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通过基因工程技术可以创造出新酶或改造原有的酶,亦可以揭示酶的结构与功能的关系,报道了基因工程在酶的异源表达等方面的研究进展。探索了研究中存在的问题,常会发现带有变异质粒或缺失质粒的非生长细胞存在,从而严重降低酶的产率,其主要原因是质粒分配的不稳定性、结构不稳定性、质粒的不同拷贝状态对宿主细胞生理的影响;并对其前景作了展望。 相似文献
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用固相亚磷酰胺法(solid-phase phosphoramidite method)成功地合成了胸腺素α_1的全基因(下简称Tα_1基因)。合成的Tα_1基因全长为96bp(碱基对),包括胸腺素α_1结构基因和两端的接头。α_1基因先分成七个片段在DNA合成仪上合成,再经T_4DNA连接酶连接成为完整的Tα_1双链基因。Tα_1基因已克隆到质粒pBR322上,并经抗菌素抗性试验和酶切鉴定筛选出重组pBR322质粒。已进行α_1基因的顺序测定,目前正在进行表达工作。Tα_1由一种由28个氨基酸组成的活性多肽,由胸腺上皮细胞产生,对人体免疫功能的调整起重要作用。如调节T淋巴细胞的分化与成熟,增强移动抑制因子和干扰素的合成 相似文献
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《科学中国人》2015,(26)
目的构建SLO原核表达质粒,重组蛋白的诱导表达并纯化。方法提取链霉菌溶血素O模板DNA,PCR法扩增slo基因。构建融合表达重组质粒p GEX-6p-1-slo和pet32a-tev-slo,将正确的重组质粒转化至大肠杆菌BL21和大肠杆菌BL21-DE3,使用异丙基硫代βD半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组融合蛋白。采用亲和层析纯化重组蛋白,切除标签后,再通过亲和层析纯化,获取SLO重组蛋白。结果 PCR扩增出slo基因,基因片段(1700 bp)与理论一致。经SDSPAGE,蛋白质印迹显示重组蛋白相对分子质量为55 k Da,与数据库中的相对分子质量结果相符。结论成功构建了slo原核表达质粒,表达并纯化了SLO重组蛋白。 相似文献
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萤火虫荧光素酶基因cDNA真核表达载体pGL2可在原核细胞中高效表达。该载体中含有SV40早期启动子及荧光素酶基因cDNA5'端总长共758bp的DNA碱基序列，经计算机分析发现，在SV40早期启动子中含有SV40基因组HindⅢB片断中一段长为49bp的DNA序列，且荧光素酶基因cDNA编码区的5'端含有一个原核细胞基因表达调控区相似序列。将pGL2中的荧光素酶基因cDNA（Luc）克隆入真核表达载体pED中，构建成pED-Luc。该载体经表达测定后，只在真核细胞中表达，在原核细胞不中表达。这说明荧光素酶基因cDNA编码区的5'端的原核细胞基因表达调控区相似序列不具表达有活性的荧光 素酶的功能。经DNA序列对比研究，认为pGL2含有的SV40基因组Hind ⅢB片段5123bp-5171bp长49bp的DNA序列可能就是Hind ⅢB片段的原核增强子功能的决定序列。 相似文献
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天花粉蛋白研究新进展 总被引：3，自引：0，他引：3
天花粉蛋白是从葫芦科植物栝楼块根中分离纯化得到的单链核糖化失活蛋白，其一级结构、二级结构及空间结构皆已阐明。它的作用方式属于ＲＮＡ Ｎ－糖苷酶，专一水解真核细胞核糖体ｒＲＮＡ中Ａ４３２４位腺苷酸的Ｎ－Ｃ糖苷键，抑制真细胞核糖体功能。近来研究表明天花粉蛋白可以抗肿瘤、抗病毒，本文对其机理进行了探讨。利用体外无细胞翻译系统观察到天花粉蛋白对其自身核糖体存在毒性作用。 相似文献
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利用高保真PCR酶从克隆载体pMD18T-GmPHD2中扩增出大豆PHD类转录因子GmPHD2,并于基因上下游分别引入XbaI和XhoI酶切位点;然后通过TA克隆、载体双酶切、连接、转化等技术手段,将其连入植物表达载体pBA002,构建了含GmPHD2和抗除草剂筛选标记Bar基因的植物表达载体pBA002-GmPHD2。重组质粒经PCR检测、双酶切及测序验证,表明GmPHD2基因已被完整、正确的插入到pBA002载体中,之后通过冻融法将重组质粒pBA002-GmPHD2成功导入农杆菌EHA105,利用此农杆菌不仅可以介导转化大豆,而且可以转化非同源的其他作物,为进一步开展植物抗逆性的基因工程研究提供了新基因资源。 相似文献
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《Electronic Journal of Biotechnology》2014,17(1):50-54
