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藻蓝蛋白是红藻和蓝绿藻中一种重要的捕光色素蛋白．克隆了编码极大螺旋藻藻蓝蛋白α和β两个亚基的基因，序列分析表明该基因全长为1119bp．β亚基基因位于α亚基基因上游，两个亚基基因序列长度分别为519bp和489bp，中间被111bp的基因片段间隔．除编码α和β两个亚基的开放阅读密码框外，还存在两个潜在的开放阅读密码框，但这两个密码框的意义还不清楚．比较了该藻蓝蛋白氨基酸序列和来自于其他藻类的藻蓝蛋白氨基酸序列的同源性以及藻蓝蛋白α和β两个亚基之间氨基酸序列的同源性，总的来说其同源性在45．9％．99％之间，α和β两个亚基氨基酸序列同源性为27．1％．藻蓝蛋白包含许多疏水性氨基酸，这些疏水性氨基酸在藻胆蛋白的聚集过程中起着极为重要的作用．分析表明编码藻蓝蛋白α和β两个亚基基因的密码子显示出非对称性． 相似文献
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从斜纹夜蛾核多角体病毒（Spodoptera litura multicapsid nucleopolyhedrovirus,SpltMNPV）日本株（C3）基因组中克隆了ie0基因。核苷酸序列分析表明,该克隆片断涵盖了864 bp的读码框及5′端启动子区475 bp和3′端终止区90 bp的序列。氨基酸序列分析显示,在SpltMNPV IE0蛋白N-端23～47位以及111～126位富含酸性氨基酸和疏水性氨基酸残基,C′端第225～271位具有典型的CX2CX14CCX4CX2CX15CX2C双锌指基序,该结构在所比较的9个昆虫杆状病毒IE0蛋白中是十分保守的。联配分析表明,SpltMNPV日本株（C3）的核苷酸序列和氨基酸序列与其他9种核多角体病毒的同源性有较大差异。以ie0基因为基础绘制的杆状病毒分子进化树将家蚕核多角体病毒（Bombyx mori Nu-cleopolyhedrovirus,BmNPV）与苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒（Autographa californica multicapcid nucle-opolyhedrovirus,AcMNPV）归到同一分枝,这与以p10、gp37和egt基因为基础绘制的杆状病毒分子进化树结果一致。并进行了大肠杆菌表达和Western Blotting分析。 相似文献
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根据鸡白细胞介素18（IL-18）cDNA基因序列设计了1对特异性引物,应用RT-PCR技术,从脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）刺激的我国地方品种萧山鸡原代鸡脾细胞中扩增并克隆鸡IL-18全长基因（Genbank accession,AY628648）。扩增片段全长591bp,共编码197个氨基酸的前体蛋白,其中含有表达完整功能蛋白所必需的起始密码子和终止密码子。该序列与国外报道的鸡IL-18全长基因核苷酸序列及推导的氨基酸序列的同源性为98．99％。只在引导序列中出现两个氨基酸残基的缺失,分子进化分析表明萧山鸡IL-18基因与火鸡以及家鸭基因形成一个独立的分支。将萧山鸡IL-18成熟蛋白序列插入pGEX-4T-2载体并在Ecoli中得到表达,获得45kD的GST-IL-18融合蛋白。经纯化后用于制备多克隆抗体。本研究对萧山鸡白细胞介素18的全长基因进行了克隆及表达,并对其分子进化进行了分析。为深入研究其功能奠定了基础。 相似文献
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大豆花叶病毒杭州分离物基因组全序列测定及其结构分析 总被引：7，自引：0，他引：7
