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1.
目的:探讨散发性乳腺癌癌变过程14-3-3σ基因启动子异常甲基化状况及其与转录表达的关系。方法:用甲基化特异PCR方法对散发性乳腺癌病人癌组织及正常组织进行14-3-3σ异常甲基化检测;用免疫组织化学测定14-3-3σ蛋白表达。结果:68例散发性乳腺癌组织中,14-3-3σ基因启动子异常甲基化率为90%(61/68),部分不典型增生病例检出异常甲基化18%(2/13),而正常组织未检出。14-3-3σ基因启动子异常甲基化与患者居住地、组织分型、分级和淋巴结转移相关(P<0.05)而与年龄无相关性(P>0.05),14-3-3σ基因甲基化与其蛋白表达下降呈良好的一致性(P<0.05)。单变量分析发现,淋巴结转移与预后明显相关(风险指数为:5.0,P=0.02)。14-3-3σ基因甲基化与否并不影响乳腺癌的五年生存率(P>0.05)。结论:14-3-3σ基因异常甲基化参与乳腺癌癌变过程,是其蛋白表达下降的重要原因之一,但不影响乳腺癌的生存率。 相似文献
2.
目的:分析我国脊肌萎缩症(SMA)患儿SMN2基因甲基化水平与其转录水平,并初步探讨该基因的甲基化修饰是否影响我国儿童型SMA疾病的严重程度。创新点:首次在中国儿童型SMA人群中分析SMN2基因甲基化状态,提示该基因的甲基化模式在不同人种间具有一定保守性,而甲基化单元的甲基化状态可能具有种族差异。本研究也初步提示SMN2基因甲基化水平除了可能影响该基因的转录,还可能影响基因的可变剪接。方法:应用MassA RRAY的方法检测35例SMA患儿(SMN1基因纯合缺失,SMN2基因3拷贝)外周血细胞中SMN2基因甲基化状态;应用实时聚合酶链反应(real-time PCR)的方法检测SMN2基因不同转录本的表达水平;分析SMN2基因甲基化与该基因的转录以及SMA疾病严重程度的关系。结论:位于甲基化岛1的两个甲基化单元(nt-871和nt-735)和位于甲基化岛4的nt+999甲基化单元的甲基化水平在III型患儿中显著低于II型和I型患儿;nt-871和nt-290/-288/-285甲基化单元的甲基化水平与SMN2基因全长转录本(SMN2-fl)的转录水平呈负相关。此外,nt+938甲基化单元的甲基化水平与SMN2基因全长转录本与跳跃外显子7转录本的比值(fl/?7)呈负相关,但与SMN2的转录水平无关。因此,我们初步得出SMN2基因甲基化可能通过调控其转录而影响我国儿童型SMA的疾病表型。 相似文献
3.
《集宁师专学报》2016,(5):1-4
该文就农杆菌介导的vbp基因遗传转化调控机理进行研究。方法一:分析vpb1基因启动子序列;方法二:对探测载体中vpb1基因启动子的转录活性进行验证;方法三:设计vbpl基因启动子序列突变位点。结果:(1)基于荧光蛋白表达情况来看,在pRSET-A质粒中的vbpl基因启动子能够将荧光基因的表达予以正常启动。(2)能够正确构建pRSET-m1突变质粒,vbp1基因启动子的转录活性会随着SigmaA结合位点的去除而降低。(3)能够正确构建p RSET-m2突变质粒,vbp1基因启动子的转录活性会随着转录因子Fnr结合位点中-65位碱基的突变而增强。(4)能够正确构建pRSET-m3突变质粒,vbp1基因启动子的转录活性会随着转录因子Fnr结合位点中-66位和-68位碱基的突变而消失。结论:深入研究农杆菌介导的vbp基因遗传转化调控机理,能够找出影响农杆菌的VBP蛋白表达的相关因素,有可能使所获得的农杆菌菌株具有较高的转化效率,以便能够有效提高植物转基因效率。 相似文献
4.
