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Cd极易被水稻等作物吸收并伴随食物链在人体内累积,严重威胁人类健康.基于水稻Cd累积机制的现有研究,克隆与水稻Cd累积相关的基因Os LCD和Os HMA3,并克隆一个维管组织特异性表达的启动子Os MTP11P,利用Gateway技术及传统酶切、连接方法,成功构建适用于水稻等单子叶植物农杆菌转化的RNA干扰载体pRI-M-LCD和根特异性表达载体p CB2022-H.期望通过这2个载体共转化水稻,使大量的Cd扣留在根细胞的液泡中,限制Cd向地上部分及籽粒中的转运,从而实现Cd在水稻籽粒中的低累积. 相似文献
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莱茵衣藻素有"光合酵母"之称,是目前少数三套基因组均能进行遗传转化的生物.但由于莱茵衣藻细胞中存在复杂的表达调控体系、密码子偏爱等原因,莱茵衣藻的外源基因表达体系目前还处于探索阶段.通过构建两个莱茵衣藻外源基因表达载体,即以RBCS2序列为启动子的p105和以HSP70A RBCS2序列为启动子的pH105,分别将增强型绿色荧光蛋白基因(egfp)插入两个表达载体中,得到p105G124和pH105G124转化载体.然后通过"珠磨法"转化细胞壁缺陷的莱茵衣藻cc-849,并得到两种类别的转基因藻Tran-Ⅰ和Tran-Ⅱ.在光诱导和热激诱导条件下,两种类型的转基因藻均能稳定表达绿色荧光蛋白.通过实验比较二者的转化效率和蛋白表达水平,结果显示pH105可使egfp基因的转化效率提高8倍;HSP70A-RBCS2启动子至少使绿色荧光蛋白的表达水平提高了2倍,40℃热激后绿色荧光蛋白的表达量再提高约3倍.以上结果表明获得的pH105是一个高效、可诱导的莱茵衣藻外源基因表达载体,这为利用莱茵衣藻高效表达外源基因和开发生物反应器奠定基础. 相似文献
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家蚕丝胶蛋白基因1(ser-1)启动子的克隆及其活性分析 总被引：1，自引：0，他引：1
家蚕ser-1基因是中部丝腺中特异表达组织特异性基因。为研究家蚕ser-1基因在时空上的调控机制,用PCR的方法克隆了家蚕ser-1基因启动子并进行序列分析,进一步构建了由ser-1基因启动子驱动报告基因DsRed的新型表达质粒pSK-ser-DsRed-PolyA,并通过蚕体和家蚕BmN细胞进行了瞬时表达。结果显示,家蚕ser-1基因启动子的TATA框的保守序列为TATAAAA,位于-24～-30处,CAAT框位于-112～-115处;ser-1基因启动子可以驱动红色荧光基因DsRed在家蚕幼虫的中部丝腺组织和培养的BmN细胞中瞬时表达。 相似文献
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萤火虫荧光素酶基因cDNA真核表达载体pGL2可在原核细胞中高效表达。该载体中含有SV40早期启动子及荧光素酶基因cDNA5'端总长共758bp的DNA碱基序列，经计算机分析发现，在SV40早期启动子中含有SV40基因组HindⅢB片断中一段长为49bp的DNA序列，且荧光素酶基因cDNA编码区的5'端含有一个原核细胞基因表达调控区相似序列。将pGL2中的荧光素酶基因cDNA（Luc）克隆入真核表达载体pED中，构建成pED-Luc。该载体经表达测定后，只在真核细胞中表达，在原核细胞不中表达。这说明荧光素酶基因cDNA编码区的5'端的原核细胞基因表达调控区相似序列不具表达有活性的荧光 素酶的功能。经DNA序列对比研究，认为pGL2含有的SV40基因组Hind ⅢB片段5123bp-5171bp长49bp的DNA序列可能就是Hind ⅢB片段的原核增强子功能的决定序列。 相似文献
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莱茵衣藻素有“光合酵母”之称，是目前少数三套基因组均能进行遗传转化的生物。但由于莱茵衣藻细胞中存在复杂的表达调控体系、密码子偏爱等原因，莱茵衣藻的外源基因表达体系目前还处于探索阶段。通过构建两个莱茵衣藻外源基因表达载体，即以RBCS2序列为启动子的p105和以HSP70A-RBCS2序列为启动子的pHl05，分别将增强型绿色荧光蛋白基因（egfp）插入两个表达载体中，得到p105G124和pH105G124转化载体。然后通过“珠磨法”转化细胞壁缺陷的莱茵衣藻CC-849，并得到两种类别的转基因藻TranⅠ和TranⅡ。在光诱导和热激诱导条件下，两种类型的转基因藻均能稳定表达绿色荧光蛋白。通过实验比较二者的转化效率和蛋白表达水平，结果显示pH105可使eg和基因的转化效率提高8倍；HSP70A-RBCS2启动子至少使绿色荧光蛋白的表达水平提高了2倍，40℃热激后绿色荧光蛋白的表达量再提高约3倍。以上结果表明获得的pH105是一个高效、可诱导的菜茵衣藻外源基因表达载体，这为利用莱茵衣藻高效表达外源基因和开发生物反应器奠定基础。 相似文献
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利用高保真PCR酶从克隆载体pMD18T-GmPHD2中扩增出大豆PHD类转录因子GmPHD2,并于基因上下游分别引入XbaI和XhoI酶切位点;然后通过TA克隆、载体双酶切、连接、转化等技术手段,将其连入植物表达载体pBA002,构建了含GmPHD2和抗除草剂筛选标记Bar基因的植物表达载体pBA002-GmPHD2。重组质粒经PCR检测、双酶切及测序验证,表明GmPHD2基因已被完整、正确的插入到pBA002载体中,之后通过冻融法将重组质粒pBA002-GmPHD2成功导入农杆菌EHA105,利用此农杆菌不仅可以介导转化大豆,而且可以转化非同源的其他作物,为进一步开展植物抗逆性的基因工程研究提供了新基因资源。 相似文献
