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从斜纹夜蛾核多角体病毒（Spodoptera litura multicapsid nucleopolyhedrovirus,SpltMNPV）日本株（C3）基因组中克隆了ie0基因。核苷酸序列分析表明,该克隆片断涵盖了864 bp的读码框及5′端启动子区475 bp和3′端终止区90 bp的序列。氨基酸序列分析显示,在SpltMNPV IE0蛋白N-端23～47位以及111～126位富含酸性氨基酸和疏水性氨基酸残基,C′端第225～271位具有典型的CX2CX14CCX4CX2CX15CX2C双锌指基序,该结构在所比较的9个昆虫杆状病毒IE0蛋白中是十分保守的。联配分析表明,SpltMNPV日本株（C3）的核苷酸序列和氨基酸序列与其他9种核多角体病毒的同源性有较大差异。以ie0基因为基础绘制的杆状病毒分子进化树将家蚕核多角体病毒（Bombyx mori Nu-cleopolyhedrovirus,BmNPV）与苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒（Autographa californica multicapcid nucle-opolyhedrovirus,AcMNPV）归到同一分枝,这与以p10、gp37和egt基因为基础绘制的杆状病毒分子进化树结果一致。并进行了大肠杆菌表达和Western Blotting分析。 相似文献
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根据鸡白细胞介素18（IL-18）cDNA基因序列设计了1对特异性引物，应用RT-PCR技术，从脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）刺激的我国地方品种萧山鸡原代鸡脾细胞中扩增并克隆鸡IL-18全长基因（Genbank accession，AY628648）。扩增片段全长591bp，共编码197个氨基酸的前体蛋白，其中含有表达完整功能蛋白所必需的起始密码子和终止密码子。该序列与国外报道的鸡IL-18全长基因核苷酸序列及推导的氨基酸序列的同源性为98．99％。只在引导序列中出现两个氨基酸残基的缺失，分子进化分析表明萧山鸡IL-18基因与火鸡以及家鸭基因形成一个独立的分支。将萧山鸡IL-18成熟蛋白序列插入pGEX-4T-2载体并在Ecoli中得到表达，获得45kD的GST-IL-18融合蛋白。经纯化后用于制备多克隆抗体。本研究对萧山鸡白细胞介素18的全长基因进行了克隆及表达，并对其分子进化进行了分析。为深入研究其功能奠定了基础。 相似文献
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大豆花叶病毒杭州分离物基因组全序列测定及其结构分析 总被引：7，自引：0，他引：7
测定了大豆花叶病毒杭州分离物（SMV－HZ）的基因组全序列。该病毒基因组全长9588个核苷酸，3‘末端具poly(A)尾，包含单一开读框，编码一个350.07kD的多聚蛋白。基因组全序列与美国SMV G2、G7、N株系及我国黄淮5号株系（Y5）的核苷酸同一性分别为93％、93％、94％和96％。多聚蛋白酶解后产生马铃薯Y病毒属典型的10成熟蛋白。SMV－YZ与G2、G7、N的不同成熟蛋白间的氨基酸同一性为89％－100％；SMV－HZ与Y5的不同成熟蛋白间氨基酸同一性则较高，达97％－100％。多重分析显示了SMV－HZ与G2、G7、N、Y5之间的序旬差异，G2、G7的P1蛋白氨基酸序列明显不同于其他株系，对SMV－HZ与我国其他株系。对SMV－HZ与我国其他分离物也进行了序列比较，对CP蛋白氨基酸序列的系统进化树分析表明SMV－HZ与BJ分离物的亲缘性最高。 相似文献
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为研究家蚕质型多角体病毒(BmCPV1)的遗传与变异、探讨S8片段的功能,通过RT-PCR克隆BmCPV1苏州株(BmCPV1-SZ)S8的cDNA,并对其核苷酸序列(GenBank登录号:GQ150539)和编码的氨基酸序列进行生物信息学分析.结果显示:S8由1328 bp构成,具有一个编码390个氨基酸残基的开放阅读框;在BmCPV1-SZ S8的编码氨基酸序列与BmCPV1-I和BmCPV1-H的一致性达93%,但与其他非CPV1型的相似程度较低;在推导的蛋白的氨基酸序列中间区域;具有E-丰富和P-丰富的区,域,其局部区域的氨基酸序列与某些蛋白的功能(细胞周期控制、蛋白降解和RNA降解)区域的序列具有一定的相似性;结构域家族分析显示,BmCPV1-SZ S8编码蛋白属GcrA家族,具有与DNA结合的HTH结构域.Blocks分析显示,S8编码蛋白同时具有DNA聚合酶家族、RNA聚合酶2的结构功能域;高级结构分类显示,S8编码蛋白具有与TIM桶酶、肽酶、核苷三磷酸水解酶相似的同源结构.推测该蛋白具有转录调控因子和多功能酶的功能.基于S8编码的氨基酸序列的进化分析显示,相同类型的CPV聚为一类,同一宿主不同类型的CPV相距较远,推测CPV主要根据其类型聚类,而宿主昆虫对聚类的影响相对较小. 相似文献
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Zn/Cd超富集植物天蓝遏蓝菜(Thlaspi caerulescens)中TcCaM2基因的克隆及在酵母中的重金属耐受性分析 总被引：1，自引：0，他引：1
