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1.
《实验室研究与探索》2016,(8):40-43
建立了一种简便适用于从真核细胞酿酒酵母菌中提取总蛋白的方法,应用该方法探索了两株对核苷类药物5-FC高耐受菌株的蛋白表达特性。实验中以细胞破碎率和总蛋白浓度为主要检测指标,对比分析了6种酵母细胞破碎方法,即液氮研磨、超声波破碎、酸洗玻璃珠法、酶法、反复冻融法、TNBIO高压细胞破碎,通过比色法测定了总蛋白的含量,发现改进后的酸洗玻璃珠法的细胞破碎率为81.25%,总蛋白含量152.67 mg/m L,效果明显优于其他几种方法.实验表明,在裂解液中添加适量的PMSF等蛋白酶抑制剂,可以有效防止蛋白的降解。经过SDSPAGE对核苷类药物高耐药性菌株酵母总蛋白表达特性分析,酸洗玻璃珠法提取的蛋白含量高,所含杂质少,条带比较多且清晰,其中相对分子质量约为21 kDa和43kDa的蛋白有明显的表达差异,可能与菌株细胞的耐药性相关。 相似文献
2.
目的:研究环氧合酶-2(COX-2)对卵巢癌细胞迁移和耐药性的影响及其机制。创新点:本研究发现COX-2对卵巢癌发生发展有一定的促进作用,可以通过上皮间质转化(EMT)途径促进卵巢癌细胞的迁移和顺铂(CDDP)耐药。其抑制剂塞来昔布(CXB)能起到协同抗癌的效果。方法:CCK-8检测CXB和CDDP对SKOV3和ES2细胞的毒性作用。划痕实验评估COX-2对卵巢癌细胞迁移的作用。蛋白质免疫印迹(western blot)和聚合酶链式反应(PCR)检测EMT相关基因和蛋白的表达水平。结论:COX-2可以通过EMT促进卵巢癌细胞迁移和CDDP耐药;CXB可以起到抑制作用,与CDDP协同抗癌。COX-2可以作为卵巢癌治疗的一个潜在靶点。 相似文献
3.
目的:研究环氧合酶-2(COX-2)对卵巢癌细胞迁移和耐药性的影响及其机制。创新点:本研究发现COX-2对卵巢癌发生发展有一定的促进作用,可以通过上皮间质转化(EMT)途径促进卵巢癌细胞的迁移和顺铂(CDDP)耐药。其抑制剂塞来昔布(CXB)能起到协同抗癌的效果。方法:CCK-8检测CXB和CDDP对SKOV3和ES2细胞的毒性作用。划痕实验评估COX-2对卵巢癌细胞迁移的作用。蛋白质免疫印迹(western blot)和聚合酶链式反应(PCR)检测EMT相关基因和蛋白的表达水平。结论:COX-2可以通过EMT促进卵巢癌细胞迁移和CDDP耐药;CXB可以起到抑制作用,与CDDP协同抗癌。COX-2可以作为卵巢癌治疗的一个潜在靶点。 相似文献
4.
目的:筛选大蒜素有效作用于人上皮性卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV-3/DDP的合适的浓度范围,为进一步探讨大蒜素抑制卵巢癌SKOV-3/DDP细胞生长的作用机制奠定基础.方法:首先培养人上皮性卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV-3/DDP,细胞生长至时数生长期后选取0.625～200μg/ml共9个浓度的大蒜素分别作用SKOV-3/DDP细胞株24、48小时后,用MTT法测定细胞活力.结果:0.625～200μg/ml大蒜素均能抑制SKOV-3/DDP细胞的生长,且呈时间--剂量依赖性,但高浓度(100～200μg/ml)时细胞毒性作用明显,作用24小时细胞抑制率分别为75.12%、82.79%,作用48小时细胞几乎全部死亡.结论:以上MTT结果可作为后期药物实验的大蒜素浓度及观察时间筛选的实验依据,可选择中低浓度(0.625～50μg/ml)作为进一步探讨大蒜素抑制卵巢癌SKOV-3/DDP细胞生长的作用机制(如观察大蒜素对SKOV-3/DDP细胞周期的影响等)的浓度范围. 相似文献
5.