测定了大豆花叶病毒杭州分离物（SMV－HZ）的基因组全序列。该病毒基因组全长9588个核苷酸，3‘末端具poly(A)尾，包含单一开读框，编码一个350.07kD的多聚蛋白。基因组全序列与美国SMV G2、G7、N株系及我国黄淮5号株系（Y5）的核苷酸同一性分别为93％、93％、94％和96％。多聚蛋白酶解后产生马铃薯Y病毒属典型的10成熟蛋白。SMV－YZ与G2、G7、N的不同成熟蛋白间的氨基酸同一性为89％－100％；SMV－HZ与Y5的不同成熟蛋白间氨基酸同一性则较高，达97％－100％。多重分析显示了SMV－HZ与G2、G7、N、Y5之间的序旬差异，G2、G7的P1蛋白氨基酸序列明显不同于其他株系，对SMV－HZ与我国其他株系。对SMV－HZ与我国其他分离物也进行了序列比较，对CP蛋白氨基酸序列的系统进化树分析表明SMV－HZ与BJ分离物的亲缘性最高。 相似文献
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为研究斜纹夜蛾核型多角体病毒（Spodoptera litura muhicapsid nucleopolyhedrovirus．SpltMNPV）侵染规律,根据SphMNPV中国株（G2）ORF135基因序列设计引物,经PCR扩增,从SpltMNPV日本株（B）基因组中克隆了pif-2基因。核苷酸序列分析表明,该基因是甜菜夜蛾核型多角体病毒（Spodoptera exigua nucleopolyhedrovirus,SeMNPV）pif-2的同源物,读码框含1278bp,编码425个氨基酸的蛋白质,推定分子量为48．6kD。与其他杆状病毒的同源物比对显示．SpltMNPV-JP-B PIF-2蛋白中14个Cys残基高度保守。联配分析表明,SphMNPV-JP-B pif-2的核苷酸序列与其他13种核型多角体病毒的同源性有较大差异。将pif-2克隆至原核表达载体pET32a（＋）,经IPTG诱导后在大肠杆菌BL21中获得了融合表达,SDS-PAGE分析表明在约69kD处有特异性表达条带,经Western blot验证该蛋白即为融合表达的目的蛋白。 相似文献
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为研究家蚕质型多角体病毒(BmCPV1)的遗传与变异、探讨S8片段的功能,通过RT-PCR克隆BmCPV1苏州株(BmCPV1-SZ)S8的cDNA,并对其核苷酸序列(GenBank登录号:GQ150539)和编码的氨基酸序列进行生物信息学分析.结果显示:S8由1328 bp构成,具有一个编码390个氨基酸残基的开放阅读框;在BmCPV1-SZ S8的编码氨基酸序列与BmCPV1-I和BmCPV1-H的一致性达93%,但与其他非CPV1型的相似程度较低;在推导的蛋白的氨基酸序列中间区域;具有E-丰富和P-丰富的区,域,其局部区域的氨基酸序列与某些蛋白的功能(细胞周期控制、蛋白降解和RNA降解)区域的序列具有一定的相似性;结构域家族分析显示,BmCPV1-SZ S8编码蛋白属GcrA家族,具有与DNA结合的HTH结构域.Blocks分析显示,S8编码蛋白同时具有DNA聚合酶家族、RNA聚合酶2的结构功能域;高级结构分类显示,S8编码蛋白具有与TIM桶酶、肽酶、核苷三磷酸水解酶相似的同源结构.推测该蛋白具有转录调控因子和多功能酶的功能.基于S8编码的氨基酸序列的进化分析显示,相同类型的CPV聚为一类,同一宿主不同类型的CPV相距较远,推测CPV主要根据其类型聚类,而宿主昆虫对聚类的影响相对较小. 相似文献
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溶藻弧菌铁调蛋白基因的克隆、表达及其特征分析 总被引：1，自引：0，他引：1
铁为一切有机体所必需。对铁摄取与利用的调控在细菌生长和铁毒性中起重要作用。在革兰氏阴性细菌中,铁摄取调节蛋白(Fur)主管铁的代谢。溶藻弧菌是人和海洋动物共感染的一种主要病原弧菌。本研究克隆表达了溶藻弧菌的fur基因,并分析了其相关特征。该基因序列全长994 bp,其中包含450 bp的开放读码框,编码150个氨基酸残基的蛋白,推导的相对分子量为16.78 kD.在编码序列的上下游,RBS序列-、10序列-、35序列和二个潜在的转录终止子分别得到确定,但没有发现存在于大肠杆菌fur基因中的"铁盒子"。氨基酸序列的中段从G46位至D104位,为高度保守区域,其中包括含组氨酸丰富铁结合模型(H3-D-H-L-V-C-L-D-C-G)。SDS-PAGE分析表明,fur基因可在大肠杆菌中大量表达,带His-Tag的重组融和蛋白经镍亲和层析得到纯化,Western-blot分析结果显示,Fur蛋白具有免疫反应性。为进一步研究Fur蛋白的结构与功能打下基础。 相似文献