从重金属超富集植物天蓝遏蓝菜(T. caerulescens)Cd胁迫的cDNA文库中，通过基因表达的差异筛选得到的阳性克隆之一，核苷酸序列分析表明与拟南芥CaM2的相似性高达92%，故命名为TcCaM2(T. caerulescens CaM2, GenBank No. EF053035)。其核苷酸序列与迄今已知的钙调蛋白基因同源率在83%以上，其氨基酸序列同源性高达95%以上，与大多数高等植物的CaM，如印度芥菜、拟南芥、水稻等同源性则更高。将TcCaM2基因置于酵母表达启动子之下，构建酵母表达载体，并将其转入重金属敏感型酵母突变菌株，酵母重金属耐受实验表明，TcCaM2在酵母中的过量表达提高了酵母对Co2+或Ni2+的耐受性，增加了对Cd2+的敏感性，对Zn2+胁迫抗性稍有增加但差异不显著；说明TcCaM2通过其对重金属离子的结合作用及在信号转导系统中的功能，在植物细胞对重金属的富集、耐性中发挥了重要的调节作用。 相似文献
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利用同源克隆的方法,从商陆中克隆得到扩展蛋白基因的全长cDNA序列,命名为PaEXP1(GenBank 登录号为GQ851947).PaEXP1长1128bp,含有759bp的完整开放阅读框,编码252个氨基酸,分子量27.1kD,等电点8.55.PaEXP1氨基酸序列N端含有8个半胱氨酸残基,1个组氨酸(His-Phe-Asp,HFD)域,C末端存在4个保守的色氨酸残基,具有扩展蛋白的典型结构.系统进化树分析表明,PaEXP1属于扩展蛋白的α-扩展蛋白家族.Real time-PCR结果表明,PaEXP1主要在根中表达,低温、盐、重金属和渗透胁迫均强烈地抑制其基因的表达.酵母转化实验表明,转PaEXP1可以提高酵母的平均直径,说明PaEXP1参与细胞壁的松弛扩展和细胞的增大过程. 相似文献
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三种百合线状病毒的外壳蛋白抗血清制备 总被引：1，自引：0，他引：1
设计3对表达引物分别扩增侵染了百合无症病毒（lily symptomless virus，LSV）．百合斑驳病毒（lily mottle virus，LMoV）和百合X病毒（lily virus X，LVX）的外壳蛋白基因，并在大肠杆菌BL21（DE3）plysS中原核表达。目的蛋白切胶后免疫小鼠制备多克隆抗体。Western blot检测表明3种病毒抗血清分别与目的蛋白起特异性反应．但与阴性对照无反应。3种病毒间无交叉血清学反应。对田间栽种的百合样品间接ELISA检测表明．LMoV和LSV均有发生，但没有检测到LVX。 相似文献
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Three different sets of primers were designed using FASTA homology search and PRIMERSELECT for the specific detection ofNeisseria gonorrhoeae using polymerase chain reaction (PCR). These primers amplified the highly conserved regions of genes for Open Reading Frame
(ORF), Outer Membrane Protein (OMP) and 23S rRNA sequences ofN. gonorrhoeae. Each of the PCR primer set was evaluated using the DNA samples isolated from eight different positive isolates ofN. gonorrhoeae cultured from urethral swabs of patients visiting Maulana Azad Medical College and Safdarjung Hospital. Amplification products
were analyzed on agarose gel electrophoresis. Two sets of PCR primers, designated as Ngu1/Ngu2 and Ngu5/Ngu6, specific for
ORF and OMP gene respectively, amplified four regions of the gene which may help to differentiate the various strains ofN. gonorrhoeae infecting indigenous population. In contrast, a single, specific PCR product of 650 bp was visualized on agarose gel with
primers Ngu3/Ngu4, amplifying the 23S rRNA gene. Under optimum conditions, as low as 25ng of DNA isolated from eight different
clinical strains ofN. gonorrhoeae could be detected by PCR using Ngu3/Ngu4 set of primers. Our results suggested that Ngu3/Ngu4 could serve as good primers
for the specific, reproducible and sensitive diagnosis ofNeisseria gonorrhoeae from clinical samples. 相似文献
