共查询到20条相似文献，搜索用时 640 毫秒
1.
目的:探讨外源性EGFP基因转染修饰兔骨髓间充质干细胞(m esenchymal stem cells,MSCs)的可行性。方法:用增强型荧光绿色蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)作为报告基因,以脂质体法转染骨髓间充质干细胞,观察转染结果、表达情况及对靶细胞活力的影响。结果:经荧光显微镜下观察证实:成功地对骨髓间充质干细胞实现了基因转染。结论:兔骨髓间充质干细胞能够在体外适宜的条件下进行长期培养;骨髓间充质干细胞可直接作为基因靶细胞,建立稳定表达EGFP的骨髓间充质干细胞系具有可行性,为进一步做标记的MSCs细胞的移植研究奠定基础。 相似文献
2.
目的：研究IL-4mRNA和IL-4蛋白在哮喘大鼠CD34^＋细胞中的转录表达及孟鲁司特（montelukast,MK）对其表达的影响。方法：将SD大鼠随机分为3组：哮喘组、MK组和正常对照组。用卵白蛋白制备大鼠哮喘模型。应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验测定血浆中IL-4和γ-干扰素（IFN-γ）浓度;用MiniMACS磁珠分选系统分离骨髓CD34^＋细胞;采用SYBRGREEN I荧光实时定量PCR法测定CD34^＋细胞中IL-4mRNA的相对表达量。采用免疫组化技术测定CD34＋细胞中IL-4蛋白的表达量。结果：哮喘组骨髓CD34＋细胞中IL-4mR．NA和IL-4蛋白的表达量高于其它各组（p〈0．01）;哮喘组除了IFN-1水平低外,IL-4浓度和嗜酸性粒细胞（EOS）绝对值都是三组中最高的（P〈0．01）;除哮喘组外,其余组的各项指标相近（P〉0．05）。IL-4mRNA表达量与IL-4浓度、Eos绝对值呈正相关（P〈0．01）,与IFN-γ浓度呈负相关（P〈0．01）。结论：哮喘大鼠骨髓CD34^＋细胞中IL-4 mKNA的表达增强;孟鲁司特可以下调IL-4mRNA的表达。可能成为其抑制哮喘气道炎症形成的重要机制之一。 相似文献
3.
目的：克隆人Lumican基因及构建Lumican基因真核表达载体并研究其对人子宫内膜癌细胞HEC-1A增殖的影响。方法：取人新鲜正常子宫内膜组织,提取总RNA,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增Lumican基因,将该基因定向克隆到真核表达载体pEGFP-N1中,构建真核细胞表达载体pEGFP-N1-Lumican,用限制性内切酶酶切分析,DNA序列分析鉴定重组质粒;将测序正确的Lumican基因通过脂质体介导下转染人子宫内膜癌细胞HEC-1A;逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western Blot 检测转染细胞HEC-1A的Lumican mRNA和蛋白表达。采用MTT法观察转染Lumican基因的人子宫内膜癌细胞HEC-1A的增殖能力。结果：重组质粒pEGFP-N1-Lumican经HindⅢ和BamHⅠ酶切,获得8311 bp片段和865 bp插入片段,序列分析表明插入的片段与Gene Bank发布的序列一致;荧光显微镜下可见转染的HEC-1A细胞有绿色荧光蛋白的表达;转染细胞HEC-1A的Lumican mRNA表达上调,Lumican蛋白相对上调率为74．62％（P＜0．05）。与对照组细胞比较,转染Lumican 基因的人子宫内膜癌细胞HEC-1A的抑制率为21．35％±2．78％。结论：成功构建了真核表达载体pEGFP-N1-Lumican,该载体在体外能有效抑制人子宫内膜癌细胞HEC-1A的增殖能力,为以Lumican基因为靶点研究其对人子宫内膜癌细胞HEC-1A的恶性生物学特性提供实验基础。 相似文献
4.
