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1.
影响聚式酶链式反应实验效果的基本因素 总被引：1，自引：0，他引：1
研究聚式酶链式反应(PCR)实验中影响其扩增效果的多种因素,寻求反应体系中理想的各因素浓度配比。选取含5+10优质亚基的小麦品种为材料,以特异扩增1DX5基因PCR实验为例,从模板DNA、引物终浓度、Taq酶、二价镁离子、4dNTPs混合液、缓冲液浓度几方面入手,通过设计梯度实验,研究不同因素对PCR扩增效果的影响。结果表明,反应体系6个基本因素,缺少任何1个都扩增不出产物。在反应总体积25μL的PCR反应体系中,模板DNA选用32 ng/μL,Mg2+终浓度2 mmol/L,Taq酶1.2 U/25μL,引物0.8μmol/μL,4dNTPs0.3 mmol/L,缓冲液1×buffer最为合适,能扩增出理想的结果。 相似文献
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采用改进的CTAB法提取中国特有濒危裸子植物白豆杉(Pseudotaxus chienii)嫩叶总DNA,进行RAPD分析.分别研究了模板DNA、引物、dNTPs、Mg2 和TaqDNA聚合酶用量对RAPD PCR扩增反应结果的影响.筛选并建立了适合于白豆杉RAPD扩增的反应体系:总体积25μL,其中10×PCR缓冲液(500 mmol/L KCl,100 mmol/L Tris-HCl,1.0%Triton X-100,20 mmol/L MgCl2)2.0μL,引物(1.5μmol/L)0.5μL,dNTPs(10 mmol/L)0.4μL,模板1μL(35 ng),Taq酶0.8μL(0.5 U),水20.3 μL. 相似文献
3.
采用改进的CTAB法提取中国特有濒危裸子植物白豆杉(Pseudotaxus chienii)嫩叶总DNA,进行RAPD分析.分别研究了模板DNA、引物、dNTPs、Mg2 和TaqDNA聚合酶用量对RAPDPCR扩增反应结果的影响.筛选并建立了适合于白豆杉RAPD扩增的反应体系:总体积25μL,其中10×PCR缓冲液(500mmol/L KCl,100mmol/L Tris-HCl,1.0%Triton X-100,20mmol/L MgCl2)2.0μL,引物(1.5μmol/L)0.5μL,dNTPs(10mmol/L)0.4μL,模板1μL(35ng),Taq酶0.8μL(0.5U),水20.3μL. 相似文献
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席在星 《实验室研究与探索》2006,25(6):608-610,630
RAPD技术是一种新的分子标记技术,DNA质量是保证RAPD分析成功的关键。为获得高质量的木通属植物基因组DNA,本文采用SDS法、改良CTAB法、高盐低pH值法提取三叶木通总DNA。结果表明,高盐低pH值法不适用于木通属植物DNA的提取;改良CTAB法是合适的DNA提取方法,它们获得DNA模板纯度高、质量好,可直接用于RAPD分析。同时,对RAPD反应条件中的一些重要参数进行摸索和优化试验,建立适合木通属植物RAPD分析应用的体系,其组成为:反应液总体积为25μL,2.5μL 10×PCR缓冲液、0.16 mmol/L dNTPs2、.0 mmol/L Mg2 、0.64μmol/L引物、1 U/μL Taq酶4、0 ng/25μLDNA模板。PCR循环体系为:94℃,4 min-[-94℃,30 s-37℃,90 s-72℃,60 s-]-72℃,5 min,40个循环。 相似文献
5.
用SDS法提取了苜蓿基因组DNA的模板。从100个10bp的随机引物中筛选出了12条能在11个苜蓿品种中均能扩增出清晰的片段的引物。应用L16(45)正交表,研究了DNA、dNTPs、Mg2 、Taq酶和引物的浓度对扩增迁移率重现性的影响。用这种方法建立的苜蓿RAPD-PCR优化反应体系为:20μL体系中含DNA模板的浓度是5.0mg/L、dNTPs浓度是0.175mmol/L、Mg2 浓度是1.25mmol/L、Taq酶在20μL的体系中是1.00U、引物浓度是0.40μmol/L。 相似文献
6.
