共查询到10条相似文献，搜索用时 15 毫秒
1.
De-qing HUANG Rui CHEN Ya-qin WANG Jian HONG Xue-ping ZHOU Jian-xiang WU 《Journal of Zhejiang University. Science. B》2019,(4):343-354
目的:制备一种检测水稻植物和传毒介体灰飞虱中水稻条纹病毒(RSV)的胶体金免疫层析试纸条,为水稻条纹叶枯病的田间调查和检测以及预测预警提供快速、实用的检测试剂。创新点:利用制备的RSV单克隆抗体,首次制备了能在5～10 min内快速、准确、灵敏、特异地检测水稻植物和灰飞虱体内RSV的胶体金免疫层析试纸条。方法:以差速离心方法提纯的RSV病毒粒子作为免疫原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术获得了高度特异和灵敏的RSV单克隆抗体。采用柠檬酸钠还原氯金酸的方法制备胶体金并标记一个RSV单克隆抗体,另一个RSV单克隆抗体和羊抗鼠抗体分别包被到硝酸纤维素膜的检测线和质控线,将吸水滤纸制成的样品垫、RSV免疫胶体金垫、结合有RSV单抗和羊抗鼠抗体的硝酸纤维素膜和吸水纸依次粘贴到聚氯乙烯(PVC)胶板上研制检测水稻植物和传毒介体灰飞虱中RSV的胶体金免疫层析试纸条。对田间样品进行RSV检测,分析试纸条检测RSV的有效性。结论:利用杂交瘤技术获得了2株RSV单克隆抗体(16E6和11C1),胶体金标记16E6单克隆抗体包被在聚酯膜制成的结合垫上,以11C1单克隆抗体和羊抗鼠抗体分别包被到硝酸纤维素膜的检测线和质控线,制成能在5～10 min内快速、特异、灵敏、准确地检测田间水稻及单头灰飞虱样品中RSV的胶体金免疫层析试纸条。试纸条检测感染RSV的水稻植株和灰飞虱呈阳性反应,而检测健康水稻和感染其它5种常见水稻病毒的植株及其传毒介体呈阴性反应,且试纸条检测RSV感染水稻植物组织的灵敏度达到1:20 480倍稀释(w/v, g/mL),检测携带RSV单头灰飞虱的灵敏度达到1:2560倍稀释(单头灰飞虱/μL)。田间样品检测结果发现,试纸条检测结果与反转录聚合酶链反应(RT-PCR)的检测结果一致,表明制备的试纸条可有效地用于田间RSV的检测,从而为水稻条纹叶枯病的诊断、监测预警、抗病育种、流行病学研究及科学防治提供技术和物质支撑。 相似文献
2.
目的:优化建立二联胶体金免疫层析试纸条,实现对玉米、面粉和饲料中赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的同时快速定量检测。创新点:采用纳米金颗粒标记真菌毒素单克隆抗体,基于竞争反应模式,通过对金颗粒尺寸、免疫层析相关组成材料及缓冲液配方的系列优化,同时借助手持式信号读取装备,实现对谷物和饲料中赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的同时定量检测。该方法简单、快速且成本低,与液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)一致性良好,便于基层单位的推广使用。方法:采用柠檬酸钠还原法制备纳米金颗粒并标记获得金标抗体。通过在基于竞争反应的免疫层析检测体系中,同时设置两条检测线(T1、T2)以实现两种毒素的同时检测,最终采用金标信号读数仪实现定量检测。结论:制备的二联定量胶体金试纸条对赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的检测限分别为0.32和0.58 ng/ml(图5),在玉米、小麦和饲料样本中的加标回收率为77.3%～106.3%,且变异系数均小于15%(表2)。制备的二联定量胶体金免疫层析试纸条和LC-MS/MS对玉米、小麦和饲料等天然样本中赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的定量检测结果相关性较好(表3和图7),具有较好的应用价值。 相似文献
3.
高中《生物》中“叶绿体中色素的提取和分离”的实验，操作步骤繁琐、难度大，按照教材的操作方法，有几步学生不易掌握操作要点。比如，用毛细吸管划滤液细线，操作时，既难出液，又难划线；滤液细线干燥时，自然风干很耗时，如果滤液细线未干就重划，导致滤液细线越划越粗，不符合又细又齐的要求，滤液细线未彻底干燥就去层析，色素带上升缓慢，分层效果也不太好；层析时，滤纸条斜靠烧杯内壁，要保证层析液不没及滤液细线，这一点学生很难把握，且不便于学生观察色素带分层现象，也影响层析效果。针对以上难点，我们在此实验的教学中，对… 相似文献
4.
为了建立一种适合基层现场的鸡白痢沙门氏菌(Salmonella pullorum)抗体检测方法,以S.pullorum的基因组为模板,利用PCR方法扩增inv A基因并进行原核表达后,用Ni-NTA纯化inv A融合蛋白,Western-blot和ELISA进行分析;采用30 nm的胶体金溶液标记山羊抗鸡Ig Y,并对金标抗体的质量浓度和p H值进行优化;在NC膜上分别包被inv A融合蛋白和鸡Ig Y作为检测线和质控线,评估其特异性、灵敏性和稳定性.用该方法对临床的195份血清进行检测,平板凝集试验验证其准确性.结果表明:构建的inv A重组蛋白质粒在大肠杆菌BL21中成功高效表达,获得的蛋白纯度较高,经Western-blot和ELISA方法证实具有良好的反应原性.该试纸条最佳胶体金标记的p H值为7.6,抗体质量浓度为1.3 mg/m L,方法的灵敏性与平板凝集试验的灵敏性一致,与其他病原菌无交叉反应.对195份临床样本进行检测,其结果与平板凝集试验的符合率为96.43%.研究建立的S.pullorum胶体金免疫层析检测试纸条具有方便、快捷、安全和灵敏度高等优势,可用于S.pullorum抗体的早期检测和流行病学筛查. 相似文献
5.
6.
胶体金免疫层析法检测猪PRVgE抗体方法的建立及应用 总被引：1，自引：0，他引：1
利用PCR技术从猪伪狂犬病毒基因组中克隆gE抗原表位基因,并将其插入到载体pET-22b（＋）中,构建成原核表达质粒pET-22b（＋）-gE,使其在E．coli BL21（DE3）中以IVFG诱导表达,经斑点杂交证实表达产物具有抗原性．表达产物纯化后作为抗原,结合胶体金标记技术,运用双抗原夹心法于国内首先建立了猪PRVgE抗体检测的免疫层析试纸条．该方法操作简单灵敏度高、特异性好,适合猪伪狂犬的临床诊断． 相似文献
7.
食品安全目前已经成为我国主要的社会热点问题之一,迫切需要准确和快速的食品内毒性成分的检测技术.检测试纸具有价格低廉、操作简便、灵敏快速等特点,适用于现场和基层化验室对食品内毒性成分的快速检测.本论文简介和评述了近些年国内报道的食品内毒性成分快速检测试纸的研究和应用进展. 相似文献
8.
9.
10.
在使用CMOS图像传感器获得金免疫层析试条的图像的基础上,使用多副图像平均法和PDE去除试条图像的噪声,再用Snake分割和Hough变换提取金免疫层析试条的检测窗口,然后使用积分扫描法较精确地提取金免疫层析试条的检测线,输出检测线内的总灰度值。实验结果表明,该方法比较理想地实现了金免疫层析试条的定量检测。 相似文献