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1.
目的:构建真核表达IL-18-GPI融合基因的表达载体,观察融合蛋白在哺乳动物细胞中的表达动力学及生物学活性,为进一步研究细胞因子作为免疫增强剂在临床肿瘤治疗中的应用奠定基础.方法:通过RT-PCR的方法从脂多糖刺激的外周血淋巴细胞中钓取IL-18基因,通过共用限制性酶切位点与GPI相连形成pcDNA-IL-18-GPI真核表达质粒.将质粒转染CHO细胞后建立稳定表达融合蛋白的细胞株用于融合蛋白的提取.对提取纯化的蛋白进行生物学特性、蛋白质转移分析和γ-IFN诱导实验.结果:获得714 bp的核酸序列并构建重组质粒pcDNA-IL-18-GPI.SDS-PAGE和West-blot显示在CHO细胞中表达的IL-18-GPI融合蛋白分子量约为27.5 kD,该蛋白具有明显的蛋白转移和诱生γ-IFN的作用.结论:IL-18-GPI融合蛋白是一种潜在的肿瘤疫苗增强剂,具有良好的应用前景. 相似文献
2.
目的:扩增弓形虫SAG2基因,构建pGEX-4T-1-SAG2重组质粒,在大肠杆菌中表达。方法:设计并合成引物,经PCR法扩增SAG2基因序列,与pMD18-T载体连接,构建pMD18-T-SAG2质粒,经酶切鉴定、测序,与pGEX-4T-1载体连接,构建pGEX-4T-1-SAG2质粒。将重组质粒转入大肠杆菌诱导表达,进行SDS-PAGE和Western-blot鉴定。结果:扩增出约561bp的SAG2基因序列,成功构建pGEX-4T-1-SAG2质粒,并在大肠杆菌中得到高效表达,融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的40%。SDS-PAGE电泳显示pGEX-4T-1-SAG2的融合蛋白的分子量约为45kd。Western-blot显示融合蛋白有良好的抗原性。结论表达质粒在大肠杆菌中得到高效表达,为进一步研究弓形虫病的诊断做好准备。 相似文献
3.
《科学中国人》2015,(26)
目的构建SLO原核表达质粒,重组蛋白的诱导表达并纯化。方法提取链霉菌溶血素O模板DNA,PCR法扩增slo基因。构建融合表达重组质粒p GEX-6p-1-slo和pet32a-tev-slo,将正确的重组质粒转化至大肠杆菌BL21和大肠杆菌BL21-DE3,使用异丙基硫代βD半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组融合蛋白。采用亲和层析纯化重组蛋白,切除标签后,再通过亲和层析纯化,获取SLO重组蛋白。结果 PCR扩增出slo基因,基因片段(1700 bp)与理论一致。经SDSPAGE,蛋白质印迹显示重组蛋白相对分子质量为55 k Da,与数据库中的相对分子质量结果相符。结论成功构建了slo原核表达质粒,表达并纯化了SLO重组蛋白。 相似文献
4.
《科学中国人》2015,(26)
目的:构建Visfatin原核表达质粒,诱导表达并纯化重组人内脂素(Visfatin)。方法:从人LO2细胞中提取总RNA后,经RT-PCR法得到人Visfatin的c DNA序列,用以构建带HIS标签的Visfatin重组质粒。然后将重组质粒转化到大肠杆菌BL21中,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,用Ni柱亲和层析纯化融合蛋白。结果:PCR扩增出的目的基因片段为1600 bp左右,与理论大小一致。SDS-PAGE、Western blot、质谱分析数据证明了蛋白是Visfatin融合蛋白。结论:成功的表达并纯化得到带HIS标签的Visfatin融合蛋白。 相似文献
5.
