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1.
石杉科植物RAPD反应体系的优化 总被引：1，自引：0，他引：1
以石杉科新鲜植物为材料,应用改良的CTAB法提取其基因组DNA,通过单因子实验优化了RAPD的反应体系.在25 μL反应体系中,Mg2++2.0 mmol/L,dNTPs 0.3 mmol/L,模板DNA3ng/μL,随机引物0.21xmol/L,Taq DNA聚合酶1.25U.PCK循环程序为:94℃预变性5 min;然后94℃变性1 min,39℃退火1 min,72℃延伸1.5 min,36个循环;最后72℃延伸7 min,4℃保存.结果表明该体系具有良好的稳定性和重复性,可应用于石杉科植物系统分类,种的鉴定和遗传多样性研究. 相似文献
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胡桃楸ISSR-PCR反应体系的建立及优化 总被引：3，自引：0，他引：3
在研究胡桃楸遗传多样性的过程中,为了获得清晰、重复性好的ISSR扩增结果,采用改良的CTAB法提取胡桃楸基因组DNA,利用正交设计与单因子试验相结合的方法对影响胡桃楸ISSR-PCR反应体系的5个主要因素(Taq酶、Mg~(2+)、dNTP、引物、模板DNA)在4个水平上进行优化设计。通过综合比较分析,筛选出各反应因素的最佳水平,建立胡桃楸ISSR-PCR最佳反应体系:20μL的反应体系中,Taq酶1.0 U,Mg~(2+)2.0 mmol/L,dNTP 0.2 mmol/L,模板DNA 50～250 ng,引物0.4μmol/L。在此基础上筛选出13条多态性好、扩增稳定的ISSR引物,并确立了最佳退火温度和循环次数。这一优化系统的建立为今后利用ISSR技术进行胡桃楸遗传多样性、亲缘关系以及物种保护等的研究奠定了基础。 相似文献
3.
在研究猪分子标记遗传距离同杂种优势的关系时,对模板浓度和纯度、引物浓度、dNTP浓度、Mg2+浓度、不同商标的Tag酶等影响RAPD扩增的因素进行了系统的分析,在此基础上建立了适宜于本实验室研究的最佳RAPD技术体系:25(1反应体系中,含10×buffer2.5(I,MgCl21.75mmol/L,dNTPO25mmol/L,引物0.24(mol/L,Tag酶2U,模板50～100ng,1(g/(IBSA。反应程序为:94℃预变性5min,然后94℃变性1min,36℃退火1min,72℃延伸2min40个循环,最后在72℃延伸10min。 相似文献
4.
红松SRAP-PCR反应体系的建立及优化 总被引：1，自引：0，他引：1
相关序列扩增多态性(Sequence-Related Amplified Polymorphism,SRAP)是对ORFs(OpenReading Frames)进行扩增的一种新型的基于PCR的标记方法。以CTAB法提取的红松针叶DNA为模板,应用单因子试验及L16(45)正交试验系统分析了DNA模板浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度、Taq酶浓度等对SRAP-PCR扩增结果的影响。确定了PCR的最佳反应体系为:20μL体系中,1×PCRbuffer 2μL、DNA模板40~100 ng,Mg2+2.5mmol/L,dNTPs 0.15 mmol/L,引物0.15μmol/L,Taq酶1.5 U。PCR最优的扩增程序为:进行35个循环,前5个循环中94℃变性1 min,35℃复性1 min,延伸30 s;后30个循环中94℃变性1 min,50℃复性1 min,72℃延伸1 min;最后72℃延伸7 min,4℃保存。在此反应体系下,所扩增谱带清晰、稳定、多态性高,为进行红松不同种源间遗传分化以及构建遗传图谱等内容的研究奠定基础。 相似文献
5.
以新疆哈密瓜为试验材料,利用正交试验设计研究了4个主要因子(Mg2+、DNA聚合酶、SSR引物和dNTP)对SSR扩增结果的影响,并对该哈密瓜SSR反应体系进行了优化,同时尝试用降落(Touchdown,TD)PCR方法扩增目的片段.最终筛选出如下最佳反应体系:总反应体积为25 μL,其中dNTP 200 μmol/L,SSR引物0.75μmol/L,Taq DNA聚合酶1.0 U,Mg2+ 1.5 mmol/L;降落PCR省却了常规PCR中摸索最适退火温度的过程,对一些Tm值相近的PCR反应可应用一套温度程序扩增,是一种行之有效的方法. 相似文献
6.