目的:以园蓝为研究材料,鉴定园蓝花青素提取物(GBBAEs)中的功能性成分的结构,建立脂多糖(LPS)诱导的体外炎症模型,并评价其抗炎作用和初步机制。创新点:首次探究了蓝莓花青素对建立的LPS诱导体外炎症模型的营养干预作用,并初步探究了发挥抗炎机制的作用通路。方法:将RAW 264.7细胞分为对照组(不作处理)和实验组(1μg/ml LPS刺激建模)。实验组进一步分为3个不同浓度组:400μg/ml GBBAEs组、800μg/ml GBBAEs组和1200μg/ml GBBAEs组。用酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测一氧化氮(NO)、前列腺素E2(PGE2)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、干扰素γ(INF-γ)等炎症因子的释放量;用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)分析IL-1β、IL-6、TNF-α、环氧合酶-2(COX-2)及单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的炎症相关基因m RNA的表达水平;用蛋白质印迹法(Western blot法)测定相关炎症蛋白COX-2和NF-κBp65表达水平。结论:试验结果表明,通过ELISA法测定GBBAEs可以显著性抑制NO、PGE2、IL-1β、IL-6、INF-γ等炎症因子的释放;RT-PCR分析阐明在LPS诱导的单核-巨噬细胞RAW 264.7中,GBBAEs可以显著性抑制IL-1β、IL-6、TNF-α、COX-2及MCP-1的炎症相关基因m RNA的表达水平。此外,Western blot法进一步显示GBBAEs对相关炎症蛋白COX-2和NF-κBp65表达具有明显抑制作用,进一步证实GBBAEs通过NF-κB机制通路来发挥抗炎作用。 相似文献
5.
以CAT基因为报道基因,探讨了杆状病毒后期启动子在大肠杆菌中启动表达CAT基因的活性。结果显示在不含多角体基因及其启动子的质粒中,具合成启动子的表达量最高,野生型多角体启动子的表达量次之,而含ⅩⅣ多角体启动子的最低;具相同CAT基因启动子的质粒中,含多角体蛋白基因及其野生型启动子者较不含者强,含合成与ⅩⅣ启动子串联组合者与单纯ⅩⅣ启动子者表达量近乎一致,但均较前者为弱。以上结果表明,杆状病毒后期启动子在大肠杆菌与在昆虫细胞中的启动表达的能力并非完全一致。 相似文献
6.
利用脂多糖(LPS)刺激小鼠小胶质细胞BV2,研究泽泻醇对炎症相关分子的抑制及机制.Griess法测定一氧化氮(NO)浓度,RT-PCR和Western blot法检测细胞外调节蛋白激酶(ERK)、p38、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、蛋白激酶B(Akt)、基质金属蛋白酶3(MMP3)的变化.研究结果表明,泽泻醇不仅对LPS刺激小胶质细胞产生的NO有明显抑制作用,还能在mRNA与蛋白质水平抑制MMP3的表达,这种抑制与其对PI3K/Akt通路的干预相关.阐述了泽泻醇对小胶质细胞的抑制与PI3K/Akt通路的相关机制. 相似文献
7.
Ying SONG Zhuo-chao WU Wei DING Yun BEI Zhi-yun LIN 《Journal of Zhejiang University. Science. B》2018,(6)
目的:探讨线粒体内核转录因子(NF-κB)的表达与脂多糖(LPS)诱导损伤后神经细胞的凋亡之间的关系。创新点:(1)LPS诱导后,线粒体中NF-κB的增加导致细胞凋亡;(2)腺嘌呤核苷酸转位酶1(ANT1)活性决定线粒体中NF-κB的水平。方法:通过MTT和Hoechst 33342染色来测定药物对PC12细胞的作用;用电子显微镜和罗丹明123(rhodamine 123)检测线粒体的形态和功能;通过酶联免疫吸附测定(ELISA)测量ANT1、脂质过氧化物和抗过氧化物酶的活性;反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测NF-κB的相对表达水平。结论:(1)在LPS诱导的神经元细胞损伤后的细胞凋亡期间,NF-κB通过摄取ANT1在线粒体中被激活;(2)神经生长因子(NGF)不仅降低NF-κB活性,还降低ANT1活性,进而使得线粒体中NF-κB的表达水平下降,并抑制线粒体介导的细胞凋亡。 相似文献
8.
目的:研究CBR1基因启动子在猪子宫内膜细胞的表达调控机制。创新点:发现CBR1基因启动子在猪子宫内膜受到炎性因子核转录因子kappa B(NF-κB)成员p65调控。p65对该启动子具有正向调节作用,但是对于CBR1基因的表达并不是必需的。方法:通过双荧光素酶报告基因载体确定CBR1基因启动子转录活性区,通过染色质免疫沉淀(Ch IP)技术确定p65能够结合CBR1基因启动子,通过超表达和干扰表达实验证实p65对CBR1基因启动子的调控作用。结论:猪CBR1基因启动子-1640/-647区对于其转录活性是必需的,在-1545/-1531区存在p65的结合位点。p65在猪子宫内膜细胞中促进了CBR1基因mRNA的表达,但是干扰p65则不会造成CBR1基因mRNA表达量下降,推断p65不是CBR1基因表达的必需因素。 相似文献
9.