厌氧真菌能够产生高比活力的纤维素酶,但由于对厌氧环境的生产条件要求严格,生长速度缓慢,并不适合规模生产。本研究将厌氧真菌内切型-β-葡聚糖酶基因af1与大肠杆菌表达载体pET-28a(+)连接,得到重组质粒pET-28a(+)-af1。以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主,重组质粒转化后获得重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET-28a(+)-af1。采用SDS-PAGE蛋白电泳对重组大肠杆菌的表达产物进行分析,在40 kDa附近得到与目的基因af1表达蛋白理论值相当的明显条带。AF1酶蛋白的最适pH为6.0,最适温度为45°C。重组大肠杆菌的摇瓶产酶试验结果显示:诱导培养18 h时,内切型-β-葡聚糖酶(CMC酶)活力可达410 U/mL。该项研究工作为进一步构建内切型-β-葡聚糖酶高产菌株奠定了良好的基础。 相似文献
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使用X-treme GENE HP DNA和Ex Gen 500转染试剂分别转染经绿色荧光蛋白标记的重组质粒至人肝癌SMMC-7721细胞,培养48h后,通过计算发现随着转染试剂的增加,转染效率和细胞毒性都逐渐增加,X-treme GENE HP的转染效率高于Ex Gen500(P0.05);X-treme GENE HP的细胞毒性低于Ex Gen 500(P0.05);血清和抗生素对转染效率影响无显著性差异(P0.05)。X-treme GENE HP对SMMC-7721细胞有较高的转染效率和较小的细胞毒性,转染时使用正常培养基培养。 相似文献
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His-猪生长激素融合基因在大肠杆菌中的表达与纯化 总被引：1，自引：1，他引：1
将通过PCR技术改建并去除了信号肽的猪生长激素cDNA克隆入大肠杆菌表达载体pET-28a( ),构建出能利用Ni-NTAAgarose柱一步纯化表达产物的重组质粒pPGH020。探讨了大肠杆菌中重组猪生长激素的最佳表达条件和纯化方法,制备并纯化了兔抗pGH抗体。SDS鄄PAGE和Westernblot的分析结果表明,26.5kD处有包括His·Taq、thrombin位点序列和pGH序列的融合蛋白特异条带。凝胶扫描估测猪生长激素的表达量占大肠杆菌胞浆蛋白的17.3%左右。 相似文献
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莱茵衣藻素有"光合酵母"之称,是目前少数三套基因组均能进行遗传转化的生物.但由于莱茵衣藻细胞中存在复杂的表达调控体系、密码子偏爱等原因,莱茵衣藻的外源基因表达体系目前还处于探索阶段.通过构建两个莱茵衣藻外源基因表达载体,即以RBCS2序列为启动子的p105和以HSP70A RBCS2序列为启动子的pH105,分别将增强型绿色荧光蛋白基因(egfp)插入两个表达载体中,得到p105G124和pH105G124转化载体.然后通过"珠磨法"转化细胞壁缺陷的莱茵衣藻cc-849,并得到两种类别的转基因藻Tran-Ⅰ和Tran-Ⅱ.在光诱导和热激诱导条件下,两种类型的转基因藻均能稳定表达绿色荧光蛋白.通过实验比较二者的转化效率和蛋白表达水平,结果显示pH105可使egfp基因的转化效率提高8倍;HSP70A-RBCS2启动子至少使绿色荧光蛋白的表达水平提高了2倍,40℃热激后绿色荧光蛋白的表达量再提高约3倍.以上结果表明获得的pH105是一个高效、可诱导的莱茵衣藻外源基因表达载体,这为利用莱茵衣藻高效表达外源基因和开发生物反应器奠定基础. 相似文献
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利用离体转录载体ｐＳＰ１８、ｐＧＥＭ－３Ｚ和萤火虫荧光素酶基因（Ｌｕｃ）及其缺失片段构建了一组融合质粒。以这些质粒为模板，通过离体转录产生荧光素酶基因的ｍＲＮＡ，反义ＲＮＡ及大小和结构不同的反义ＲＮＡ缺失片段，再通过显微注射分别将其引入爪赡卵母细胞的细胞质。注射后的卵母细胞经一定时间培育，然后检测其翻译产物一荧光素酶的相对活性。结果表明，荧光素酶基因的表达受反义ＲＮＡ及其缺失片段的严重阻抑，表达抑制和反义ＲＮＡ之间存在明显的剂量效应。而且，基因表达的抑制程度主要的和反义ＲＮＡ片段的结构有关。 相似文献
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关于知识工作者与知识性工作的实证解析 总被引：10，自引：0，他引：10
通过三个渐进的子研究及对中国11个省、自治区、直辖市1000多名被试样本的统计分析,系统地揭示了中国人关于知识工作者的认知图式,知识性工作的重要判别标准以及知识性工作的特点,研究结论为:(1)中国人认为知识工作者是有别于脑力劳动者、知识分子、白领工人及蓝领工人的一个独立的、有所特指的概念;(2)知识工作者可以按照形式逻辑中类与种差的方式定义为"从事知识性工作的人";(3)中国人在判断一项工作是否是知识性工作时,依据的主要标准是对专业技术知识的要求、知识技能的更新速度、对创新的要求、对最低学历的要求以及对质量的要求;(4)中国人认为知识性工作的特点可以概括为更高的专业化、更快的更新、更高的创新、更高的入门学历以及更高的质量。 相似文献
