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1.
采用改进的CTAB法提取中国特有濒危裸子植物白豆杉(Pseudotaxus chienii)嫩叶总DNA,进行RAPD分析.分别研究了模板DNA、引物、dNTPs、Mg2 和TaqDNA聚合酶用量对RAPD PCR扩增反应结果的影响.筛选并建立了适合于白豆杉RAPD扩增的反应体系:总体积25μL,其中10×PCR缓冲液(500 mmol/L KCl,100 mmol/L Tris-HCl,1.0%Triton X-100,20 mmol/L MgCl2)2.0μL,引物(1.5μmol/L)0.5μL,dNTPs(10 mmol/L)0.4μL,模板1μL(35 ng),Taq酶0.8μL(0.5 U),水20.3 μL. 相似文献
2.
石杉科植物RAPD反应体系的优化 总被引：1，自引：0，他引：1
以石杉科新鲜植物为材料,应用改良的CTAB法提取其基因组DNA,通过单因子实验优化了RAPD的反应体系.在25 μL反应体系中,Mg2++2.0 mmol/L,dNTPs 0.3 mmol/L,模板DNA3ng/μL,随机引物0.21xmol/L,Taq DNA聚合酶1.25U.PCK循环程序为:94℃预变性5 min;然后94℃变性1 min,39℃退火1 min,72℃延伸1.5 min,36个循环;最后72℃延伸7 min,4℃保存.结果表明该体系具有良好的稳定性和重复性,可应用于石杉科植物系统分类,种的鉴定和遗传多样性研究. 相似文献
3.
采用改进的CTAB法提取中国特有濒危裸子植物白豆杉(Pseudotaxus chienii)嫩叶总DNA,进行RAPD分析.分别研究了模板DNA、引物、dNTPs、Mg2 和TaqDNA聚合酶用量对RAPDPCR扩增反应结果的影响.筛选并建立了适合于白豆杉RAPD扩增的反应体系:总体积25μL,其中10×PCR缓冲液(500mmol/L KCl,100mmol/L Tris-HCl,1.0%Triton X-100,20mmol/L MgCl2)2.0μL,引物(1.5μmol/L)0.5μL,dNTPs(10mmol/L)0.4μL,模板1μL(35ng),Taq酶0.8μL(0.5U),水20.3μL. 相似文献
4.
枇杷属植物RAPD反应体系的优化与应用 总被引：2，自引：0，他引：2
采用CTAB—蛋白酶K法提取了48份枇杷种质的DNA,以西班牙枇杷品种Ullera为模板DNA,对枇杷属植物RAPD反应体系进行优化研究,结果表明:25μL反应体系中,Taq DNA聚合酶、Mg2+、引物、模板DNA和dNTPs等5种主要成分的适宜浓度或用量分别是:Mg2+为2.0 mmol/L,Taq DNA聚合酶为1.0 U,引物为0.25"mol/L,dNTPs为0.100—0.125 mmol/L,模板DNA为25—30 ng。利用该优化体系对48份枇杷种质进行RAPD随机扩增,经琼脂糖电泳获得了清晰的扩增图谱。 相似文献
5.
以改进SDS法抽提濒危植物水杉嫩叶总DNA,进行随机扩增多态DNA(RAPD)分析,分别测试了镁离子,dNTP,模板DNA含量,引物和DNA聚合酶量对反应结果的影响,通过各因子的组合研究,可知水杉RAPD分析较适宜的扩增条件是:15μlPCR反应体积,1×Taq酶配套缓冲液(10mmol/LTris HCl pH 9,0.50mmol/L KCl,0.1％Triton X-100),1.5mmol/L MgCl_2,0.5U Taq酶(上海华美公司),5ng模板DNA,20pmol引物(上海Sangon公司);2μg/μlBSA;dATP、dCTP、dGTP、dTTP各0.2mmol/L。 相似文献
6.