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从浙江宁波雪菜上获得病毒分离物NBXC,病毒提纯后,电镜下可观察到大量长约740 nm的线形粒子。间接ELISA检测结果证实NBXC是芜菁花叶病毒(turnip mosaic virus,TuMV)的分离物。利用IC-RT-PCR对病毒分离物NBXC的CP和HC-Pro基因进行PCR扩增,分别得到约0.8 kb和1.4 kb的两条条带,与预期的TuMV CP和HC-Pro基因大小吻合。扩增产物克隆后进行序列测定,CP基因序列长度为864个核苷酸,编码288个氨基酸;HC-Pro基因序列长度为1374个核苷酸,编码458个氨基酸。NBXC的CP和HC-Pro基因与已报道的TuMV其他分离物的核苷酸序列同源率分别为90.0%～98.3%和82.2%～96.9%,氨基酸同源率分别为95.8%～99.3%和95.6%～99.3%。从CP和HC-Pro基因核苷酸序列同源性来看,NBXC与TuMV芸薹属分离物有更近的亲缘关系,而与萝卜属分离物亲缘关系较远。 相似文献
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对Beesia calthifolia等5种金莲花亚科植物的核糖体DNA中的内转录间隔区(ITS)序列及5．8S
rRNA基因的3′端序列进行了测定。这几种金莲花亚科植物的ITS-1的长度范围为225～232 bp,ITS-2
的长度范围为201～217 bp。B．calthifolia的ITS-1(227 bp)和ITS-2(215 bp)的长度及序列均与升麻
属及类叶升麻属植物相近,其5.8S rRNA基因的3′端序列也近乎与升麻属及类叶升麻属植物完全一致
(仅一个碱基缺失的差异),但其在上述几方面均与金莲花属植物相差甚远。以Ranunculus enysii作为
外类群,运用PAUP软件进行的系统发育分析表明:B．calthifolia,Cimicifuga acerina,C．brachycarpa
和Actaea asiatica形成一个单系群,并得到bootstrap分析的极强支持,B．calthifolia位于这一单系群的
基部。这一DNA序列分析结果与来自植物化学、孢粉学和细胞学的研究结果相吻合,更进一步支持铁破锣属是升麻族的自然成员,并可能是升麻族中一个最原始的类群。 相似文献
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Identification and characterization of polyubiquitin gene from cDNA library of aspergillus fumigatus
Jata Shankar Taruna Madan Seemi Farhat Basir P. Usha Sarma 《Indian journal of clinical biochemistry : IJCB》2005,20(1):208-212
Aspergillus fumigatus (Afu) causes allergic and invasive forms of diseases in humans. In order to identify genes relevant
for pathogenesis, a total of 235 cDNA clones were randomly selected and sequenced from cDNA library of Afu. One of the partially
sequenced cDNA clones was homologous to polyubiquitin. Sequencing of the complete cDNA clone showed an open reading frame
of 912 bases. Comparison with genomic sequence of Afu using BlastN program, revealed that polyubiquitin gene comprises of
992 bases and contains one intron of 80 bases. The recombinant expression of fusion protein showed an approximately molecular
weight of 43-kDa on SDS-PAGE. The translation product of the cDNA sequence showed four tandem repeats of 76 amino acid residues
in a single polyubiquitin protein and showed 100% identity with polyubiquitin protein sequences of S. cerevisiae, N. crassa,
C. albicans, S. pombe, and M. grisae. Polyubiquitin gene is known to play important role in a variety of cellular processes
and recently have been implicated in fungal pathogenesis. Identification of polyubiquitin gene of Afu has opened up scope