目的：探讨Skp2蛋白表达与上皮性卵巢癌发生、发展及预后评价的意义。方法：采用免疫组化法检测15例卵巢上皮性良性肿瘤、10例卵巢上皮性交界性肿瘤及58例上皮性卵巢癌中Skp2蛋白的表达情况。结果：Skp2在卵巢上皮性良性及交界性肿瘤中的表达均为阴性，而在上皮性卵巢癌中高表达，阳性率为48．28％（28／58），Skp2在中低分化组、Ⅲ／Ⅳ期组及有淋巴结转移组分别高于高分化组（P〈0．01）、Ⅰ／Ⅱ期组（P〈0．01）及无淋巴结转移组（P〈0．01）。在不同年龄及组织类型的卵巢癌中表达无显著性差异。结论：Skp2在上皮性卵巢癌中表达，表达水平越高提示预后越差。 相似文献
5.
PTEN和HIF-1α在卵巢浆液性肿瘤中的表达及其相关性的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
目的：检测卵巢浆液性肿瘤中PTEN和HIF-1α表达及其与临床病理参数的关系．方法：应用SP免疫组织化学法分别检测17例卵巢浆液性腺瘤和19例卵巢交界性浆液性腺瘤、37例卵巢浆液性腺癌组织中PTEN和HIF-1α表达状况,并分析其与卵巢浆液性腺癌主要临床病理参数之间的关系．结果：PTEN蛋白在卵巢浆液性腺瘤表达较高,在卵巢交界性浆液性腺瘤组织中表达下降,而在卵巢浆液性腺癌中表达量最低,与前两组比较有统计学意义（P〈0．05）,而HIF-1α在各组的表达趋势与PTEN相反．卵巢浆液性腺癌组与前两组比较有统计学意义（P〈0．05）．卵巢浆液性腺癌组织中HIP-1α的表达与组织分化程度、临床病理分期、淋巴结转移及肿瘤体积明显相关;随着肿瘤分级、分期的增加PTEN的表达显著降低（P〈0．05）．两者表达之间呈负相关（P〈0．05）．结论：PTEN表达缺失而HIF-1α表达明显增强,与卵巢浆液性腺癌临床病理特征有密切关系。可以推测PTEN表达的缺失诱导了HIF-1α的表达,二者在卵巢浆液性腺癌的肿瘤形成和预后判断中呈负相关． 相似文献
6.
7.
从海洋无脊椎动物体内分离出的绿色荧光蛋白（GFP）,因其特有的生物化学性质及该基因在异源细胞内的表达产物也能产生强烈的绿色荧光,使其在生物技术领域的应用具有广阔的前景。 相似文献
8.
《实验技术与管理》2015,(12):66-68
目的:构建稳定表达miR-17-5p的PC12细胞株。方法:将质粒PEGFP-N1-vector空载体和PEGFPN1-miR-17-5p表达载体扩增、抽提,利用脂质体转染技术将质粒转染PC12细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白GFP表达,Real-time PCR检测转染PC12细胞miR-17-5p的表达。结果:荧光显微镜观察到空载组和miR-17-5p组细胞都有绿色荧光蛋白高表达,Real-time PCR检测稳定转染miR 17-5p后PC12细胞内miR-17-5p的表达较空载组明显升高(P0.01)。结论:miR-17-5p在PC12细胞稳定表达,为进一步研究miR-17-5p对神经细胞的调制作用提供有用的细胞模型。 相似文献
9.
50Hz正弦磁场对细胞超氧产率及细胞增殖的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
中国仓鼠肺成纤维细胞（CHL）和人脐静脉内皮细胞（HUVEC）受磁场辐照后,采用荧光光度法检测细胞的超氧产率和采用噻唑蓝比色分析法检测细胞的增殖情况。50Hz、0．4mT正弦磁场辐照30min引起CHL细胞和HUVEC细胞的超氧产率分别较对照组增加12％和19％：该磁场辐照24h导致CHL细胞和HUVEC细胞的数目分别较对照组上调9％和10％。提示50Hz、0.4mT正弦磁场促进CHL细胞和HUVEC细胞的增殖,可能与超氧自由基产率的上调有关。 相似文献
10.
目的：探讨细胞周期蛋白Skp2表达与膀胱移形细胞癌生物学行为的关系。方法：对73例膀胱移形细胞癌进行组织学分级及分期，另取22例正常膀胱组织作为对照。采用免疫组织化学方法S-P法检测各例组织中Skp2蛋白表达水平。并分析其表达水平与临床病理特征的关系。结果：Skp2蛋白阳性表达率为50．7％（37／73），Skp2蛋白表达与肿瘤组织学分级、病理分期显著相关。结论：Skp2是评估膀胱移形细胞癌恶性程度,估计预后有价值的指标。 相似文献
11.