本研究以辣椒基因组DNA为模板,优化辣椒SRAP反应体系中的参数,建立了一套适用于辣椒的SRAP-PCR最佳反应体系。在25μL反应体系中,模板DNA 50 ng、上下游引物各0.1μmol/L、dNTPs 0.1mmol/L、Taq DNA聚合酶1.5 U、Mg2+浓度为2.0 mmol/L。扩增程序为:94℃3 min;94℃30 s、35℃30 s、72℃1.5 min,5 cycles;94℃30 s、54℃30 s、72℃30 s,35 cycles;72℃10 min,用2%琼脂糖凝胶电泳和8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测扩增结果。利用该优化体系筛选引物,筛选出条带清晰、重复性好的15对SRAP引物组合,验证了体系的实用性。 相似文献
7.
都支杜鹃ISSR扩增条件的优化 总被引：1，自引：0，他引：1
对珍稀濒危物种都支杜鹃的ISSR扩增体系中的Mg2+浓度、dNTP浓度、Taq酶含量和底物含量进行优化,并在优化后的基础上筛选出8条效果较好的引物,在梯度PCR仪中设置温度梯度,找到这些引物的最佳退火温度。优化结果表明,至少在一定的范围内底物浓度和Taq酶含量对PCR反应结果影响不大,相对而言,dNTP浓度和Mg2+浓度对反应结果的影响更加显著。优化后的15 ul PCR反应体系中包括20 ng模板DNA、0.3μM引物、1.5 ul Buffer(Mg2+free),0.5 U Taq酶、1.5 mM MgCl2和0.1 mM dNTP。 相似文献
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韩颖 《内江师范学院学报》2008,23(2):51-54
采用改进的CTAB法,成功地提取了北野豌豆及其近缘种的基因组DNA,电泳结果显示DNA质量和产量均较高,并以此DNA为模板,对ISSR的反应条件进行了优化,最终确定ISSR的反应体系为：总体积10μl,包括10ng的DNA,1倍的反应缓冲液,1．5mmol·L^-1MgCl2,2×10^-4mmol·L^-1（引物6和引物8）或2×10^-3mmol·L^-1（引物5,10和12）引物,0．2mmol·L^-1dNTP混合物和1．0U的Taq DNA聚合酶．ISSR扩增程序为：先在94℃下变性3min,然后在92℃下变性30s,50℃（引物5,6,10,12）或55．2℃（引物8）下复性30s,72℃下延伸1min,反应30个循环,最后72℃延伸5min．并基于此反应条件,最终筛选出5条ISSR引物用于进一步的研究． 相似文献
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枇杷属植物RAPD反应体系的优化与应用 总被引：2，自引：0，他引：2
采用CTAB—蛋白酶K法提取了48份枇杷种质的DNA,以西班牙枇杷品种Ullera为模板DNA,对枇杷属植物RAPD反应体系进行优化研究,结果表明:25μL反应体系中,Taq DNA聚合酶、Mg2+、引物、模板DNA和dNTPs等5种主要成分的适宜浓度或用量分别是:Mg2+为2.0 mmol/L,Taq DNA聚合酶为1.0 U,引物为0.25"mol/L,dNTPs为0.100—0.125 mmol/L,模板DNA为25—30 ng。利用该优化体系对48份枇杷种质进行RAPD随机扩增,经琼脂糖电泳获得了清晰的扩增图谱。 相似文献
10.