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研究了国产防己科蝙蝠葛族tirb．Menispermeae9属20种和外类群青牛胆族trib．Tinosporeae 2属3种植物完整的ITS(包括5.8S rDNA)序列。trib．Menispermeae的ITS长527～601 bp，排序后长667bp。当gap处理为missing时具281个有信息位点。PAUP软件分析结果表明：①trib．Menispermeae是一个单系类群，该分支得到hootstrap l00％的支持；②确定了存疑种Pachygone valida的系统学位置，该种是Coc—culus属的成员；③Sinomenium和Menispermum两属有很近的系统学关系，组成族内稳定的一支，它们的ITS序列同源性极高，ITS1比族内其它属长41～73bp；④Stephania和Cyclea也是系统发育关系很近的两个类群。前者具两个主要分支，其IIS1、ITS2的G+C含量差异较大，在种类组成上，该两大支与传统上Stephania属内处理的2个亚属——千金藤亚属subgen．Stephania和山乌龟亚属subgen．Tuberiphania基本一致；Cyclea属内种间的ITS序列差异小，同源性极高。 相似文献
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一株嗜热梭菌β-葡聚糖酶基因的克隆和表达 总被引：1，自引：0，他引：1
提取嗜热梭菌(Clostridium.sp)基因组DNA,首次通过PCR克隆了该菌的β-葡聚糖酶基因全长,结果表明:该基因全长1040bp,ORF为1003bp,编码334个氨基酸,计算分子量为37.8kD,等电点为7.67。经Blast分析,该序列与热纤梭菌同源性最高(99%),而与基因库中嗜热梭菌的同源性为94%,该基因已被GenBank接受(AY225318)。用BamHⅠ和XhoⅠ双酶切目的片段和表达载体pET鄄30a( )后相连接,构建重组表达载体pET鄄clo,并导入BL21细菌中表达.酶学特性表明:SDS鄄PAGE电泳在37kD左右有表达蛋白带,该工程菌最适酶活29.4U/mL,是出发菌的15倍,最适温度在80℃左右,最适pH在9左右。该工程菌可构建耐热性好、酶活高的杂合基因工程菌。 相似文献
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《科技通报》2016,(1)
在1株污染半夏组培苗的枝状枝孢真菌(Cladosporium cladosporioides DF15)中检测到5条双链RNA(double-strand RNA,ds RNA)条带。通过M-SPAT(modified single-primer amplification technique)、克隆测序获得5条ds RNA的序列信息,分别为ds RNA1(2434bp)、ds RNA2(2241bp)、ds RNA3(2008bp)、ds RNA4(1261bp)和ds RNA5(942bp)。经Blast比对,ds RNA1编码蛋白的氨基酸序列与侵染荚孢壳科、球腔菌科真菌的双分病毒属(Partitivirus)病毒,以及侵染辣椒等植物的双分病毒科(Partitiviridae)病毒的依赖于RNA的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,Rd Rp)序列相似度最高。氨基酸序列系统进化树分析表明,ds RNA1与侵染真菌的双分病毒属病毒亲源关系更近。通过核苷酸序列5'非编码区(untranslated regions,UTR)的比对发现,5条ds RNA的5'UTR序列相似度高达50.0%~95.3%,并含有2段保守序列5'-GUAAAUAAACCUU-3'和5'-C(/G)TA(/AG)CAAGT(/C)AT-3'。根据上述分析,推测5条ds RNA序列来自同1种病毒基因组,并且为侵染C.cladosporioides的1种新双分病毒科双分病毒属病毒,命名该病毒为C.cladosporioides virus 1。 相似文献