目的:通过观察大蒜素对体外培养的人上皮性卵巢癌耐顺铂细胞株(SKOV-3/DDP)的超微结构的影响,以期寻找对耐顺铂治疗的上皮性卵巢癌患者的有效治疗药物。方法:细胞培养:体外培养人上皮性卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV-3/DDP,细胞生长至对数生长期后,调整细胞密度为5×l04/ml置于200ml的培养瓶中培养。用透射电子显微镜观察大蒜素作用后SKOV-3/DDP细胞的超微结构:大蒜素组用含25μg/ml大蒜素的培养液培养SKOV-3/DDP细胞,空白对照组用不含药的培养液培养SKOV-3/DDP细胞,两组作用24小时后收集细胞,通过透射电子显微镜观察SKOV-3/DDP的超微结构。结果:大蒜素对SKOV-3/DDP细胞超微结构的影响:透射电子显微镜观察未加药物培养的SKOV-3/DDP细胞呈椭圆形,细胞核为卵圆形,未出现凋亡细胞,经过大蒜素作用后的SKOV-3/DDP细胞则出现明显的超微结构改变并具有典型凋亡细胞特征:细胞核固缩,核膜皱缩,胞浆浓缩并出现大小不等的空泡,染色质浓聚,形成凋亡小体。结论:大蒜素可诱导SKOV-3/DDP细胞呈凋亡改变。大蒜素可诱导SKOV-3/DDP细胞凋亡可能是其对人耐顺铂上皮性卵巢癌的抗癌机制之一,为使大蒜素成为治疗耐顺铂上皮性卵巢癌患者的有效药物提供了可靠的体外实验依据。 相似文献
6.
文章初步探讨了用不同DNA提取方法,对盐土中微生物总DNA的提取效果.实验结果表明,由于盐土中微生物数量较少,溶菌酶-SDS-冻融裂解法、溶菌酶-SDS-蛋白酶K-冻融裂解法均无法提取到盐土中微生物的总DNA;变性剂-SDS-高盐法和试剂盒提取法能获得DNA,但效果不佳;只有用变性剂-SDS-高盐修改法能快速、有效地提取盐土中微生物的基因组DNA. 相似文献
7.
苹果RNA提取方法的探索 总被引：2，自引：0，他引：2
文章采用TRIZOL试剂快速提取法、CTAB法、改良CTAB法、RNAisoTM试剂盒法等四种方法以苹果枝条形成层区组织为材料提取总RNA,通过琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度仪检测来分析RNA质量。结果表明改良CTAB法是最适的苹果形成层组织的RNA提取方法,并得到高质量的总RNA,经反转录、PCR途径克隆到苹果生长素结合蛋白基因,为在基因水平上探索苹果生长发育机理奠定了基础。 相似文献
8.
目的:建立从铜耐性植物海州香薷地上部提取分离芹菜素糖苷的工艺技术,探索铜耐性植物海州香薷资源化途径。创新点:结合使用大孔树脂、凝胶树脂、聚酰胺树脂多种色谱柱技术,从铜耐性植物海州香薷中提取分离纯度达98%的黄酮苷类化合物芹菜素糖苷。方法:以铜耐性植物海州香薷为原料,用60%乙醇溶液浸提,提取液依次使用石油醚、乙酸乙酯、饱和正丁醇萃取。实验中,对饱和正丁醇萃取层,使用D101型大孔吸附树脂粗分离提取,Sephadex?LH-20型凝胶筛分分离,并借助半制备液相和聚酰胺树脂分离纯化,得到芹菜素糖苷单体(图1)。利用紫外光谱、液相色谱–质谱联用、红外光谱、一维和二维核磁图谱,鉴定芹菜素糖苷结构(图2~5)。结论:芹菜素糖苷是铜耐性植物海州香薷体内的天然产物,利用色谱技术可以从海州香薷植物体中分离出芹菜素糖苷单体。 相似文献
9.
抑癌基因PTEN载体构建及在LOVO细胞中的表达 总被引：1，自引：0，他引：1
目的:构建抑癌基因PTEN的表达载体并在LOVO细胞中表达。方法:从人外周血中提取总RNA,通过RT-PCR扩增出PTEN基因片段,将PTEN基因连入pLenti6/V5载体。测序鉴定后,经脂质体转染入LOVO细胞,对细胞株进行RT-PCR和Western blot检测。结果:DNA测序证实pLenti6/V5-PTEN表达载体为阳性克隆;该表达载体转染LOVO细胞后上调了PTEN mRNA和蛋白的表达。结论:成功构建了pLen-ti6/V5-PTEN表达载体,为进一步研究PTEN在LOVO细胞中的功能奠定了基础。 相似文献
10.
小麦基因组DNA提取方法比较研究 总被引：1，自引：0，他引：1
用4种方法对小麦基因组DNA进行提取,采用琼脂糖凝胶电泳法和核酸蛋白分析仪比较DNA的浓度和质量,结果显示,4种DNA提取方法在DNA浓度上有所差别,方法一所提取的DNA浓度最高,但消耗试剂最多;方法二所提取的DNA浓度最低,有蛋白质污染,但过程简单;方法三和方法四所提取的DNA浓度相当,方法三有蛋白质污染,过程简单,方法四纯度高,过程最复杂.采用同一对引物和反应体系对所提取的DNA进行PCR扩增,结果显示4种方法所提取的基因组DNA均能满足分子标记检测的需要. 相似文献