采用一种类似PCR的基因组自我引发PCR(GSP—PCR)法，初步研究了家蚕、野蚕、天蚕、蓖麻蚕和柞蚕的微卫星DNA的体外基因组自我引发PCR扩增的条件。结果发现。浓度为100ng/μl的基因组DNA在100℃变性15min后，与等量的同浓度的未变性的DNA混合作为模板。在80m扩增体系中[含0．2mM dNTPs、50mM KCl、10mM Tris—HCl(pH9．0)、4mM MgCl2、1．25U Tap plymerase]，加入1μl此混合模板，在92℃，1min→55℃，2min→72℃，2min，30→90次循环的扩增条件下，成功地得到了PCR产物。基因组DNA的适宜浓度为1．25ng/μl反应体系；GSP—PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后的部分片段经回收后，在同样条件下，30—60个循环可得到同样大小范围的产物。GSP—PCR产物经6％的变性测序胶电泳，得到典型的梯状带，表明为微卫星DNA。 相似文献
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胡桃楸ISSR-PCR反应体系的建立及优化 总被引：3，自引：0，他引：3
在研究胡桃楸遗传多样性的过程中,为了获得清晰、重复性好的ISSR扩增结果,采用改良的CTAB法提取胡桃楸基因组DNA,利用正交设计与单因子试验相结合的方法对影响胡桃楸ISSR-PCR反应体系的5个主要因素(Taq酶、Mg~(2+)、dNTP、引物、模板DNA)在4个水平上进行优化设计。通过综合比较分析,筛选出各反应因素的最佳水平,建立胡桃楸ISSR-PCR最佳反应体系:20μL的反应体系中,Taq酶1.0 U,Mg~(2+)2.0 mmol/L,dNTP 0.2 mmol/L,模板DNA 50～250 ng,引物0.4μmol/L。在此基础上筛选出13条多态性好、扩增稳定的ISSR引物,并确立了最佳退火温度和循环次数。这一优化系统的建立为今后利用ISSR技术进行胡桃楸遗传多样性、亲缘关系以及物种保护等的研究奠定了基础。 相似文献
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枇杷属植物RAPD反应体系的优化与应用 总被引：2，自引：0，他引：2
采用CTAB—蛋白酶K法提取了48份枇杷种质的DNA,以西班牙枇杷品种Ullera为模板DNA,对枇杷属植物RAPD反应体系进行优化研究,结果表明:25μL反应体系中,Taq DNA聚合酶、Mg2+、引物、模板DNA和dNTPs等5种主要成分的适宜浓度或用量分别是:Mg2+为2.0 mmol/L,Taq DNA聚合酶为1.0 U,引物为0.25"mol/L,dNTPs为0.100—0.125 mmol/L,模板DNA为25—30 ng。利用该优化体系对48份枇杷种质进行RAPD随机扩增,经琼脂糖电泳获得了清晰的扩增图谱。 相似文献
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采用改良的SDS法提取黄瓜种子基因组DNA,并以其为模板对影响RAPD扩增反应的主要因子采用单因素递进分析方法进行优化,建立了黄瓜种子基因组DNA最佳RAPD反应体系,即20 μl的反应体积中含有60ng模板,1.2U Taq DNA聚合酶,3.0 mmol/L MgCl2,0.20 mmol/L dNTP,1.40 μmol/L引物. 相似文献
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红松SRAP-PCR反应体系的建立及优化 总被引：1，自引：0，他引：1
相关序列扩增多态性(Sequence-Related Amplified Polymorphism,SRAP)是对ORFs(OpenReading Frames)进行扩增的一种新型的基于PCR的标记方法。以CTAB法提取的红松针叶DNA为模板,应用单因子试验及L16(45)正交试验系统分析了DNA模板浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度、Taq酶浓度等对SRAP-PCR扩增结果的影响。确定了PCR的最佳反应体系为:20μL体系中,1×PCRbuffer 2μL、DNA模板40~100 ng,Mg2+2.5mmol/L,dNTPs 0.15 mmol/L,引物0.15μmol/L,Taq酶1.5 U。PCR最优的扩增程序为:进行35个循环,前5个循环中94℃变性1 min,35℃复性1 min,延伸30 s;后30个循环中94℃变性1 min,50℃复性1 min,72℃延伸1 min;最后72℃延伸7 min,4℃保存。在此反应体系下,所扩增谱带清晰、稳定、多态性高,为进行红松不同种源间遗传分化以及构建遗传图谱等内容的研究奠定基础。 相似文献
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几种药用植物基因组DNA提取方法研究 总被引：3，自引：0，他引：3
采用改良2×CTAB法和改良SDS法提取富含多糖和次生代谢物质的几种药用植物不同器官基因组DNA,并用紫外分光光度计分析,凝胶电泳和PCR扩增进行鉴定。结果表明:改良2×CTAB法和改良SDS法均能有效去除不同药用植物材料中的蛋白质、多糖、酚类及其他次生代谢物质,获得较高质量基因组DNA。但与改良SDS法相比,改良2×CTAB法提取的基因组DNA质量更好。 相似文献
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玉米（ｚｍａｙｓ）鲜叶不经冻干处理直接用ＣＴＡＢ法提取ＤＮＡ，其分子量和纯度均较高，可用于限制切、基因文库构建及基因组分析等． 相似文献
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以学科前沿为引导,设计了“枳壳类中药材干燥果实DNA提取方法的优化”研究型实验。实验内容包括枳壳类干燥果实DNA的提取、DNA浓度及纯度测定、DNA电泳、PCR产物电泳、结果分析讨论。教学实践表明,该实验有助于学生深入理解干燥中药材DNA提取的全过程,有助于激发学生的自主创新热情,提高学生的科研能力和综合素质。 相似文献
14.