目的:建立并优化适用于龟裂链霉菌(Streptomyces rimosus)M527的属间接合转移体系,并在此基础上分析四个启动子的表达活性。创新点:有效的遗传转化系统和合适的启动子是链霉菌基因表达和基因工程的必要前提。由于链霉菌的遗传背景复杂,接合转移实验参数对菌种具有高度特异性。因此,本研究建立并优化了一套适用于S. rimosus M527的属间接合转移体系,并在此基础上分析比较了四个启动子的表达活性。这将为进一步遗传修饰S. rimosus M527奠定基础。方法:以S. rimosus M527为研究对象,通过对接合转移体系中的一些重要的实验参数(如接合转移培养基、供受体比例、热激温度和混合培养时长等)进行了优化。在此基础上,构建以gus A为报告基因的质粒,通过直观显色反应以及GUS酶活的定量检测,分析比较了四个启动子的表达活性。结论:建立了一种有效的适用于S. rimosus M527接合转移体系,优化后的接合效率最高达3.05×10-5。分析测试的四个启动子中,合成启动子SPL-21表现出最高表达活性,比常用强组成型启动子perm E*活性高出2.2倍,合成启动子SPL-57与perm E*的活性无显著差异,内源启动子potr B的活性比permE*降低了50%。 相似文献
10.
目的:研究淫羊藿多糖对卵泡细胞凋亡的作用及机理。方法:对4周龄健康雌性小鼠连续灌服不同剂量淫羊藿多糖7 d,并采集各组小鼠卵巢卵泡细胞,检测卵泡细胞凋亡情况,RT-PCR检测凋亡相关基因Bcl-2/Bax表达水平;同时完整分离心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏,称重并计算各组内脏指数。结果:8、6 mg组和生理盐水对照组的卵泡细胞总凋亡率分别为10.89%、8.75%和11.74%;RT-PCR技术测定Bcl-2和Bax凋亡相关基因的表达发现,抑制凋亡基因Bcl-2 mRNA的表达显著升高。结论:淫羊藿多糖可有效抑制小鼠卵巢卵泡细胞凋亡,这一作用主要与调节细胞凋亡的Bcl-2/Bax基因表达有关。 相似文献
11.
Transfection and expression of exogenous gene in laying hens oviduct in vitro and in vivo 总被引：2，自引：0，他引：2
Gao B Sun HC Song CY Wang ZY Chen Q Song HQ 《Journal of Zhejiang University. Science. B》2005,6(2):137-141
To examine whether or not the regulatory sequence of chicken ovalbumin gene can drive transgene expression specifically in hen oviduct, the authors constructed an oviduct-specific expression vector (pOV), containing 3.0 kilobases (kb) of the 5'-flanking sequence and 3.0 kb of the 3'-flanking sequence of the chicken 相似文献
12.
目的白细胞介素15（interleukin-15,IL-15）与炎症反应的关系。方法在含兔IL-15全长编码cDNA的质粒上缺失了部份片段．构建成竞争性RT—PCR的竞争子（competitor）。研究炎症反应后IL-15基因的转录情况。结果竞争性RT-PCR结果显示,IL-15与炎症反应密切相关,且脂多糖（LPS）增加了兔子内脏器官（心脏,肺,肾脏,脾脏和肝脏）中IL-15mRNA的表达。结论LPS可以增强IL-15的免疫反应。 相似文献
13.
Zhao JH Zhang JS Wang Y Wang RG Wu C Fan LJ Ren XL 《Journal of Zhejiang University. Science. B》2011,12(11):935-942
DNA methylation plays an important role in the epigenetic regulation of gene expression during plant growth, development,
and polyploidization. However, there is still no distinct evidence in tobacco regarding the distribution of the methylation
pattern and whether it contributes to qualitative characteristics. We studied the levels and patterns of methylation polymorphism
at CCGG sites in 48 accessions of allotetraploid flue-cured tobacco, Nicotiana tabacum, using a methylation-sensitive amplified polymorphism (MSAP) technique. The results showed that methylation existed at a
high level among tobacco accessions, among which 49.3% sites were methylated and 69.9% allelic sites were polymorphic. A cluster
analysis revealed distinct patterns of geography-specific groups. In addition, three polymorphic sites significantly related
to tobacco mosaic virus (TMV) resistance were explored. This suggests that tobacco breeders should pay more attention to epigenetic
traits. 相似文献
14.
