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1.
《科学中国人》2015,(26)
目的构建SLO原核表达质粒,重组蛋白的诱导表达并纯化。方法提取链霉菌溶血素O模板DNA,PCR法扩增slo基因。构建融合表达重组质粒p GEX-6p-1-slo和pet32a-tev-slo,将正确的重组质粒转化至大肠杆菌BL21和大肠杆菌BL21-DE3,使用异丙基硫代βD半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组融合蛋白。采用亲和层析纯化重组蛋白,切除标签后,再通过亲和层析纯化,获取SLO重组蛋白。结果 PCR扩增出slo基因,基因片段(1700 bp)与理论一致。经SDSPAGE,蛋白质印迹显示重组蛋白相对分子质量为55 k Da,与数据库中的相对分子质量结果相符。结论成功构建了slo原核表达质粒,表达并纯化了SLO重组蛋白。 相似文献
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《科学中国人》2015,(26)
目的:构建Visfatin原核表达质粒,诱导表达并纯化重组人内脂素(Visfatin)。方法:从人LO2细胞中提取总RNA后,经RT-PCR法得到人Visfatin的c DNA序列,用以构建带HIS标签的Visfatin重组质粒。然后将重组质粒转化到大肠杆菌BL21中,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,用Ni柱亲和层析纯化融合蛋白。结果:PCR扩增出的目的基因片段为1600 bp左右,与理论大小一致。SDS-PAGE、Western blot、质谱分析数据证明了蛋白是Visfatin融合蛋白。结论:成功的表达并纯化得到带HIS标签的Visfatin融合蛋白。 相似文献
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His-猪生长激素融合基因在大肠杆菌中的表达与纯化 总被引：1，自引：1，他引：1
将通过PCR技术改建并去除了信号肽的猪生长激素cDNA克隆入大肠杆菌表达载体pET-28a( ),构建出能利用Ni-NTAAgarose柱一步纯化表达产物的重组质粒pPGH020。探讨了大肠杆菌中重组猪生长激素的最佳表达条件和纯化方法,制备并纯化了兔抗pGH抗体。SDS鄄PAGE和Westernblot的分析结果表明,26.5kD处有包括His·Taq、thrombin位点序列和pGH序列的融合蛋白特异条带。凝胶扫描估测猪生长激素的表达量占大肠杆菌胞浆蛋白的17.3%左右。 相似文献
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目的:设计获得5段hIL-18异构体,定向插入pEGFP-C1质粒形成融合基因,转染胰腺癌Bx-PC-3细胞并表达,为进一步研究改建的hIL-18蛋白功能奠定实验基础.方法:设计引物从pGEM-T-hIL-18质粒中PCR扩增得到5段不同的hIL-18片段,分别连接入pEGFP-C1载体构建不同的突变子(Mu0、Mu1、Mu2、Mu3和Mu4),转染原位胰腺癌BxPC-3细胞,以荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR法检测转染细胞中hIL-18表达水平.结果:(1)五种重组质粒经酶切与测序证实构建成功;(2)BxPC-3细胞转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达.结论:(1)成功构建了hIL-18五种异构体的绿色荧光蛋白表达载体;(2)改建的hIL-18蛋白可与绿色荧光蛋白在BxPC-3细胞融合表达. 相似文献
6.
目的:构建真核表达IL-18-GPI融合基因的表达载体,观察融合蛋白在哺乳动物细胞中的表达动力学及生物学活性,为进一步研究细胞因子作为免疫增强剂在临床肿瘤治疗中的应用奠定基础.方法:通过RT-PCR的方法从脂多糖刺激的外周血淋巴细胞中钓取IL-18基因,通过共用限制性酶切位点与GPI相连形成pcDNA-IL-18-GPI真核表达质粒.将质粒转染CHO细胞后建立稳定表达融合蛋白的细胞株用于融合蛋白的提取.对提取纯化的蛋白进行生物学特性、蛋白质转移分析和γ-IFN诱导实验.结果:获得714 bp的核酸序列并构建重组质粒pcDNA-IL-18-GPI.SDS-PAGE和West-blot显示在CHO细胞中表达的IL-18-GPI融合蛋白分子量约为27.5 kD,该蛋白具有明显的蛋白转移和诱生γ-IFN的作用.结论:IL-18-GPI融合蛋白是一种潜在的肿瘤疫苗增强剂,具有良好的应用前景. 相似文献
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目的:扩增弓形虫SAG2基因,构建pGEX-4T-1-SAG2重组质粒,在大肠杆菌中表达。方法:设计并合成引物,经PCR法扩增SAG2基因序列,与pMD18-T载体连接,构建pMD18-T-SAG2质粒,经酶切鉴定、测序,与pGEX-4T-1载体连接,构建pGEX-4T-1-SAG2质粒。将重组质粒转入大肠杆菌诱导表达,进行SDS-PAGE和Western-blot鉴定。结果:扩增出约561bp的SAG2基因序列,成功构建pGEX-4T-1-SAG2质粒,并在大肠杆菌中得到高效表达,融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的40%。SDS-PAGE电泳显示pGEX-4T-1-SAG2的融合蛋白的分子量约为45kd。Western-blot显示融合蛋白有良好的抗原性。结论表达质粒在大肠杆菌中得到高效表达,为进一步研究弓形虫病的诊断做好准备。 相似文献
11.
