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以渐危植物海菜花基因组DNA为研究对象,筛选引物UBC-818【序列为（CA）8G】研究并确定了该引物适宜的退火温度,对影响ISSR扩增效果的主要参数进行筛选和优化,确定了海菜花的ISSR分析的最佳反应体系：15μL反应体系中含25ng模板DNA,0．2mmol·L^-1引物,0．2μmol·L^-1dNTPs,2．0mmol·L^-1Mg^2＋,0．5UTaq酶,1．5μL10×PCRBufferMg2＋（-）[100mmol·L^-1Tris—HCl（pH8．3）,500mmol·L^-1KCl]． 相似文献
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韩颖 《内江师范学院学报》2008,23(2):51-54
采用改进的CTAB法,成功地提取了北野豌豆及其近缘种的基因组DNA,电泳结果显示DNA质量和产量均较高,并以此DNA为模板,对ISSR的反应条件进行了优化,最终确定ISSR的反应体系为：总体积10μl,包括10ng的DNA,1倍的反应缓冲液,1．5mmol·L^-1MgCl2,2×10^-4mmol·L^-1（引物6和引物8）或2×10^-3mmol·L^-1（引物5,10和12）引物,0．2mmol·L^-1dNTP混合物和1．0U的Taq DNA聚合酶．ISSR扩增程序为：先在94℃下变性3min,然后在92℃下变性30s,50℃（引物5,6,10,12）或55．2℃（引物8）下复性30s,72℃下延伸1min,反应30个循环,最后72℃延伸5min．并基于此反应条件,最终筛选出5条ISSR引物用于进一步的研究． 相似文献
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枇杷属植物RAPD反应体系的优化与应用 总被引：2，自引：0，他引：2
采用CTAB—蛋白酶K法提取了48份枇杷种质的DNA,以西班牙枇杷品种Ullera为模板DNA,对枇杷属植物RAPD反应体系进行优化研究,结果表明:25μL反应体系中,Taq DNA聚合酶、Mg2+、引物、模板DNA和dNTPs等5种主要成分的适宜浓度或用量分别是:Mg2+为2.0 mmol/L,Taq DNA聚合酶为1.0 U,引物为0.25"mol/L,dNTPs为0.100—0.125 mmol/L,模板DNA为25—30 ng。利用该优化体系对48份枇杷种质进行RAPD随机扩增,经琼脂糖电泳获得了清晰的扩增图谱。 相似文献
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采用改进的CTAB法提取中国特有濒危裸子植物白豆杉(Pseudotaxus chienii)嫩叶总DNA,进行RAPD分析.分别研究了模板DNA、引物、dNTPs、Mg2 和TaqDNA聚合酶用量对RAPDPCR扩增反应结果的影响.筛选并建立了适合于白豆杉RAPD扩增的反应体系:总体积25μL,其中10×PCR缓冲液(500mmol/L KCl,100mmol/L Tris-HCl,1.0%Triton X-100,20mmol/L MgCl2)2.0μL,引物(1.5μmol/L)0.5μL,dNTPs(10mmol/L)0.4μL,模板1μL(35ng),Taq酶0.8μL(0.5U),水20.3μL. 相似文献
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采用改进的CTAB法提取中国特有濒危裸子植物白豆杉(Pseudotaxus chienii)嫩叶总DNA,进行RAPD分析.分别研究了模板DNA、引物、dNTPs、Mg2 和TaqDNA聚合酶用量对RAPD PCR扩增反应结果的影响.筛选并建立了适合于白豆杉RAPD扩增的反应体系:总体积25μL,其中10×PCR缓冲液(500 mmol/L KCl,100 mmol/L Tris-HCl,1.0%Triton X-100,20 mmol/L MgCl2)2.0μL,引物(1.5μmol/L)0.5μL,dNTPs(10 mmol/L)0.4μL,模板1μL(35 ng),Taq酶0.8μL(0.5 U),水20.3 μL. 相似文献
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用SDS法提取了苜蓿基因组DNA的模板。从100个10bp的随机引物中筛选出了12条能在11个苜蓿品种中均能扩增出清晰的片段的引物。应用L16(45)正交表,研究了DNA、dNTPs、Mg2 、Taq酶和引物的浓度对扩增迁移率重现性的影响。用这种方法建立的苜蓿RAPD-PCR优化反应体系为:20μL体系中含DNA模板的浓度是5.0mg/L、dNTPs浓度是0.175mmol/L、Mg2 浓度是1.25mmol/L、Taq酶在20μL的体系中是1.00U、引物浓度是0.40μmol/L。 相似文献
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影响聚式酶链式反应实验效果的基本因素 总被引：1，自引：0，他引：1
研究聚式酶链式反应(PCR)实验中影响其扩增效果的多种因素,寻求反应体系中理想的各因素浓度配比。选取含5+10优质亚基的小麦品种为材料,以特异扩增1DX5基因PCR实验为例,从模板DNA、引物终浓度、Taq酶、二价镁离子、4dNTPs混合液、缓冲液浓度几方面入手,通过设计梯度实验,研究不同因素对PCR扩增效果的影响。结果表明,反应体系6个基本因素,缺少任何1个都扩增不出产物。在反应总体积25μL的PCR反应体系中,模板DNA选用32 ng/μL,Mg2+终浓度2 mmol/L,Taq酶1.2 U/25μL,引物0.8μmol/μL,4dNTPs0.3 mmol/L,缓冲液1×buffer最为合适,能扩增出理想的结果。 相似文献