BackgroundRhizoctonia solani (teleomorph: Thanatephorus cucumeris) is one of the most important pathogens of rice (Oryza sativa L.) that causes severe yield losses in all rice-growing regions. Sclerotia, formed from the aggregation of hyphae, are important structures in the life cycles of R. solani and contain a large quantity of polysaccharides, lipids, proteins and pigments. In order to extract high-quality total RNA from the sclerotia of R. solani, five methods, including E.Z.N.A.™ Fungal RNA Kit, sodium dodecyl sulfate (SDS)–sodium borate, SDS–polyvinylpyrrolidone (PVP), guanidinium thiocyanate (GTC) and modified Trizol, were compared in this study.ResultsThe electrophoresis results showed that it failed to extract total RNA from the sclerotia using modified Trizol method, whereas it could extract total RNA from the sclerotia using other four methods. Further experiments confirmed that the total RNA extracted using SDS–sodium borate, SDS–PVP and E.Z.N.A.™ Fungal RNA Kit methods could be used for RT-PCR of the specific amplification of GAPDH gene fragments, and that extracted using GTC method did not fulfill the requirement for above-mentioned RT-PCR experiment.ConclusionIt is concluded that SDS–sodium borate and SDS–PVP methods were the better ones for the extraction of high-quality total RNA that could be used for future gene cloning and expression studies, whereas E.Z.N.A.™ Fungal RNA Kit was not taken into consideration when deal with a large quantity of samples because it is expensive and relatively low yield. 相似文献
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作物土传真菌病害是当前农业所面临的最重要问题之一,由于防治困难,正日趋成为限制我国农业生产可持续发展的重要因素。基因沉默(或RNA沉默,RNAi)是广泛存在于真核生物中,基于同源序列调控基因表达的一条重要途径,而由此发展起来的基因沉默技术,作为一种新防治策略被广泛地应用于防控植物有害生物的研究中。文章综合介绍了作物土传真菌病害的发生与防治现状、RNA沉默及其在植物有害生物防控应用的最新研究进展,客观分析了基因沉默技术在防治作物土传真菌病害的巨大潜力和亟需解决的主要问题,阐述了研发基因沉默技术对可持续控制作物土传真菌病害的重要性及其巨大应用前景。 相似文献
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CAS plant physiologists have recently invented a plant-mediated RNA interference 《中国科学院院刊(英文版)》2008,22(1):5-6
CAS plant physiologists have recently invented a plant-mediated RNA interference （RNAi） techniqueto effectively and specifically control the gene expression of the cotton bollworm （Helicoverpa armigera） and stunt its growth.Experts say that the feat marks a research breakthrough in the field of biotechnology for plant insect resistance,offering a novel strategy to fight plant pests. 相似文献
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对浙江南部沿海的6种舌鳎属鱼类线粒体12S rRNA序列进行扩增,得到长度约为346 bp的片段。利用MEG Aversion3.0软件分析了6种鱼类的序列特征,检测到100个变异位点,其中简约信息位点43个,插入缺失位点11个;平均A+T∶C+G为57.2%∶43.8%。所有序列的转换颠换比(TS/TV)为2.8,突变未达到饱和。并以鳎科的塞内加尔鳎作为外群,利用PAUP Version4.0 b10软件构建了NJ、MP、ML系统进化树。结果显示在3种进化系统树中6种舌鳎的拓扑结构基本一致,大部分舌鳎间的系统进化关系与传统形态分类的结论吻合,但长吻红舌鳎的分类地位表现出较大分歧,研究认为以侧线和鳞片数量这两个形态特征作为评估舌鳎系统进化的重要性需要重新评估。 相似文献