to study its role in understanding Aspergillus biology and pathogenesis. 相似文献
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BackgroundMaize is one of the most important crops worldwide and has been a target of nuclear-based transformation biotechnology to improve it and satisfy the food demand of the ever-growing global population. However, the maize plastid transformation has not been accomplished due to the recalcitrant condition of the crop.ResultsIn this study, we constructed two different vectors with homologous recombination sequences from maize (Zea mays var. LPC13) and grass (Bouteloua gracilis var. ex Steud) (pZmcpGFP and pBgcpGFP, respectively). Both vectors were designed to integrate into rrn23S/rrn16S from an inverted repeat region in the chloroplast genome. Moreover, the vector had the mgfp5 gene driven by Prrn, a leader sequence of the atpB gene and a terminator sequence from the rbcL gene. Also, constructs have an hph gene as a selection marker gene driven by Prrn, a leader sequence from rbcL gene and a terminator sequence from the rbcL gene. Explants of maize, tobacco and Escherichia coli cells were transformed with both vectors to evaluate the transitory expression–an exhibition of green and red fluorescent light under epifluorescence microscopy. These results showed that both vectors were expressed; the reporter gene in all three organisms confirmed the capacity of the vectors to express genes in the cell compartments.ConclusionsThis paper is the first report of transient expression of GFP in maize embryos and offers new information for genetically improving recalcitrant crops; it also opens new possibilities for the improvement in maize chloroplast transformation with these vectors.How to cite: Arévalo-Gallegos S, Varela-Rodríguez H, Lugo-Aguilar H, et al. Transient expression of a green fluorescent protein in tobacco and maize chloroplast. Electron J Biotechnol 2020;44. https://doi.org/10.1016/j.ejbt.2020.01.008 相似文献
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溶藻弧菌铁调蛋白基因的克隆、表达及其特征分析 总被引：1，自引：0，他引：1
铁为一切有机体所必需。对铁摄取与利用的调控在细菌生长和铁毒性中起重要作用。在革兰氏阴性细菌中,铁摄取调节蛋白(Fur)主管铁的代谢。溶藻弧菌是人和海洋动物共感染的一种主要病原弧菌。本研究克隆表达了溶藻弧菌的fur基因,并分析了其相关特征。该基因序列全长994 bp,其中包含450 bp的开放读码框,编码150个氨基酸残基的蛋白,推导的相对分子量为16.78 kD.在编码序列的上下游,RBS序列-、10序列-、35序列和二个潜在的转录终止子分别得到确定,但没有发现存在于大肠杆菌fur基因中的"铁盒子"。氨基酸序列的中段从G46位至D104位,为高度保守区域,其中包括含组氨酸丰富铁结合模型(H3-D-H-L-V-C-L-D-C-G)。SDS-PAGE分析表明,fur基因可在大肠杆菌中大量表达,带His-Tag的重组融和蛋白经镍亲和层析得到纯化,Western-blot分析结果显示,Fur蛋白具有免疫反应性。为进一步研究Fur蛋白的结构与功能打下基础。 相似文献