席在星 《实验室研究与探索》2006,25(6):608-610,630
RAPD技术是一种新的分子标记技术,DNA质量是保证RAPD分析成功的关键。为获得高质量的木通属植物基因组DNA,本文采用SDS法、改良CTAB法、高盐低pH值法提取三叶木通总DNA。结果表明,高盐低pH值法不适用于木通属植物DNA的提取;改良CTAB法是合适的DNA提取方法,它们获得DNA模板纯度高、质量好,可直接用于RAPD分析。同时,对RAPD反应条件中的一些重要参数进行摸索和优化试验,建立适合木通属植物RAPD分析应用的体系,其组成为:反应液总体积为25μL,2.5μL 10×PCR缓冲液、0.16 mmol/L dNTPs2、.0 mmol/L Mg2 、0.64μmol/L引物、1 U/μL Taq酶4、0 ng/25μLDNA模板。PCR循环体系为:94℃,4 min-[-94℃,30 s-37℃,90 s-72℃,60 s-]-72℃,5 min,40个循环。 相似文献
7.
以渐危植物海菜花基因组DNA为研究对象,筛选引物UBC-818[序列为(CA)8G]研究并确定了该引物适宜的退火温度,对影响ISSR扩增效果的主要参数进行筛选和优化,确定了海菜花的ISSR分析的最佳反应体系:15 μL反应体系中含25 ng模板DNA,0.2 mmol·L-1引物,0.2 μmol·L-1 dNTPs,2.0mmol·L-1 Mg2+ ,0.5 UTaq酶,1.5 μL 10×PCR Buffer Mg2+(-)[100 mmol·L-1 Tris-HCI(pH 8.3),500 mmol.L-1KCI]. 相似文献
8.
采用单因子梯度试验法对影响雷公藤RAPD—PCIK反应的Mg^2＋浓度、dNTPs浓度、引物浓度、Taq DNA聚合酶的用量及DNA模板浓度进行了筛选。结果表明获得清晰、重复性高的雷公藤RAPD-PCR扩增条件为：20μL PCR反应体积中,2．0mmol·L^-1 MgCl2,0．2mmol·L^-1 dNTPs,0．2μmol·L^-1引物,50ng模板DNA,1UTaq DNA聚合酶。 相似文献
9.
目的:对RAPD的反应体系进行优化,以期建立稳定的临床检测系统,在控制院内感染的流行病研究中发挥更大的作用.方法:用RAPD技术进行基因分型.结果:引物浓度:浓度为0.5μmol/L 时扩增最好.DNA模板:浓度在0.50ng/μl 、2ng/μl均得到了良好的扩增效果.镁离子浓度:在2.0mmol/L、4mmol/L时扩增效果较好.退火温度:在30℃时扩增条带最清晰.循环参数:在35、45个循环时扩增效果均好.结论:本试验对RAPD反应条件进行优化,建立了较稳定的临床检测体系. 相似文献
10.
用SDS法提取了苜蓿基因组DNA的模板。从100个10bp的随机引物中筛选出了12条能在11个苜蓿品种中均能扩增出清晰的片段的引物。应用L16(45)正交表,研究了DNA、dNTPs、Mg2 、Taq酶和引物的浓度对扩增迁移率重现性的影响。用这种方法建立的苜蓿RAPD-PCR优化反应体系为:20μL体系中含DNA模板的浓度是5.0mg/L、dNTPs浓度是0.175mmol/L、Mg2 浓度是1.25mmol/L、Taq酶在20μL的体系中是1.00U、引物浓度是0.40μmol/L。 相似文献
11.
在研究猪分子标记遗传距离同杂种优势的关系时,对模板浓度和纯度、引物浓度、dNTP浓度、Mg2+浓度、不同商标的Tag酶等影响RAPD扩增的因素进行了系统的分析,在此基础上建立了适宜于本实验室研究的最佳RAPD技术体系:25(1反应体系中,含10×buffer2.5(I,MgCl21.75mmol/L,dNTPO25mmol/L,引物0.24(mol/L,Tag酶2U,模板50～100ng,1(g/(IBSA。反应程序为:94℃预变性5min,然后94℃变性1min,36℃退火1min,72℃延伸2min40个循环,最后在72℃延伸10min。 相似文献
12.