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Nidhi Gupta Ramesh Kandimalla Kumari Priyanka Gagandip Singh Kiran Dip Gill Surjit Singh 《Indian journal of clinical biochemistry : IJCB》2014,29(1):69-73
Dietary and lifestyle factors have been shown to have a profound effect on paraoxonase-1 (PON1) activity. Cigarette smoke has been shown to inhibit its mass and activity where as resveratrol has been shown to enhance it. We exposed hepatoma derived cell line (HepG2) to resveratrol and nicotine in varying doses and measured PON1 enzymatic activity and PON1 gene expression. In addition, total protein content of HepG2 cells was also measured. Resveratrol in a dose of 15 μmol/l or above significantly increased the PON1 enzyme activity (p > 0.001) where as nicotine in a dose of 1 μmol/l or higher significantly reduced it (p < 0.05). The resveratrol in this dose also enhanced the PON1 gene expression whereas nicotine decreased it as compared to controls. However, the protein conent of cells was not changed suggesting that they were not cytotoxic in the doses used. Till date the antioxidant vitamins have shown disappointing results against LDL oxidation and cardiovascular protection. However, the effect of resveratrol on PON1 gene expression and activity was significant, suggesting increase in PON1 activity and enhanced gene expression may be its alternative mechanism for offering protection against cardiovascular disease and may be an potential pharmacological agent which can be used for this. 相似文献
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对广义百合科黄精族6属23种及铃兰族1属1种的叶绿体基因组trnK和rpl16两个基因片段进
行了PCR-RFLP分析,结果表明：trnK基因的PCR产物在各类群间几乎不存在长度变异,均约2600bp,而rpl16基因则在各属之间及黄精属内表现出长度变异,变异范围在1140~1320bp之间;限制性酶切位点的同源性分析显示,黄精属、竹根七属、鹿药属和舞鹤草属构成的狭义黄精族与铃兰族中的铃兰属有较近的亲缘关系,并支持将扭柄花属和万寿竹属从广义百合科黄精族中分出的观点;在狭义黄精族内,黄精属与竹根七属聚成一支,鹿药属与舞鹤草属聚成另一支,为探讨族内属间的系统演化关系提供了分子生物学方面的证据。另外,本研究结果支持将金佛山黄精从鹿药属转隶至黄精属的观点。 相似文献
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[目的/意义]随着信息的爆炸性增长,科研人员摄取信息的途径越来越多,但对知识的控制能力越来越弱。因此,不论信息如何变化,科研人员需要抓住知识基因的进化过程(科技创新路径)寻找有价值知识,极大提高知识利用效率。[方法/过程]在前期充分辨析科技文献知识基因的基础上,根据科技文献知识基因的特征将科技文献知识基因分为通用知识基因与特定知识基因两种类型。提出利用知识基因表征科技创新路径的节点,根据知识流动的特点,将科技创新路径划分为基于知识基因扩散与知识基因流动的科技创新路径。通过计算知识基因之间遗传或变异的关系,嫁接引用路径构建出知识基因表达的科技创新路径,并通过知识基因间的连线实现可视化表达。[结果/结论]通过阿尔茨海默病领域实验证明,基于知识基因表达的科技创新路径能够从科技文献核心知识价值传承与发展的角度直观地展示出科技创新发展与演化过程。 相似文献