溶菌酶法、溶菌酶法、超声波法、超声波-溶菌酶法对节旋藻TJCU-7的藻细胞进行破碎,用改进的CTAB法提取基因组DNA,通过凝胶电泳检测,核酸浓度、纯度测定及PCR扩增效果来评价各破壁方法的优劣。结果发现,6种方法对节旋藻均有较好的破壁效果:经反复冻融法、溶菌酶法及反复冻融-溶菌酶法破壁后所获得的DNA浓度(2 000 ng/μL)显著高于其他方法,其中液氮研磨法所得的DNA浓度最低(40 ng/μL)。除超声波法所得DNA的OD260/OD280值大于2.00,说明有部分RNA污染外,其余方法所得DNA的OD260/OD280的值均在1.90~2.05,纯度较高。经PCR扩增后均得到了2 kb的目的片段,可以满足基本的生物学实验要求。综合考虑,反复冻融法,溶菌酶法简单、快速,破壁效果好,是节旋藻DNA提取时的优先考虑方法。 相似文献
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改进的CTAB提取植物DNA方法 总被引：27，自引：0，他引：27
根据DNA分子的物理化学特性及植物材料的特点,改进了传统利用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法提取植物叶片中DNA的操作方法,采用新鲜配制的CTAB溶液、液氮快速研磨植物材料、添加适量还原剂和适量吸取提取液中核酸层等措施,减少了提取过程中提取液的褐变和杂质对DNA产质量的影响.同时,列出了提取过程中各操作步骤的注意事项和关键点.该方法操作简便、快捷,提取出的DNA质量较好,能很好地用于DNA的分子遗传特性分析,可作为教学和研究工作中植物DNA的提取方法. 相似文献
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本实验是采用液氮研磨破壁法提取线粒体DNA,采用展膜法制备电镜的DNA样品,并在透射电镜上成功地观察到了甘蓝茎点霉的线粒体DNA,其形状为线形,长度约为1.40微米。 相似文献
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从富含酚类的茶类植物叶中提取纯净的总DNA 总被引：15，自引：0，他引：15
采用2%十六烷基三甲基溴化胺（CTAB）法，改进研磨方法并适当延长研磨时间至20～30min，选择合适的保温温度和保温时间，在60℃条件下水浴保温1.5h，从野生可可茶（Camellia ptillopylla）和栽培茶类（C.assamica,C.sisnensis）植物中提取到最多且较纯的总DNA，平均含量为1267ng/μL，能直接有于PCR扩增。经玻璃粉纯化系统（DPS）纯化后，获得高纯度的DNA。平均含量约为136ng/μL，纯化回收率平均为11%，能完全满足RAPD、AFLP、RFLP分析及测序等分子生物学实验。 相似文献
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濒危植物格氏栲叶片基因组DNA提取方法研究 总被引：3，自引：0，他引：3
格氏栲植物体内酚类、多糖等次生物质含量较高,严重影响提取其基因组DNA的产量和质量。通过对格氏栲叶片DNA几种提取方法获得的DNA质量分析。结果表明,改良CTAB法是最为理想的提取方法。加入质量分数为10％的PVPP粉与材料充分研磨,在提取缓冲液中加入体积分数为3％的β-巯基乙醇,能有效地去除材料中的多酚类物质;用氯仿／异戊醇（24：1）抽提裂解液2次所获得的上清,加入1／5倍体积的7．5mol／LNH4Ac,再用异丙醇沉淀DNA,可以有效去除多糖的干扰,所提取的DNA纯度较高,可用于PCR扩增。 相似文献
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几种苎麻园土壤微生物总DNA提取方法比较 总被引：1，自引：0，他引：1
实验设计对比了苎麻园土壤微生物总DNA6种提取方法。方法Ⅰ采用裂解酶、蛋白酶K、SDS与CTAB处理;方法Ⅱ结合利用CTAB、SDS、LDS和BME;方法Ⅲ综合采用玻璃珠、CTAB和SDS法;方法IV结合利用SDS-GITC-PEG;方法V利用尿素、SDS、LDS和BME综合处理;方法VI则利用试剂盒处理土壤。6种方法都可以提取到23kb左右的DNA片段,经过TENP和PVPP方法预处理的土壤样品,能有效去除腐殖酸等污染物,且提取得到的土壤总DNA完整性好、纯度高,不需要纯化就可用于PCR扩增。但不同方法取得的DNA的片段长度、产量和纯度存在明显差异。通过比较,改进并建立了可用于宏基因组构建的高纯度、大片段DNA的方法。 相似文献
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经济植物DNA提取与纯化的三种方法比较 总被引：6，自引：0，他引：6
目的：优化适于普通院校实验室条件下开展经济植物DNA提取与纯化的实验方法。方法：1．标准操作，DNA浓度和纯度都较好，但耗时，设备条件要求高。2．优化简易操作，DNA浓度和纯度虽较不理想，但依然符合实验要求，而且省时，经济、易操作。3．Wizad^TM clean-up system试剂盒方法。DNA浓度纯度较理想，但价格昂贵。结果与讨论：优化简易操作省时、经济、易操作、此方法适用于教学实验和科研课题中对大量材料的处理。 相似文献
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一、实验步骤
1.提取绿叶中的色素,制取叶泥.