以黄瓜为试材,研究了种子在含不同浓度亚精胺的MS培养基上的萌发情况,然后将处理后的七龄幼苗去3／4下胚后转接到不含亚精胺的MS培养基中,统计再生植株的株高、节间平均长度、叶面积、雌株（长有雌花再生植株）比率、雌花总数．结果表明,较低浓度的亚精胺显著促进黄瓜种子的萌发且有利于再生植株生殖生长,显著提高雌花成花率;而较高浓的亚精胺则对种子的萌发表现出明显的抑制作用,也不利于再生植株叶片生长和花芽分化,但促进节间伸长． 相似文献
13.
RAPD在蔬菜种子纯度鉴定中应用的反应条件优化 总被引：2，自引：0，他引：2
随着分子生物学的发展,ＲＡＰＤ（随扩增多态性ＤＮＡ）在越来越多的领域得到应用,但在蔬菜纯度鉴定方面,国内外报道较少,为了更好地将ＲＡＰＤ方法应用于蔬菜种子纯度鉴定,就反应条件进行了探索,以几种蔬菜种子为材料,使用进口ＰＣＲ仪在,对几种蔬菜种子进行ＲＡＰＤ分子过程中,从ＤＮＡ提取方法,模板ＤＮＡ量,Ｍｇ＾２＋浓度,Ｔａｑ－ＤＮＡ聚合酶的量,ｄＮＴＰｓ浓度,随机引物浓度及反应缓冲液的量等几个方面进行研 相似文献
14.
油松种子胚乳DNA的提取 总被引：7，自引：0，他引：7
运用改良的CTAB法,从油松萌发种子的胚乳中提取到较高质量的DNA。为从松杉类植物的种子中提取基因组DNA或从胚乳中提取单倍体DNA提供了经济、快速和可靠的实验方法,也为进一步的分子生物学分析包括PCR、RAPD、SSR、AFLP和RFLP等研究提供高质量的DNA摸板。 相似文献
15.
Urochondra setulosa （Trin.） C.E. Hubbard is a coastal halophytic grass thriving on the coastal dunes along the Pakistani seashore. This grass could be useful in coastal sand dune stabilization using seawater irrigation. The purpose of this investigation was to test the hypothesis that Ca^2＋ （0.0, 2.5, 5.0, 10.0 and 50.0 mmol/L） alleviates the adverse effects of KC1, MgSO4, NaC1 and Na2SO4 at 0, 200, 400, 600, 800 and 1000 mmol/L on the germination of Urochondra setulosa. Seed germination was inhibited with increase in salt concentration with few seeds germinated at and above 400 mmol/L concentration. No seed germinated in any of the KC1 treatments. Inclusion of CaC12 substantially alleviated the inhibitory effects of all salts. Germination was higher under photoperiod in comparison to those seeds germinated under complete darkness. Among the CaC12 concentrations used, 10 mmol/L was most effective in alleviating salinity effects and allowing few seeds to germinate at 1000 mmol/L KC1, MgSO4, NaC1 and Na2SO4 solution. 相似文献
16.
以黄瓜品种＂津研4号＂为材料,研究了低温下黄瓜种子萌发过程中脂肪酶活性和脂肪酸含量的变化.结果表明：常温下黄瓜种子萌发过程中脂肪酶活性随时间呈现先升高再降低的变化趋势,脂肪酸含量随时间增加而增加;低温胁迫下脂肪酶活性、脂肪酸含量也呈现出与常温相同的趋势,但脂肪酶活性高峰出现的时间远远滞后于常温,脂肪酶的最大活性高于常温. 相似文献
17.
生物分子系统学研究中的RAPD技术 总被引：1，自引：0，他引：1
RAPD技术在Williams等人于1990年首先提出后,在检测DNA多态性方面受到了广泛的应用.RAPD技术以其简单、快速、信息量大等特点渗透在基因诊断,法医检测,生物药品的检验,生物种群关系的研究各个领域.以核酸为指标构建的生物系统进化树,不受主观因素的影响,避免了经典植物系统学的人为影响因素,因而受到广泛应用,在分子系统研究中出现了RFLP,RAPDDNA和RNA测序等分子生物学技术,其中RAPD技术不需要经过DNA分子克隆、分子杂交等繁锁步骤,也不需用放射性同位素显示,并且多态性检出率高,因而受到普遍关注. 相似文献