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选用青霉素类抗生素中的两种药物——青霉素G和氨苄青霉素,作为半抗原与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)通过不同的化学方法偶联合成了三种人工免疫抗原。三种抗原分别为BP-BSA(生理学法)、AP-BSA(生理学法)和AP-BSA(戊二醛法)。通过紫外、红外扫描和SDS-聚丙烯酰胺电泳法对三种合成抗原进行鉴定,发现半抗原与载体蛋白的偶联率为11∶1~12∶1。将合成的这三种抗原分别免疫9只新西兰大白兔,并用ELISA检验免疫后的兔子,发现其血清中分别产生了相应抗体,表明三种人工抗原合成成功。这为下一步获得针对青霉素类核特异性单克隆抗体制备及其相应食品安全检测试剂盒开发奠定了基础。 相似文献
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为了制备抗环丙沙星单克隆抗体，首先采用碳二亚胺法合成了环丙沙星与载体蛋白偶联的免疫抗原和包被抗原，免疫BALB／c小鼠，取效价最高的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2／0融合，HAT培养基筛选，有限稀释法克隆化，获得1株稳定分泌抗环丙沙星单克隆抗体的杂交瘤细胞株。检测结果显示，杂交瘤细胞染色体数目平均102条，培养上清的效价为1：1．28×10^3，单抗腹水效价达1：1．024×10^6，IC50为68．31ng／mL，属于IgM型，轻链kappa，CI—ELISA法显示单抗对环丙沙星有高度的选择性，提示获得的单抗可望用于环丙沙星残留物的免疫化学检测。 相似文献
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《科技风》2017,(12)
为了监测诺氟沙星抗生素的滥用,我们开发了一种基于单克隆抗体的酶联免疫方法。将小分子抗原诺氟沙星NOR通过碳二亚胺法与载体蛋白BSA、OVA进行偶联。得到完全抗原NOR-BSA和NOR-OVA。用NOR-BSA对3只雌性小鼠进行免疫后,利用细胞融合技术制备杂交瘤细胞,用间接ELISA法和间接竞争ELISA法筛选阳性细胞进行克隆,得到3株稳定分泌抗体的单克隆细胞株,分别命名为7C4,8G3,11G7。检测细胞的上清液和纯化后的腹水效价,分别为1:512,1:1024,1:1024和1:128000,1:128000,1:128000。对三株细胞的亚型鉴定为IgG2b,IgG2b,IgG1。建立的标准竞争曲线计算得IC50值为31.225 ng,其检测线性范围为5.011-630.95 ng/mL,最低检出量为2.75 ng。亲和力常数Kaff为4.6×10~8。诺氟沙星单克隆抗体与环丙沙星(27.22%)、恩诺沙星(11.29%)、奥比沙星(11.03%)、氧氟沙星(9.73%)、达氟沙星(7.38%)、沙拉沙星(2.57%)、二氟沙星(0.61%)几种抗菌药有较低的交叉反应率。 相似文献
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酶标技术—ELISA,1971年由Engvall和Perlmann等建立,经过十几年的研究改进,目前已形成这样几种方法:ELISA间接法(主要用于检测抗体)是将已知抗原吸附(包被)于固相载体,经孵育后,洗去抗原,然后加入含有特异性抗体的被检血清,洗去,再加入酶标记抗同种球蛋白的抗体 相似文献
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目的研究适合的蛋白纯化和病毒灭活工艺,制备静脉注射用人SARS特异性免疫球蛋白.方法采用低温乙醇和离子交换层析相结合的工艺进行分离纯化,在分离纯化过程中对血浆进行S/D病毒灭活,对原液进行纳米膜过滤去除病毒.对产品的SARS抗体效价、灭活剂残余含量进行检测,对血浆S/D病毒灭活工艺进行验证.结果产品的各项质量指标符合静脉注射要求,产品中SARS抗体效价经ELISA法检测为183,产品中灭活剂TNBP和Triton-X100的残余含量均＜5.0 ug/ml.病毒灭活方法经验证可以有效灭活指示病毒.结论本蛋白纯化工艺可操作性强、产品质量稳定,为从突发病毒性疾病患者康复期血浆中小规模提取特异性免疫球蛋白提供了一种适合的方法. 相似文献
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