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当今世界农业发展呈现绿色化和集群化趋势.发展绿色农业产业集群是将二者结合实行农业高质量发展的有效途径.本文基于农业产业集群相关理论,构建了绿色农业产业集群形成机理的分析框架,并以中国典型绿色农业集群——山东寿光蔬菜产业集群为例,从绿色网络形成和组织视角出发,实证分析了绿色农业产业集群的形成过程和条件.研究发现:①微观主... 相似文献
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选取珠江-西江经济带21个市州为测度对象,通过建立绿色发展评价指标体系,分析其时空差异特征和影响因素。研究发现,2004—2016年珠江-西江经济带绿色发展水平整体呈上升趋势,但各市州差异明显。经济发展绿化度数值"先降后升",呈现东高西低的分布规律,资源环境承载潜力由"内低外高"演变成"内高外低"的U字型形态,绿色投资与建设高值区逐渐向外扩展,绿色发展水平综合评价的重心由西北部向东南部迁移。相关性分析显示,其主要影响因素是经济发展水平、产业结构类型、地形资源状况及政策支持力度。最后,提出了调整和优化产业结构等相关建议。 相似文献
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目的:在亲子鉴定案件中检出D6S1043基因座三带型。方法:提取个体不同组织DNA样本,经复合荧光PCR扩增和毛细管电泳分析2716个案例(共6246名个体)的STR分型。结果:在1个父子单亲鉴定案例中,2名个体的D6S1043基因座上出现三带型等位基因。用Power Plex?21荧光标记复合扩增试剂盒对包含D6S1043在内的21个STR基因座进行检测,父亲D6S1043基因座分型为17/18/21,儿子分型为10/17/18,电泳峰高和峰面积之比均为1∶1∶1,用SinofilerTM试剂盒复核检测结果相同。结论:在本文发现的案例中,父亲的等位基因17和18均遗传给了儿子,导致儿子表现为三带型等位基因。D6S1043三带型非常罕见,在分析时应采用不同方法或者试剂盒进行验证,保证鉴定结果的可靠性。 相似文献
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基于中国知网（CNKI）2000—2020年绿色金融的引文数据，借助CiteSpace对作者、机构、热点词及其演进趋势进行分析和可视化展现。研究发现：（1）2000年前后绿色金融开始受到中国学界关注，2016年相关研究文献剧增，研究趋势受到全球变化、国家政策的显著影响；（2）众多专家学者和研究机构参与“绿色金融”这一议题的研究，已形成系列研究成果；（3）绿色金融相关研究不断深化，研究方法、研究主题和研究视角更加多元，但微观实证研究依然偏少。未来中国绿色金融研究还要在微观机理、产品创新研究、制度设计等多方面不断深化和拓展。 相似文献
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应用免疫细胞化学技术对体内、外组小鼠植入前胚胎组蛋白乙酰基转移酶GCN5(generalcontrolofnucleotidesynthesis,GCN5)和去乙酰化酶HDAC1(histonedeacetylase1)的表达情况进行测定研究。结果显示(1)体内组:GCN5在2细胞、4细胞、8细胞卵裂胚胎和桑椹胚的胞浆内为强荧光信号;而囊胚细胞的胞浆无明显荧光信号。HDAC1在2细胞的胞浆胞核内均有荧光信号,但以胞浆内为著;4细胞、8细胞、桑椹胚和囊胚的胞核内可见HDAC1强荧光信号。(2)体外组:2细胞、4细胞、8细胞、桑椹胚和囊胚的胞浆胞核均无明显的GCN5荧光信号。HDAC1在各细胞期胚胎的染色情况与体内组基本相似,只是荧光强度有所下降,尤其是2细胞胚胎。结果表明:早期卵裂环境影响小鼠植入前胚胎GCN5和HDAC1表达。 相似文献
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绿色金融是助益于解决一揽子环境问题的核心推动力,本质上是一个在环保资源层面由“逐底竞争”至“逐顶竞争”的行为嬗变,为探索绿色金融的效率水平与提升路径,本文通过Super-SBM模型与Malmquist指数来测算中国30个省份2011—2020年的绿色金融效率,从省域分布和时间序列两个方面分别进行多维解读,同时透过组态视角对影响效率值高低的解释因子进行跟踪研判。研究表明：①中国绿色金融效率呈现出“东部—西部—中部—东北”依次递减的格局,在空间分布上显现出一定程度的聚集现象和两极分化态势;②效率值处于上升阶段集中于“十二五”时期,而在“十三五”时期处于波动下降态势,纯技术效率和技术进步是效率处于上升阶段的主导因素,规模效率是效率处于下降阶段的主要原因;③各解释因子均不单独构成绿色金融效率提升的瓶颈,且通过联动匹配识别出5条高效率组态驱动路径。最后,基于区域绿色金融效率问题显著的发展不均衡性和系统组态特征,提出了一系列具有前瞻性的理论建议。 相似文献
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采用超效率EBM模型测算纳入能源要素的区域绿色创新效率,并从空间相关角度,采用探索性空间数据分析（ESDA）方法分析区域绿色创新效率的时空差异。以长江经济带制造业为例,运用2008—2019年有关面板数据构建绿色创新效率测算指标体系,实证结果发现：（1）各年份内长江经济带制造业绿色创新效率值均小于1,未实现有效生产,其中下游地区的创新效率最高,中上游地区的创新效率较低;（2）各省市制造业绿色创新效率空间差异明显,且与其经济发展水平的空间分布格局表现出协调一致性;（3）各省市制造业绿色创新效率在空间上表现出正的自相关性,存在空间集聚特征。根据研究结论,分别从提升绿色创新水平、强化空间集聚效应和推动区域趋同化发展3个角度提出促进长江经济带制造业绿色创新的对策建议。 相似文献