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藻蓝蛋白是红藻和蓝绿藻中一种重要的捕光色素蛋白．克隆了编码极大螺旋藻藻蓝蛋白α和β两个亚基的基因，序列分析表明该基因全长为1119bp．β亚基基因位于α亚基基因上游，两个亚基基因序列长度分别为519bp和489bp，中间被111bp的基因片段间隔．除编码α和β两个亚基的开放阅读密码框外，还存在两个潜在的开放阅读密码框，但这两个密码框的意义还不清楚．比较了该藻蓝蛋白氨基酸序列和来自于其他藻类的藻蓝蛋白氨基酸序列的同源性以及藻蓝蛋白α和β两个亚基之间氨基酸序列的同源性，总的来说其同源性在45．9％．99％之间，α和β两个亚基氨基酸序列同源性为27．1％．藻蓝蛋白包含许多疏水性氨基酸，这些疏水性氨基酸在藻胆蛋白的聚集过程中起着极为重要的作用．分析表明编码藻蓝蛋白α和β两个亚基基因的密码子显示出非对称性． 相似文献
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莱茵衣藻素有“光合酵母”之称，是目前少数三套基因组均能进行遗传转化的生物。但由于莱茵衣藻细胞中存在复杂的表达调控体系、密码子偏爱等原因，莱茵衣藻的外源基因表达体系目前还处于探索阶段。通过构建两个莱茵衣藻外源基因表达载体，即以RBCS2序列为启动子的p105和以HSP70A-RBCS2序列为启动子的pHl05，分别将增强型绿色荧光蛋白基因（egfp）插入两个表达载体中，得到p105G124和pH105G124转化载体。然后通过“珠磨法”转化细胞壁缺陷的莱茵衣藻CC-849，并得到两种类别的转基因藻TranⅠ和TranⅡ。在光诱导和热激诱导条件下，两种类型的转基因藻均能稳定表达绿色荧光蛋白。通过实验比较二者的转化效率和蛋白表达水平，结果显示pH105可使eg和基因的转化效率提高8倍；HSP70A-RBCS2启动子至少使绿色荧光蛋白的表达水平提高了2倍，40℃热激后绿色荧光蛋白的表达量再提高约3倍。以上结果表明获得的pH105是一个高效、可诱导的菜茵衣藻外源基因表达载体，这为利用莱茵衣藻高效表达外源基因和开发生物反应器奠定基础。 相似文献
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毕赤酵母具有原核生物易于培养、繁殖快、便于基因工程操作和高密度发酵等特性,同时又具有真核生物中蛋白正确折叠所需的细胞内环境和糖链加工系统,还能将外源蛋白分泌到培养液中,利于纯化,因此,毕赤巴斯德酵母成为近年来发展最为迅速,应用也最为广泛的外源基因表达系统。本文主要介绍了毕赤酵母常见表达载体,提高表达量的对策,以及该表达系统在基因工程抗体方面的一些应用现状。 相似文献
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莱茵衣藻素有"光合酵母"之称,是目前少数三套基因组均能进行遗传转化的生物.但由于莱茵衣藻细胞中存在复杂的表达调控体系、密码子偏爱等原因,莱茵衣藻的外源基因表达体系目前还处于探索阶段.通过构建两个莱茵衣藻外源基因表达载体,即以RBCS2序列为启动子的p105和以HSP70A RBCS2序列为启动子的pH105,分别将增强型绿色荧光蛋白基因(egfp)插入两个表达载体中,得到p105G124和pH105G124转化载体.然后通过"珠磨法"转化细胞壁缺陷的莱茵衣藻cc-849,并得到两种类别的转基因藻Tran-Ⅰ和Tran-Ⅱ.在光诱导和热激诱导条件下,两种类型的转基因藻均能稳定表达绿色荧光蛋白.通过实验比较二者的转化效率和蛋白表达水平,结果显示pH105可使egfp基因的转化效率提高8倍;HSP70A-RBCS2启动子至少使绿色荧光蛋白的表达水平提高了2倍,40℃热激后绿色荧光蛋白的表达量再提高约3倍.以上结果表明获得的pH105是一个高效、可诱导的莱茵衣藻外源基因表达载体,这为利用莱茵衣藻高效表达外源基因和开发生物反应器奠定基础. 相似文献
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幽门螺杆菌CagA蛋白与CTB融合基因的克隆及其植物表达载体的构建 总被引：2，自引：0，他引：2
目的 构建能在水稻胚乳中特异表达的幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白(CagA)和霍乱毒素B亚单位(CTB)的植物表达载体.方法 采用高保真PCR技术分别从质粒pGEM CTB和幽门螺杆菌基因组DNA中扩增出CTB和cagA基因,然后用PCR方法直接融合CTB基因和cagA基因.又用PCR法改造了水稻Wx启动子,在其3′端融合加入Ω序列和Kozak序列.通过一系列亚克隆最终将两个融合基因和NOS终止子插入根癌农杆菌双元载体pCAMBI A1300的表达框架内.结果 PCR验证和测序分析证明,CTB和cagA融合基因以正确的方向插入到载体pCAMBI A1300中,并位于水稻Wx启动子后.结论 成功构建CTB和cagA融合基因的植物表达载体,为幽门螺杆菌口服疫苗的研究奠定基础. 相似文献
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聚-β-羟基丁酸（polyhydroxybutyric acid，PHB）是发现最早且研究最透彻的一种生物可降解塑料。莱茵衣藻（Chlamydomonas reinhardtii）素有“光合酵母”之称，是理想的转基因受体生物。通过转基因技术将PHB生物合成的关键酶基因导入莱茵衣藻，利用光合作用合成PHB，降低PHB的生产成本。从真养产碱杆菌（Alcaligenes eutmphus）分离出phbB和phbC基因，然后构建phbB和phbC基因的衣藻表达载体p1058124和pH105C124。通过“珠磨法”遗传转化技术共转化p1058124和pH105C124，获得了二价转基因衣藻。分子检测结果表明phbB和phbC基因均已整合到莱茵衣藻基因组中。随后进行结晶紫染色和显微镜观察转基因藻，发现二价转化子的核区和细胞膜附近分布有白色空泡；进一步的电子显微镜观察结果表明白色空泡是由细胞中合成的PHB聚集而成，电镜下观察到由PHB形成的明亮的圆形颗粒。光照（90μE／m^2／s）条件下培养转基因藻，出现生长受抑制现象，这可能是由于PHB颗粒在藻细胞内随机分布，干扰了细胞正常的生命活动。 相似文献
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酯酶被应用在很多方面,但是能够满足工业需要的天然酯酶却很少。利用PCR技术从Zunongwangia profunda克隆出了酯酶基因estA。基因estA含有一段1272 bp的ORF,序列分析发现与Anaerophaga thermohalophila的酯酶家族基因同源性为60%。利用表达菌株E.coli BL21(DE3),pGEX-6p-1质粒构建表达载体,并对其进行蛋白表达并纯化回收得到EstA,以便后续酶学性质及应用价值探究。 相似文献