12.
增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA),也称周期蛋白或DNA聚合酶的辅助蛋白,是真核细胞合成所必需的核蛋白,在DNA复制中起重要作用。前期实验发现日本七鳃鳗肝脏cDNA文库的表达序列标签(Expressed Sequence Tag,EST)中存在与高等脊椎动物pcna基因同源的序列。提取日本七鳃鳗(Lampetra japonica)肝脏组织RNA,通过RT-PCR方法扩增七鳃鳗pcna基因,对其进行生物信息学分析,并将Lj-pcna基因成功构建到pGFP-N2真核表达载体上,重组质粒PGFP-N2-Lj-pcna转染人Hela细胞,荧光显微镜下观察有荧光蛋白的表达。日本七鳃鳗pcna基因的真核表达载体成功构建和转染,为探讨七鳃鳗pcna基因功能研究及其它七鳃鳗相关研究提供条件。 相似文献
13.
Fu Y Wang SQ Liu YP Wang GP Wang JT Gong SS 《Journal of Zhejiang University. Science. B》2008,9(4):299-305
Objective: To evaluate the transduction efficiency of a recombinant adenovirus carrying the gene for green fluorescent protein (Ad-GFP) into the primary cultures of fetal neural stem cells (NSCs) by the expression of GFP. Methods: The Ad-GFP was constructed by homologous recombination in bacteria with the AdEasy system; NSCs were isolated from rat fetal hippocampus and cultured as neurosphere suspensions. After infection with the recombinant Ad-GFP, NSCs were examined with a fluorescent microscopy and a flow cytometry for their expression of GFP. Results: After the viral infection, flow cytometry analysis revealed that the percentage of GFP-positive cells was as high as 97.05%. The infected NSCs sustained the GFP expression for above 4 weeks. After differentiated into astrocytes or neurons, they continued to express GFP efficiently. Conclusion: We have successfully constructed a viral vector Ad-GFP that can efficiently infect the primary NSCs. The reporter gene was showed fully and sustained expression in the infected cells as well as their differentiated progenies. 相似文献
14.
Transfection and expression of exogenous gene in laying hens oviduct in vitro and in vivo 总被引：2，自引：0，他引：2
Gao B Sun HC Song CY Wang ZY Chen Q Song HQ 《Journal of Zhejiang University. Science. B》2005,6(2):137-141
To examine whether or not the regulatory sequence of chicken ovalbumin gene can drive transgene expression specifically in hen oviduct, the authors constructed an oviduct-specific expression vector (pOV), containing 3.0 kilobases (kb) of the 5'-flanking sequence and 3.0 kb of the 3'-flanking sequence of the chicken 相似文献
15.
Polyethylenimine-cyclodextrin-tegafur (PEI-CyD-tegafur) conjugate was synthesized as a novel multifunctional prodrug of tegafur
for co-delivery of chemotherapeutic agent tegafur and enhanced green fluorescent protein (EGFP) reporter plasmid DNA. Conjugation
of tegafur to PEI-CyD via chemical linkage was characterized by 1H NMR spectrometry and ultraviolet (UV) spectrometry. PEI-CyD-tegafur was able to condense plasmid DNA into complexes of around
150 nm with positive charge at the N/P ratio of 25, in accordance with electron microscopy observation of compact and monodisperse
nanoparticles. The results of in vitro experiments showed enhanced cytotoxicity and considerable transfection efficiency in
B16F10 cell line. Therefore, PEI-CyD-tegafur may have great potential as a co-delivery system with anti-cancer activity and
potential for gene delivery. 相似文献
16.
在人体内,CCR5与许多免疫疾病有关,CCR5有望成为众多药物的作用靶点。将ccr5基因与真核表达载体pBBS242构建成重组质粒pBBS242-ccr5,转染CHO细胞,并经潮霉素B筛选。流式细胞仪检测结果表明CCR5在CHO细胞得到了稳定表达。 相似文献
17.