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本研究以辣椒基因组DNA为模板,优化辣椒SRAP反应体系中的参数,建立了一套适用于辣椒的SRAP-PCR最佳反应体系。在25μL反应体系中,模板DNA 50 ng、上下游引物各0.1μmol/L、dNTPs 0.1mmol/L、Taq DNA聚合酶1.5 U、Mg2+浓度为2.0 mmol/L。扩增程序为:94℃3 min;94℃30 s、35℃30 s、72℃1.5 min,5 cycles;94℃30 s、54℃30 s、72℃30 s,35 cycles;72℃10 min,用2%琼脂糖凝胶电泳和8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测扩增结果。利用该优化体系筛选引物,筛选出条带清晰、重复性好的15对SRAP引物组合,验证了体系的实用性。 相似文献
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红松SRAP-PCR反应体系的建立及优化 总被引：1，自引：0，他引：1
相关序列扩增多态性(Sequence-Related Amplified Polymorphism,SRAP)是对ORFs(OpenReading Frames)进行扩增的一种新型的基于PCR的标记方法。以CTAB法提取的红松针叶DNA为模板,应用单因子试验及L16(45)正交试验系统分析了DNA模板浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度、Taq酶浓度等对SRAP-PCR扩增结果的影响。确定了PCR的最佳反应体系为:20μL体系中,1×PCRbuffer 2μL、DNA模板40~100 ng,Mg2+2.5mmol/L,dNTPs 0.15 mmol/L,引物0.15μmol/L,Taq酶1.5 U。PCR最优的扩增程序为:进行35个循环,前5个循环中94℃变性1 min,35℃复性1 min,延伸30 s;后30个循环中94℃变性1 min,50℃复性1 min,72℃延伸1 min;最后72℃延伸7 min,4℃保存。在此反应体系下,所扩增谱带清晰、稳定、多态性高,为进行红松不同种源间遗传分化以及构建遗传图谱等内容的研究奠定基础。 相似文献
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建立并优化虎耳草ISSR-PCR反应体系和扩增程序,为探讨虎耳草种质资源遗传多样性奠定基础.采用正交设计方法和单因子试验,研究TaqDNA聚合酶、dNTP、Mg2+、引物、模板DNA、延伸时间及循环次数对PCR扩增的影响.结果表明:虎耳草ISSR-PCR的最佳反应体系为:在25μL的反应体系中含模板DNA 35ng,Mg2+1.25mmo/lL、dNTP 380μmo/lL、引物1.2μmo/lL、Taq DNA聚合酶1.5U.反应程序为:95℃预变性5min;94℃变性1min,50℃(据不同引物的退火温度)退火70s,72℃延伸1.5min,40个循环;72℃延伸10min,4℃保存.经过11份虎耳草种质检验,证明该体系稳定可靠,可用于虎耳草种质资源遗传多样性分析及居群鉴别的研究. 相似文献
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都支杜鹃ISSR扩增条件的优化 总被引：1，自引：0，他引：1
对珍稀濒危物种都支杜鹃的ISSR扩增体系中的Mg2+浓度、dNTP浓度、Taq酶含量和底物含量进行优化,并在优化后的基础上筛选出8条效果较好的引物,在梯度PCR仪中设置温度梯度,找到这些引物的最佳退火温度。优化结果表明,至少在一定的范围内底物浓度和Taq酶含量对PCR反应结果影响不大,相对而言,dNTP浓度和Mg2+浓度对反应结果的影响更加显著。优化后的15 ul PCR反应体系中包括20 ng模板DNA、0.3μM引物、1.5 ul Buffer(Mg2+free),0.5 U Taq酶、1.5 mM MgCl2和0.1 mM dNTP。 相似文献
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实验室含铬废液处理方法的对比研究 总被引：2，自引：0，他引：2
实验室含铬废液不能直接排放,必须进行回收处理。采用化学还原法处理含Cr（VI）废液,对比研究了以亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、抗坏血酸、硫酸亚铁为还原剂还原Cr（VI）的酸度条件、还原剂用量、反应时间等影响因素．结果表明：在最佳参件下,四种还原剂处理含Cr（VI）废液的去除率都在99．9％以上,处理后出水的Cr（VD浓度分别为0．048mg·L^-1、0．018mg·L^-1,0．038mg·L^-1,0．018mg·L^-1,均小于0．5mg·L^-1,达到了国家排放标准,取得了良好的处理效果。综合分析Cr（VI）~除率和经济效益得出亚硫酸氢钠为最佳还原剂。 相似文献
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在硫酸介质中,抗坏血酸存在下,痕量铅能灵敏地催化溴酸钾氧化吖啶红褪色．研究了该催化褪色反应的最佳条件,建立了一种测定痕量铅的新方法．该方法的线性范围为20-85μg·L^-1,检出限为3×10^-7μg·L^-1．用于中药中铅的测定,相对标准偏差为1．73％～4．06％,加标回收率为97．1％～103．8％．实验结果表明,在三种中药中,山药中铅的含量最高,山楂中铅的含量最低． 相似文献