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Zn/Cd超富集植物天蓝遏蓝菜(Thlaspi caerulescens)中TcCaM2基因的克隆及在酵母中的重金属耐受性分析 总被引：1，自引：0，他引：1
从重金属超富集植物天蓝遏蓝菜(T. caerulescens)Cd胁迫的cDNA文库中，通过基因表达的差异筛选得到的阳性克隆之一，核苷酸序列分析表明与拟南芥CaM2的相似性高达92%，故命名为TcCaM2(T. caerulescens CaM2, GenBank No. EF053035)。其核苷酸序列与迄今已知的钙调蛋白基因同源率在83%以上，其氨基酸序列同源性高达95%以上，与大多数高等植物的CaM，如印度芥菜、拟南芥、水稻等同源性则更高。将TcCaM2基因置于酵母表达启动子之下，构建酵母表达载体，并将其转入重金属敏感型酵母突变菌株，酵母重金属耐受实验表明，TcCaM2在酵母中的过量表达提高了酵母对Co2+或Ni2+的耐受性，增加了对Cd2+的敏感性，对Zn2+胁迫抗性稍有增加但差异不显著；说明TcCaM2通过其对重金属离子的结合作用及在信号转导系统中的功能，在植物细胞对重金属的富集、耐性中发挥了重要的调节作用。 相似文献
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《Electronic Journal of Biotechnology》2014,17(5):224-229
BackgroundFollistatin (FST), a secreted glycoprotein, is intrinsically linked to muscle hypertrophy. To explore the function of duck FST in myoblast proliferation and differentiation, the pEGFP-FST eukaryotic expression vector was constructed and identified. The biological activities of this vector were analyzed by transfecting pEGFP-FST into cultured duck myoblasts using Lipofectamine™ 2000 and subsequently determining the mRNA expression profiles of FST and myostatin (MSTN).ResultsThe duck pEGFP-FST vector was successfully constructed and was confirmed to have high liposome-mediated transfection efficiency in duck myoblasts. Additionally, myoblasts transfected with pEGFP-FST had a higher biological activity. Significantly, the overexpression of FST in these cells significantly inhibited the mRNA expression of MSTN (a target gene that is negatively regulated by FST).ConclusionsThe duck pEGFP-FST vector has been constructed successfully and exhibits biological activity by promoting myoblast proliferation and differentiation in vitro. 相似文献
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家蚕丝胶蛋白基因1(ser-1)启动子的克隆及其活性分析 总被引：1，自引：0，他引：1
家蚕ser-1基因是中部丝腺中特异表达组织特异性基因。为研究家蚕ser-1基因在时空上的调控机制,用PCR的方法克隆了家蚕ser-1基因启动子并进行序列分析,进一步构建了由ser-1基因启动子驱动报告基因DsRed的新型表达质粒pSK-ser-DsRed-PolyA,并通过蚕体和家蚕BmN细胞进行了瞬时表达。结果显示,家蚕ser-1基因启动子的TATA框的保守序列为TATAAAA,位于-24～-30处,CAAT框位于-112～-115处;ser-1基因启动子可以驱动红色荧光基因DsRed在家蚕幼虫的中部丝腺组织和培养的BmN细胞中瞬时表达。 相似文献
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提出一种遗传算法优化支持向量机算法的网络安全检测方法。混合算法能够直接得到分类超平面的系数,采用最优支持向量机模型对归一化后的网络数据进行检测,最终得到网络入侵结果。本文通过对比分析传统的SVM网络安全技术,验证了GA-SVM技术的优越性。 相似文献
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传统支持向量机应用于财务困境预测时,需要求解复杂的二次规划问题,求解难度大。而最小二乘支持向量机模型可以将二次规划问题变成一个线性方程组来求解,有效降低了模型求解的难度。尤其是将遗传算法应用于最小二乘支持向量机模型参数和核参数的优化时,显著提高了模型预测的正确率。本文从沪深两市随机抽取了2002年-2007年252家A股上市公司作为研究样本,并把研究样本分为两组,对这两组样本数据分别进行了短期及中长期预测。实证结果表明,基于遗传算法的最小二乘支持向量机模型的预测效果不但好于传统统计类Logit模型,也优于传统支持向量机模型。短期预测效果显著优于中长期预测效果,训练样本数直接影响到模型的预测效果,二者呈正相关关系。 相似文献
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The white spot syndrome virus (WSSV) is one of the deadly pathogens of penaeid shrimps and other crustaceans. The WSSV virion
consists of an enveloped rod-shaped nucleocapsid enclosing a large circular double stranded DNA genome of 305 Kb with 181