目的研究PKCα结构与转位的关系.方法用PCR的方法构建了4个PKCα突变体,在DNA连接酶的作用下与pEGFP-N1结合后转移至质粒中,构建PKCα突变体-EGFP真核表达载体.观察它们在C2C12细胞中的表达及转位情况.结果pPKCα-EGFP-N1转染C2C12肌细胞24h后,细胞内表达的PKCα-GFP融合蛋白主要定位于细胞浆,细胞核中未见分布.pPKCα-βI-EGFP-N1、pPKCβI-α-EGFP转染C2C12细胞24h的表达产物集中在胞浆.pPKCα(-)-EGFP-N1、pPKCα(m)-EGFP-N1转染C2C12细胞24h的定位与野生型明显不同.结论PKCα的调节区(C1V1C2)尤其是RACK结合区(C2)、PKCα的催化区(C3V4C4)尤其是ATP结合位点与PKCα的转位密切相关. 相似文献
18.
为了制备用于在斑马鱼中热休克全身表达目的基因的转基因载体,通过分子克隆的方法从P{hsFLP}86E/TM6B转基因果蝇的基因组中克隆出FLP.并同时对HSP-Wnt5A-EGFP载体进行改造,Wnt5A由FLP代替,并在FLP和EGFP编码区之间插入带有多克隆位点的IRES序列,获得pTol2-HSP-FLP-IRES-EGFP转基因表达载体.利用得到的转基因载体显微注射到斑马鱼单细胞期胚胎中进行表达分析,结果表明,经热激外源目的基因FLP和报告基因EGFP均能在斑马鱼中表达.pTol2-HSP-FLP-IRES-EGFP转基因表达载体的成功构建对于建立FLP/FRT重组系统的斑马鱼转基因实验模型具有重要意义. 相似文献
19.
Xing-wei Xiang Rui Yang Lin Chen Xiao-long Hu Shao-fang Yu Cui-ping Cao Xiao-feng Wu 《Journal of Zhejiang University. Science. B》2012,13(2):111-117
In the late phase of Bombyx mori nucleopolyhedrovirus (BmNPV) infection, a large amount of polyhedra appear in the infected cell nucleolus, these polyhedra
being dense protein crystals protecting the incorporated virions from the harsh environment. To investigate whether the foreign
protein could be immobilized into the polyhedra of BmNPV, two recombinant baculoviruses were generated by a novel BmNPV polyhedrin-plus
(polh+) Bac-to-Bac system, designated as vBmBac(polh+)-enhanced green fluorescent protein (EGFP) and vBmBac(polh+)-LacZ, which can express the polyhedrin and foreign protein simultaneously. Light microscopy analysis showed that all viruses
produced polyhedra of normal appearance. Green fluorescence can be apparently detected on the surface of the vBmBac(polh+)-EGFP polyhedra, but not the BmNPV polyhedra. Fluorescence analysis and anti-desiccation testing confirmed that EGFP was
embedded in the polyhedra. As expected, the vBmBac(polh+)-LacZ polyhedra contained an amount of LacZ and had a higher β-galactosidase activity. Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide
gel electrophoresis (SDS-PAGE) and Western blotting were also performed to verify if the foreign proteins were immobilized
into polyhedra. This study provides a new inspiration for efficient preservation of useful proteins and development of new
pesticides with toxic proteins. 相似文献
20.
绿色荧光蛋白及其在分子生物学上的应用 总被引：3，自引：0，他引：3
许多海洋无脊椎动物体内都含有绿色荧光蛋白,这种蛋白质结构很特殊,在受到蓝光或紫外线刺激时可以发射绿色荧光,并不需要任何协同因子、底物,适合用作普遍的报告标记,尤其适合于活体细胞或组织。而且它发出的荧光稳定,检测简单,结果真实可靠。并且GFP对光漂白、氧化剂、还原荆以及其他许多化学试剂具有极强的稳定性．易于构建载体。它独特的性质引起了生物学界的广泛关注。本文简要地概述了绿色荧光蛋白及其在分子生物学上的应用,包括蛋白融合,细胞筛选,定位标记,基因表达调控,计算细胞生长速度等。 相似文献