采用ＰＳＭＴＥ７作为质粒,进行ＨＩＶ－１ｅｎｖ基因对ＣＤ４阳性单核细胞Ｕ９３７－２的导入与表达,ｅｎｖ基因导入细胞在微量重金属镉的诱导下,激活妄动子表达ｇｐ１２０及ｇｐ１６０经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ转移显色后,可得清晰的ｅｎｖ目的的条带,此外,充式细胞仪对表达的ｇｐ１２０与ＣＤ４位点的结合作了分析,验证了该表达蛋白的结构与活性,从实验系可以观察到的表达ｇｐ１６０的ＣＤ４细胞株由于表达ｇｐ１６０而引 相似文献
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13.
In this study, we have examined the effect of linking of bloactive fragment of human IL-1β (163–171) or polytuftsin (PT, a
synthetic polymer of natural immunomodulator “tuftsin”) with synthetic peptides of HIV on the induction of immune response
to the synthetic peptides. A panel of synthetic peptides representing defined region of gp41, gp120 and gag were used as antigens.
Immunomodulators linked peptides (i.e. peptide-IL-1β or peptide-PT) or peptide dimers were employed for immunization in Balb/c
mice. Mice immunized with the peptide-immunomodulator develop effective T-cell proliferation,in vitro cytokine release and higher antibody production, but not with peptide dimers. We also found that peptide-immunomodulators
induced high level of IgG2a antibody production. Furthermore, there was a positive correlation between the levels of cytokine
(IL-2 & IFN-γ) and IgG isotype production. Thus it would appear that incorporation of IL-1β fragment or PT selectively enhances
the Th1 type response to these peptides and may therefore be important for virus neutralization and clearance. However, the
effect of IL-1β fragment was found to be more pronounced than polytuftsin. Such an approach may provide effective vaccination
against other infectious diseases. 相似文献
14.
利用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术对14个枣Ziziphus jujuba 品种和1个野生种——泰山酸枣Z．spinosus的遗传变异进行了研究。从120个10-碱基随机引物中筛选出37个多态性引物用于正式扩增，共扩增出429条DNA带，其中多态性带214条，占49．88％。根据DNA扩增结果计算了品种及类型间遗传距离，并用UPGMA构建了聚类树状图。分析结果表明：龙爪枣 Z．jujuba var．tortuosa、葫芦枣 Z. jujuba var．lageniformis、无核枣 Z.jujuba var．anucleatus 等几个变种内的遗传距离大于变种间遗传距离，认为枣的变种划分是不自然的，宜并入其原变种；枣种下不宜设变种，对枣种下的众多品种，应根据品种间的遗传关系，直接划分品种群。 相似文献
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Peter J. Mulder 《Journal of The Franklin Institute》1938,225(5):527-547
The phosphorescence of the calcium sulphide was excited by light and the intensity of the combined radiation of all stimulated wave-lengths was measured as a function of time by means of photoelectric cell, the current from which was amplified by a special vacuum tube amplifier. The amplified currents deflected a galvanometer, the deflection of which was found to be strictly proportional to the intensity of the light falling on the cell.Decay curves for different durations of excitation of the sample were obtained, the decay in intensity during the first thirty seconds after excitation being automatically recorded. Similar curves were obtained for identical durations of excitation at various temperatures of the sample. The effects of several different binders for the calcium sulphide powder were also investigated. A single empirical equation for sulphide in a given binder was obtained, by means of which the intensity of the phosphorescence can be computed for any time after excitation begins, and for any temperature within the range studied. 相似文献
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茶小绿叶蝉优势种的归属的分子依据 总被引：2，自引：0，他引：2
从中国农业科学院茶叶研究所的国家茶树资源圃随机采集茶小绿叶蝉个体,用RAPD标记技术,拟从DNA水平上探索茶小绿叶蝉个体间的遗传距离和亲缘关系,为茶小绿叶蝉优势种的归属提供分子水平上的依据。所选的14个随机引物共扩增出81条谱带,59条多态性条带,多态性为72．84％,表明叶蝉个体间有较丰富的遗传多样性,但未发现可以区别不同种的特异性条带和引物。UPGMA法聚类分析也表明,叶蝉个体间遗传距离在0．17～0．46之间,说明茶小绿叶蝉的遗传基础较一致,存在异种的可能性几乎没有。本文为茶小绿叶蝉的优势种的归属提供了一定的分子基础,结合前人对茶小绿叶蝉的形态学研究,认为茶小绿叶蝉的优势种为假眼小绿叶蝉,小绿叶蝉未在茶园中未形成种群。 相似文献
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DNA分子标记技术在水生动物遗传多样性研究中的应用 总被引：1，自引：0，他引：1
简要阐述了几种常见DNA分子标记技术,如限制性片断长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)、随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphie DNA,RAPD)、扩增片断长度多态性(amplified fragment length polymorphism,AFLP)、简单重复序列或微卫星标记(simpie sequencerepeat,SSR)、内部简单重复序列(inter-simple sequence repeat,ISSR)和单核苷酸多态性(single nucleotidepelymorphisms,SNP)等的基本原理、技术上的优缺点及其在水生动物遗传多样性研究中的应用,包括遗传多样性的鉴定、品种亲缘关系与分类的研究和种质资源的鉴定等.最后,对DNA分子标记技术在水生动物遗传多样性应用中的存在问题进行了简单的讨论. 相似文献