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目的克隆小鼠内皮抑素(Endostatin)编码区cDNA序列及测序鉴定并构建pEgr-IFN(Y)-Endostatin双基因表达载体.方法从小鼠肝细胞提取总RNA,经逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增获得全长Endostatin基因,测序并利用基因重组技术构建pEgr-IFN(Y)-Endostatin双基因共表达质粒.结果分光光度计测定50倍稀释的总RNA抽提产物,A260=0.834,A280=0.407,A260A280=2.049,总RNA浓度为1.668g/L.EndostatincDNA的RT-PCR产物与载体pMD18T连接并经测序证实Endostatin序列与文献报道完全一致,并构建了含Egr-1启动子的IFNY和Endostain双基因共表达质粒pEgY-IFN(Y)-Endostatin.结论成功克隆小鼠Endostatin基因,构建了pEgr-IFN(Y)-Endostatin双基因共表达质粒. 相似文献
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以案例分析的方式,对“安徽基因事件”中引发争议的关于科学家的责任、国际合作中本国基因资源流失以及媒体是否应对科学进行调查等问题,进行了剖析与思考。指出:在大科学时代,科学家应肩负起对科学和社会的双重责任;严格审查、加强监管是防止基因资源大量流失的重要手段;对科学进行调查,不仅是媒体更应是科学组织内部的责任。 相似文献
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从浙江宁波雪菜上获得病毒分离物NBXC,病毒提纯后,电镜下可观察到大量长约740 nm的线形粒子。间接ELISA检测结果证实NBXC是芜菁花叶病毒(turnip mosaic virus,TuMV)的分离物。利用IC-RT-PCR对病毒分离物NBXC的CP和HC-Pro基因进行PCR扩增,分别得到约0.8 kb和1.4 kb的两条条带,与预期的TuMV CP和HC-Pro基因大小吻合。扩增产物克隆后进行序列测定,CP基因序列长度为864个核苷酸,编码288个氨基酸;HC-Pro基因序列长度为1374个核苷酸,编码458个氨基酸。NBXC的CP和HC-Pro基因与已报道的TuMV其他分离物的核苷酸序列同源率分别为90.0%～98.3%和82.2%～96.9%,氨基酸同源率分别为95.8%～99.3%和95.6%～99.3%。从CP和HC-Pro基因核苷酸序列同源性来看,NBXC与TuMV芸薹属分离物有更近的亲缘关系,而与萝卜属分离物亲缘关系较远。 相似文献
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泛酸是生物体内重要的代谢中间体,广泛存在于微生物和植物中。文章论述了泛酸合成途径关键酶(羟甲基转移酶、泛酸合成酶、天门冬氨酸-α-脱羧酶、酮泛解酸还原酶)及其基因的特性,并探讨其在泛酸工业生产、相关物质的检测、新型抗生素和除草剂研发等方面的应用。 相似文献
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利用离体转录载体ｐＳＰ１８、ｐＧＥＭ－３Ｚ和萤火虫荧光素酶基因（Ｌｕｃ）及其缺失片段构建了一组融合质粒。以这些质粒为模板，通过离体转录产生荧光素酶基因的ｍＲＮＡ，反义ＲＮＡ及大小和结构不同的反义ＲＮＡ缺失片段，再通过显微注射分别将其引入爪赡卵母细胞的细胞质。注射后的卵母细胞经一定时间培育，然后检测其翻译产物一荧光素酶的相对活性。结果表明，荧光素酶基因的表达受反义ＲＮＡ及其缺失片段的严重阻抑，表达抑制和反义ＲＮＡ之间存在明显的剂量效应。而且，基因表达的抑制程度主要的和反义ＲＮＡ片段的结构有关。 相似文献
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[目的/意义]随着信息的爆炸性增长,科研人员摄取信息的途径越来越多,但对知识的控制能力越来越弱。因此,不论信息如何变化,科研人员需要抓住知识基因的进化过程(科技创新路径)寻找有价值知识,极大提高知识利用效率。[方法/过程]在前期充分辨析科技文献知识基因的基础上,根据科技文献知识基因的特征将科技文献知识基因分为通用知识基因与特定知识基因两种类型。提出利用知识基因表征科技创新路径的节点,根据知识流动的特点,将科技创新路径划分为基于知识基因扩散与知识基因流动的科技创新路径。通过计算知识基因之间遗传或变异的关系,嫁接引用路径构建出知识基因表达的科技创新路径,并通过知识基因间的连线实现可视化表达。[结果/结论]通过阿尔茨海默病领域实验证明,基于知识基因表达的科技创新路径能够从科技文献核心知识价值传承与发展的角度直观地展示出科技创新发展与演化过程。 相似文献
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罗迪江 《科学技术与辩证法》2014,(5):60-64
文章以CAS理论为视角对自私基因理论的核心思想进行元理论解读,其内容包括：（1）基因／模因演化是一个具有自私性、适应性、群体性与涌现性的复杂适应系统,具有CAS理论思想的特质,否认了极端还原论的观点;（2）竞争-选择机制与复制一进化机制构成自然界演化与发展的强大力量,也是基因／模因演化的驱动力。它既是对“创世论”的彻底否定,又是对系统论思想与达尔文进化论的继承与发展;既颠覆了极端还原论的无演化性观点,又否定了机械决定论的抽象永恒性。 相似文献