(1)称取5 g绿叶,除去粗的叶脉,剪碎,放入研钵中.
(2)向研钵中放人少许二氧化硅和碳酸钙,再加入5mL无水乙醇,进行快速、充分的研磨以形成叶泥. 相似文献
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拟南芥总RNA的简便提取与效果分析 总被引：4，自引：0，他引：4
金美芳 《福建师大福清分校学报》2007,(2):16-18
以COL-0型野生型拟南芥菜为材料,使用枪头在1.5ml的Eppendorf管中直接捣碎的方式,用Trizol试剂提取总RNA。通过总RNA的纯度、浓度测定及琼脂糖凝胶电泳分析提取效果。测定结果表明样品纯度分别达到1.9843和1.9741,浓度分别为1.2061μg/μl和1.1187μg/μl,电泳结果显示总RNA的28SrRNA、18SrRNA和5SrRNA三条带清晰、无拖尾。与研钵研磨材料比较,此方法简便、需要材料少、降低了提取过程中RNA的降解几率。 相似文献
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质粒常被用做基因的载体．纯化质粒DNA的方法可以分为3种：碱裂解法、煮沸裂解法和SDS碱裂解法．这些方法可以纯化共价闭合环结构质粒DNA,而大量获得高纯度的闭环结构质粒DNA最经典方法是氯化铯．溴化乙锭密度梯度离心法．该方法经过我们的实践与优化,减少了质粒中蛋白质和基因组DNA的污染,提高了质粒的纯度和得率,所得到的质粒用于拟南芥原生质体转化,效率高达60％～70％,明显高于普通的质粒小量抽提试剂盒所提取的质粒DNA． 相似文献
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用SDS（十二烷基磺酸钠）溶液滴定溶解肝细胞膜系统，提取核中含DNA的核蛋白，并用亚甲蓝试剂验证。用此方法进行实验，具有取材多（种类多，五四季均有）、速度快（45分钟就能得到结果）、效果好（提取的DNA含量多，且不用有毒物品）、费用省（材料便宜，且不用离心机等仪器设备）等优点，在中学生物学教学和课外活动中有一定的推广价值。一、提取DNAl、切取1厘米XZ厘米新鲜的猪、鸡、鸭、牛蛙、黄鳝等动物肝，置于研钵内，用解刮剪刀剪碎成小粒状。2、在研钵中作圆周状研磨，5分钟后加入10毫升0．9％氯化钠，搅拌均匀。3、用2至3层… 相似文献
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一种提取茶树基因组DNA的方法——改良的CTAB法 总被引：4，自引：0，他引：4
采用改良的CTAB法与常规的CTAB法提取茶叶基因组DNA进行比较,结果证明改良的方法得到DNA浓度和纯度高,无蛋白质和RNA等杂质影响,并且可以很好的应用于ISSR分子标记分析。 相似文献
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5种哺乳动物组织DNA提取比较研究 总被引：2，自引：0，他引：2
以大仓鼠、家兔、刺猬等动物新鲜冷冻样品为实验材料,比较了从不同动物的5种样品组织中提取的全基因组DNA.结果表明:从以上三种动物不同样品组织中均能提取到比较纯净完整的基因组DNA,而且从动物肝脏中提取的全基因组DNA纯度和浓度都优于其它材料,能够更好的适用于继后的分子生物学试验研究. 相似文献