open reading frames. The two major structural genes, VP19 and VP28 were amplified from the genomic DNA of Chinese isolate
of WSSV and cloned in pUCm-T vector and sub cloned in pET-30a (+) vector. The expressions of genes inE. coli (BL21) were confirmed by SDS-PAGE analysis. The clones were sequenced, submitted to the gene bank and the Xiang Shan strain
of WSSV were compared with the previous reported sequence of WSSV of various regions which revealed that VP19 and VP28 gene
sequences had certain differences from the sequences of similar genes of the isolate already reported. The recombinant proteins
expressed, purified and characterized. 相似文献
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Natalija Marinkovi? Daria Pa?ali? Slavica Poto?ki 《Biochemia medica : ?asopis Hrvatskoga dru?tva medicinskih biokemi?ara / HDMB》2013,23(3):255-265
Polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) are among the most prevalent environmental pollutants and result from the incomplete combustion of hydrocarbons (coal and gasoline, fossil fuel combustion, byproducts of industrial processing, natural emission, cigarette smoking, etc.). The first phase of xenobiotic biotransformation in the PAH metabolism includes activities of cytochrome P450 from the CYP1 family and microsomal epoxide hydrolase. The products of this biotransformation are reactive oxygen species that are transformed in the second phase through the formation of conjugates with glutathione, glucuronate or sulphates. PAH exposure may lead to PAH-DNA adduct formation or induce an inflammatory atherosclerotic plaque phenotype. Several genetic polymorphisms of genes encoded for enzymes involved in PAH biotransformation have been proven to lead to the development of diseases. Enzyme CYP P450 1A1, which is encoded by the CYP1A1 gene, is vital in the monooxygenation of lipofilic substrates, while GSTM1 and GSTT1 are the most abundant isophorms that conjugate and neutralize oxygen products. Some single nucleotide polymorphisms of the CYP1A1 gene as well as the deletion polymorphisms of GSTT1 and GSTM1 may alter the final specific cellular inflammatory respond. Occupational exposure or conditions from the living environment can contribute to the production of PAH metabolites with adverse effects on human health. The aim of this study was to obtain data on biotransformation and atherosclerosis, as well as data on the gene polymorphisms involved in biotransformation, in order to better study gene expression and further elucidate the interaction between genes and the environment. 相似文献
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提出一种基于遗传规划的合成孔径雷达图像识别方法.首先提取SAR图像的5种特征作为原始特征,然后利用遗传规划算法在5种原始特征上合成新的特征,最后采用支持向量机进行分类.实验结果表明了算法的有效性. 相似文献
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草坪草转基因研究进展 总被引：28，自引：0，他引：28
系统地回顾了草坪草转基因研究的进展。分析了目前转基因技术在草坪草育种中的局限性。对今后草坪草转基因的发展趋势提出了看法。本文所提供的资料对草坪草的研究和应用具有重要的参考价值。 相似文献