根据GenBank发表的鸡γ-干扰素核苷酸序列,使用primer 5设计一对特异性引物,通过RT-PCR技术从ConA诱导培养的鸡脾脏淋巴细胞中克隆出鸡γ-干扰素基因并对其进行测序,测序结果表明,鸡γ-干扰素基因全长495bp,具有一个完整的开放阅读框,编码164个氨基酸,与国外发表的序列比较,两序列间同源性为100%.计算机软件对鸡γ-干扰素编码的氨基酸序列进行了抗原性分析,结果表明鸡γ-干扰素具有良好的免疫原性. 相似文献
15.
16.
Zhang Q Chen QH Fu ML Wang JL Zhang HB He GQ 《Journal of Zhejiang University. Science. B》2008,9(7):527-535
The bglS gene encoding endo-1,3-1,4-β-glucanase from Bacillus subtilis was cloned and sequenced in this study. The bglS expression cassette, including PGK1 promoter, bglS gene fused to the signal sequence of the yeast mating pheromone α-factor (MFals), and ADH1 terminator with G418-resistance as the selected marker, was constructed. Then one of the PEP4 allele of Saccharomyces cerevisiae WZ65 strain was replaced by bglS expression cassette using chromosomal integration of polymerase chain reaction (PCR)-mediated homologous recombination, and the bglS gene was expressed simultaneously. The recombinant strain S. cerevisiae (SC-βG) was preliminarily screened by the clearing hydrolysis zone formed after the barley β-glucan was hydrolyzed in the plate and no proteinase A (PrA) activity was measured in fermenting liquor. The results of PCR analysis ofgenome DNA showed that one of the PEP4 allele had been replaced and bglS gene had been inserted into the locus of PEP4 gene in recombinant strains. Different endo-1,3-1,4-β-glucanase assay methods showed that the recombinant strain SC-βG had high endo-1,3-1,4-β-glucanase expression level with the maximum of 69.3 U/(h-ml) after 60 h of incubation. Meanwhile, the Congo Red method was suitable for the determination of endo-1,3-1,4-β-glucanase activity during the actual brewing process. The current research implies that the constructed yeast strain could be utilized to improve the industrial brewing property of beer. 相似文献
17.
文章以清洁级纯系雄性SD大鼠为实验模型,应用组织病理学、RT—PCR技术,研究高脂饮食诱发动脉粥样硬化过程中血管内膜细胞大电导钙激活的钾通道（large conductance Ca—activated K＋ channels,BKCa）、中电导钙激活的钾通道（Intermediate condutance Ca—activated K＋ channels,IKCa）基因表达的动态改变情况,从基因表达水平探讨高脂饮食诱发动脉粥样硬化的作用机制。同时指出,IKCa可能为动脉粥样硬化的早期启动因子,此观点有助于动脉粥样硬化的早期检测与防治。 相似文献
18.
DNA甲基化是真核生物DNA的正常内源性修饰方式 ,它由DNA甲基化转移酶催化发生。但DNA甲基化异常在肿瘤发生中却起着极为重要的作用 ,它主要表现为抑癌基因高甲基化所致的基因失活和原癌基因低甲基化所致的基因激活 ,引起与细胞增殖、分化相关基因表达异常 ,造成细胞恶变形成肿瘤。文章总结了DNA甲基化异常对肿瘤相关基因表达的影响 ,在肿瘤发生中的可能机制及针对高甲基化的治疗方案 相似文献
19.
Sialic acid-binding immunoglobulin-like lectin (Siglec)-F is a mouse functional paralog of human Siglec-8 that induces apoptosis
in human eosinophils, and therefore may be useful as the basis of treatments for a variety of disorders associated with eosinophil
hyperactivity, such as asthma. The expression pattern and functions of this protein in various cell types remain to be elucidated.
The aim of this study was to determine the expression of Siglec-F on mouse macrophages by immunocytochemical staining, and
also to investigate the effects of Siglec-F engagement by a Siglec-F antibody on phagocytic activity of macrophages. The results
showed that Siglec-F expression was detected on mouse alveolar macrophages, but not on peritoneal macrophages. Furthermore,
Siglec-F engagement did not affect the phagocytic activity of alveolar macrophages in the resting state or in the activated
state following stimulation by the proinflammatory mediator tumor necrosis factor alpha (TNF-α) or lipopolysaccharide (LPS).
Siglec-F expression on alveolar macrophages may be a result of adaptation. Macrophages actively regulate immune responses
via production of cytokines. Therefore, further investigation of the effects of Siglec-F engagement on immune mediators or
cytokines released by alveolar macrophages is required. 相似文献