正交设计在梨基因组RAPD优化体系中的应用 总被引：2，自引：0，他引：2
采用正交设计研究方法,建立了梨RAPD分析的PCR反应体系,成功地进行了RAPD扩增,筛选出梨RAPD的最佳方案为:25μl反应体系中包括引物0.5μmol.μL-1,dNTPs0.1mmol.L-1,模板DNA10ng,Taq酶1U,Mg2 4mmol.L-1,10buffer缓冲液2.5lμ,其余部分用无菌超纯水补平。PCR扩增循环为95℃3min,38℃1min,72℃2min1次循环;94℃1min,38℃1min,72℃2min,46次循环,最后72℃延伸10min。 相似文献
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以渐危植物海菜花基因组DNA为研究对象,筛选引物UBC-818【序列为（CA）8G】研究并确定了该引物适宜的退火温度,对影响ISSR扩增效果的主要参数进行筛选和优化,确定了海菜花的ISSR分析的最佳反应体系：15μL反应体系中含25ng模板DNA,0．2mmol·L^-1引物,0．2μmol·L^-1dNTPs,2．0mmol·L^-1Mg^2＋,0．5UTaq酶,1．5μL10×PCRBufferMg2＋（-）[100mmol·L^-1Tris—HCl（pH8．3）,500mmol·L^-1KCl]． 相似文献
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采用单因子梯度试验法对影响雷公藤RAPD—PCIK反应的Mg^2＋浓度、dNTPs浓度、引物浓度、Taq DNA聚合酶的用量及DNA模板浓度进行了筛选。结果表明获得清晰、重复性高的雷公藤RAPD-PCR扩增条件为：20μL PCR反应体积中,2．0mmol·L^-1 MgCl2,0．2mmol·L^-1 dNTPs,0．2μmol·L^-1引物,50ng模板DNA,1UTaq DNA聚合酶。 相似文献
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采用改进的CTAB法提取中国特有濒危裸子植物白豆杉(Pseudotaxus chienii)嫩叶总DNA,进行RAPD分析.分别研究了模板DNA、引物、dNTPs、Mg2 和TaqDNA聚合酶用量对RAPDPCR扩增反应结果的影响.筛选并建立了适合于白豆杉RAPD扩增的反应体系:总体积25μL,其中10×PCR缓冲液(500mmol/L KCl,100mmol/L Tris-HCl,1.0%Triton X-100,20mmol/L MgCl2)2.0μL,引物(1.5μmol/L)0.5μL,dNTPs(10mmol/L)0.4μL,模板1μL(35ng),Taq酶0.8μL(0.5U),水20.3μL. 相似文献
14.
采用改进的CTAB法提取中国特有濒危裸子植物白豆杉(Pseudotaxus chienii)嫩叶总DNA,进行RAPD分析.分别研究了模板DNA、引物、dNTPs、Mg2 和TaqDNA聚合酶用量对RAPD PCR扩增反应结果的影响.筛选并建立了适合于白豆杉RAPD扩增的反应体系:总体积25μL,其中10×PCR缓冲液(500 mmol/L KCl,100 mmol/L Tris-HCl,1.0%Triton X-100,20 mmol/L MgCl2)2.0μL,引物(1.5μmol/L)0.5μL,dNTPs(10 mmol/L)0.4μL,模板1μL(35 ng),Taq酶0.8μL(0.5 U),水20.3 μL. 相似文献
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采用改良的SDS法提取黄瓜种子基因组DNA,并以其为模板对影响RAPD扩增反应的主要因子采用单因素递进分析方法进行优化,建立了黄瓜种子基因组DNA最佳RAPD反应体系,即20 μl的反应体积中含有60ng模板,1.2U Taq DNA聚合酶,3.0 mmol/L MgCl2,0.20 mmol/L dNTP,1.40 μmol/L引物. 相似文献
16.
RAPD在蔬菜种子纯度鉴定中应用的反应条件优化 总被引：2，自引：0，他引：2
随着分子生物学的发展,ＲＡＰＤ（随扩增多态性ＤＮＡ）在越来越多的领域得到应用,但在蔬菜纯度鉴定方面,国内外报道较少,为了更好地将ＲＡＰＤ方法应用于蔬菜种子纯度鉴定,就反应条件进行了探索,以几种蔬菜种子为材料,使用进口ＰＣＲ仪在,对几种蔬菜种子进行ＲＡＰＤ分子过程中,从ＤＮＡ提取方法,模板ＤＮＡ量,Ｍｇ＾２＋浓度,Ｔａｑ－ＤＮＡ聚合酶的量,ｄＮＴＰｓ浓度,随机引物浓度及反应缓冲液的量等几个方面进行研 相似文献