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从中药虎杖中通过RACE等方法克隆到一个查尔酮合酶基因的全长cDNA,命名为PcCHS1.该cDNA全长1182 bp,编码一个含393个氨基酸的蛋白质.体外酶促活性研究表明,重组PcCHS1在pH 7～8时催化形成查尔酮为其单一产物,在pH 9时除催化形成查尔酮外,还产生一定量的苯亚甲基丙酮.对PcCHS1第216位和第333位氨基酸进行了定点突变研究,结果表明这些位点对PcCHS1的体外酶促活性影响较大. 相似文献
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《中国科技信息》2006,(19)
蝴蝶兰花发育相关基因pPI9的克隆与表达分析CloningandExpressionAnalysisofaPhalaenopsisFlowering-relatedgenepPI9郭滨陈东红戴薇魏星明凤摘要:为研究具有复杂而特异花型的蝴蝶兰花发育的分子机制,利用RT-PCR方法从蝴蝶兰花瓣总RNA中分离出834bp长的cDNA片断.序列分析表明,该cDNA片断与拟南芥的PI基因有60%的同源性,命名为pPI9.它包含一个开放阅读框,具有编码24.5ku蛋白质的能力.推导的氨基酸序列中,N端包含一个完整的MADS盒,C端有明显的PI基序.半定量PCR结果表明该基因只在植株的生殖器官中表达,而在营养器官中不表达,… 相似文献
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利用同源克隆的方法,从商陆中克隆得到扩展蛋白基因的全长cDNA序列,命名为PaEXP1(GenBank 登录号为GQ851947).PaEXP1长1128bp,含有759bp的完整开放阅读框,编码252个氨基酸,分子量27.1kD,等电点8.55.PaEXP1氨基酸序列N端含有8个半胱氨酸残基,1个组氨酸(His-Phe-Asp,HFD)域,C末端存在4个保守的色氨酸残基,具有扩展蛋白的典型结构.系统进化树分析表明,PaEXP1属于扩展蛋白的α-扩展蛋白家族.Real time-PCR结果表明,PaEXP1主要在根中表达,低温、盐、重金属和渗透胁迫均强烈地抑制其基因的表达.酵母转化实验表明,转PaEXP1可以提高酵母的平均直径,说明PaEXP1参与细胞壁的松弛扩展和细胞的增大过程. 相似文献
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高分子量谷蛋白亚基的组成是影响小麦烘烤品质的重要因素,为了更好的利用四川小麦种质资源,本研究利用SDS—PAGE法对36份四川小麦品种（系）的高分子谷蛋白亚基组成进行SDS—PAGE分析,结果表明,Glu-Al、Glu—Bl和Glu—D1位点上的变异形式分别为2、3和2种。其中Glu-Al位点上亚基缺失类型出现的频率较高,达到61．11％,1亚基出现频率为38．81％;在Glu—B1位点,7＋8亚基组合的出现频率最高,为63．89％,14＋15亚基组合类型其次,频率为25％,7亚基出现的频率最低,仅为11．11％;Glu—D1位点上,2＋12亚基组合类型出现频率达61．11％,而5＋10类型为38．89％。本研究为小麦品质育种提供亚基组成依据。 相似文献
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萤火虫荧光素酶基因cDNA真核表达载体pGL2可在原核细胞中高效表达。该载体中含有SV40早期启动子及荧光素酶基因cDNA5'端总长共758bp的DNA碱基序列，经计算机分析发现，在SV40早期启动子中含有SV40基因组HindⅢB片断中一段长为49bp的DNA序列，且荧光素酶基因cDNA编码区的5'端含有一个原核细胞基因表达调控区相似序列。将pGL2中的荧光素酶基因cDNA（Luc）克隆入真核表达载体pED中，构建成pED-Luc。该载体经表达测定后，只在真核细胞中表达，在原核细胞不中表达。这说明荧光素酶基因cDNA编码区的5'端的原核细胞基因表达调控区相似序列不具表达有活性的荧光 素酶的功能。经DNA序列对比研究，认为pGL2含有的SV40基因组Hind ⅢB片段5123bp-5171bp长49bp的DNA序列可能就是Hind ⅢB片段的原核增强子功能的决定序列。 相似文献