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介绍了用于晶体衍射研究和NMR研究的蛋白质自动化生产的步骤,这些步骤包括建立克隆和表达载体,蛋白质的表达,蛋白质纯化,蛋白质质量控制和NMR或晶体衍射方法的选择. 相似文献
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以凡纳滨对虾为研究对象,通过RT-PCR技术扩增出铁蛋白（Ferritin）基因,经特定的酶切（Notl,Smal）后插入到表达质粒pGEX-4T-2上构建表达载体,重组质粒转化大肠杆菌．经菌落PCR和质粒双酶切鉴定确认,证实成功地构建了对虾铁蛋白基因的原核表达载体．再对重组菌用IPTG诱导表达,采用Glutathione Sepharose4B亲和层析得到目的蛋白用于制备抗体,为研究铁蛋白在对虾抗病毒免疫中的作用奠定基础． 相似文献
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以pErl30a为载体构建的表达拟南芥热激因子AtHsfAla的大肠杆菌EcoliM15（pET30a／His6一AtHsfAla）为实验材料,以IPTG诱导6XHis融合蛋白的表达并经过Ni2＋柱分离纯化AtHsfAla,再通过SDS—PAGE鉴定表达蛋白和纯化蛋白．结果显示,AtHsfAla蛋白在在PET原核表达系统中能够有效表达,并能通过亲和层析获得纯化的AtHsfAla蛋白．研究结果为揭示拟南芥热激因子AtHsfAla的作用机理奠定基础． 相似文献
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通过PCR技术扩增出人铁蛋白基因,经酶切后与表达载体质粒pGEX-4T-2连接,重组质粒转化感受态大肠杆菌,利用菌落PCR、质粒双酶切、测序,证实成功地构建了人铁蛋白基因表达载体,利用IPTG对重组菌进行诱导表达,通过尿素洗涤纯化目的蛋白用于制备抗体． 相似文献
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从假单胞菌（Pseudomonassp．）XZG36中克隆弹性蛋白酶基因,构建原核表达载体,实现其在大肠杆菌（Escherichiacoli）中的高效表达,并对表达产物进行酶学性质分析,为微生物发酵生产弹性蛋白酶奠定基础．以假单胞菌基因组DNA为模板,PCR扩增弹性蛋白酶基因,并将其开放阅读框（0RF）克隆至融合表达载体pET30a（＋）进一步IPTG诱导表达;表达产物经His·Bind亲和层析纯化后对弹性蛋白酶进行酶学性质分析．实验成功克隆了弹性蛋白酶基因,DNA基因片段为1672bp、编码497个氨基酸残基的多肽,与预计长度相符合;实现了其在E．coli中的高效表达,表达量约占菌体总蛋白的20％;经SDS-PAGE分析,相对分子质量为48000,与预期的一致;提纯后的表达蛋白SDS-PAGE分析可见单一条带,纯度可达92％以上．表达蛋白具有良好活性． 相似文献
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采用PCR方法克隆获得拟穴青蟹抗菌肽scygonadin基因成熟肽片段,将其连接到Pichia pastoris酵母表达载体pPIC9K中,构建了分泌表达载体pPICgk-Scy．电击转化毕赤酵母GS115,经表型筛选和PCR鉴定证实了目的基因已稳定整合人酵母基因组中．以甲醇诱导表达阳性克隆,上清中表达产物经过Tricine-SDS-PAGE鉴定与预期的目的蛋白大小（约10ku）相符．并利用琼脂孔穴扩散法证明了表达产物能抑制革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的生长． 相似文献
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巴斯德毕赤酵母表达系统是应用较为成功的外源蛋白表达系统之一,它具有真核生物表达系统的特点,能够对目的蛋白进行类似高等真核生物的信号肽剪切、二硫键形成、糖基化等过程的翻译后蛋白加工,至今已有多种外源蛋白在该表达系统中成功表达.本文综述了毕赤酵母表达系统的一些特点和优势、毕赤酵母表达载体组成和外源蛋白在毕赤酵母中表达的过程. 相似文献
9.
抑癌基因PTEN载体构建及在LOVO细胞中的表达 总被引：1，自引：0，他引：1
目的:构建抑癌基因PTEN的表达载体并在LOVO细胞中表达。方法:从人外周血中提取总RNA,通过RT-PCR扩增出PTEN基因片段,将PTEN基因连入pLenti6/V5载体。测序鉴定后,经脂质体转染入LOVO细胞,对细胞株进行RT-PCR和Western blot检测。结果:DNA测序证实pLenti6/V5-PTEN表达载体为阳性克隆;该表达载体转染LOVO细胞后上调了PTEN mRNA和蛋白的表达。结论:成功构建了pLen-ti6/V5-PTEN表达载体,为进一步研究PTEN在LOVO细胞中的功能奠定了基础。 相似文献
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真核生物表达系统研究进展 总被引：4，自引：0，他引：4
郑光宇 《喀什师范学院学报》2004,25(6):33-36
从毕赤酵母表达宿主菌，表达载体，外源蛋白在毕赤酵母中的表达，毕赤酵母表达系统的优化和丝状真菌的转化，CBH表达系统及rDNA整合序列等方面综述了近年来关于毕赤酵母和丝状真菌表达系统的研究进展． 相似文献