For investigating the possibility of applying degenerate oligonucleotide primer PCR (DOP-PCR) and comparative genomic hybridization
(CGH) technique to analyses of genomic genetics in a single cell, the whole genomic DNA of a single cell with XX, XY, XO,
XXY, +13 or +21 was amplified by DOP-PCR. Single cell DOP-PCR CGHs with conventional and modified control references, the
genomic DNA and a single cell DOP-PCR product from normal male, were carried out respectively. The results showed that the
average profile of the fluorescence intensity ratio in CGH with the genomic DNA as reference fluctuates much and that the
standard deviation in about 30% haploid is beyond the normal limits. False positive hyper-representation was found to exist
in X chromosome while trisomy 13 and 21 were not detected. However, the distributions of the mean and the standard deviation
of the ratio in the CGH with DOP-PCR product as reference were quite acceptable. The copy number changes of chromosome X,
Y, 13 and 21 were revealed. Those results suggested that there is unrandom unequal amplification in a single cell DOP-PCR.
Using a single DOP-PCR product as reference can decrease its influence on CGH. Single cell DOP-PCR-CGH and its application
in the genetic analyses of preimplantation embryo or fetal cell in maternal blood may be possible. 相似文献
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沙棘体内酚类物质和蛋白质含量较高,影响了基因组DNA提取的产量。采用改良CTAB法对观光木基因组DNA进行提取,经过紫外吸收、琼脂糖凝胶电泳、双酶切和AFLP标记检测,结果表明:改良CTAB法提取的基因组DNA吸光值OD260/OD280为1.7～1.9,DNA无降解现象和杂质污染;基因组DNA双酶切彻底,并且APLP扩增的条带较多而且清晰。从而建立了适合沙棘AFLP分子标记的反应体系,为利用AFLP标记对沙棘进行分子生物学研究及分子育种奠定了基础。 相似文献
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ＩＮＴＲＯＤＵＣＴＩＯＮＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎ ｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ (ＦＩＳＨ )ａｎｄｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ (ＰＣＲ)ｈａｄｂｅｅｎｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｕｓｅｄｆｏｒｐｒｅｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎｇｅｎｅｎｔｉｃｄｉ ａｇｎｏｓｉｓ (ＰＧＤ ) (Ｖｅｒｌｉｎｓｋｙｅｔａｌ.,1 997,Ｓａｂｔａｌｏｅｔａｌ.1 995)ａｌｔｈｏｕｇｈｔｈｅｙｎｏｒｍａｌｌｙｏｎｌｙｏｆｆｅｒｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｆｒｏｍｏｎｅｏｒｆｅｗｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｒｅ ｇｉｏｎｓｏｒｓｐ… 相似文献
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根据GenBank发布的基因序列,设计PCR引物,分别从诸葛菜(Orychophragmus violaceus)的花瓣基因组DNA和cDNA克隆到查尔酮合成酶基因,并定名为OvCHS,序列已上传至NCBI数据库,登陆号为EF408918。序列分析表明,OvCHS基因的基因组全长为1263 bp,具一个75 bp的内含子,编码区全长为1188 bp,编码395个氨基酸。与模式植物拟南芥(Arabidopsis thaliana)查尔酮合成酶基因AtCHS比较发现,两基因编码区有135个碱基不同,相似性为88.64%,氨基酸序列中仅16个氨基酸残基的差异,相似性达95.95%。 相似文献
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探究烤鸭储存过程中菌群的变化,为延长其贮存期奠定理论基础．用酚、氯仿、异戊醇法提取烤鸭肉中细菌的基因组DNA,PCR扩增16SRNAV3区,用DGGE电泳技术分析菌群结构的变化情况,然后用Bionumerics软件对DGGE分子指纹图谱进行烤鸭肉菌群结构相似性分析．PCR结果表明,成功扩增了细菌基因组DNA,为230bp;DGGE实验结果表明,DGGE分子指纹图谱上条带存在显著差异;用bionumberics软件分析,发现样本相似度不断变化,表明在储存过程中,烤鸭肉菌群结构发生了变化．该研究为延长烤鸭肉保质期提供理论参考依据． 相似文献
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肠道菌群结构多样性初筛研究 总被引：1，自引：0，他引：1
目的：探讨研究肠道菌群结构的初筛方法,为进行有效、高质量的高通量测序奠定基础.方法：用粪便采样器采集健康儿童粪便进行粪便标本预处理后,采用酚—氯仿方法提取样本菌群基因组DNA,并进行16S rDNAV3区片段PCR扩增,扩增产物用变性梯度凝胶电泳法（denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE）检测分析.结果：采用该方法成功地扩增出16S rDNA V3区230bp的片段,经DGGE的方法可以比较出不同儿童粪便样本菌群结构的不同.结论：基于16S rDNA V3区的PCR-DGGE技术能够应用于研究肠道微生物多样性,对于肠道微生物的研究起到了初筛的作用. 相似文献