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Gabriel PEREZ Valentina VERDEJO Clarissa GONDIM-PORTO Julieta ORLANDO Margarita CARU 《Journal of Zhejiang University. Science. B》2014,15(11):966-978
研究目的：开发具有种属特异性序列特征性扩增区域（SCAR）标记物来监测哈茨木霉在其入侵的试验菌群中的定殖和生长,为哈茨木霉应用于生物防治等生态和生物技术中提供支撑。
创新要点：多种木霉属真菌能与各种微观和宏观的生物有机体建立相互作用。利用这些相互作用,木霉可做为原生种群的入侵物种而用于生物防治。本文通过使用试验菌群为研究模型,利用随机扩增多态性DNA（RAPD）技术和序列特征性扩增区域（SCAR）标记物来监测菌群中哈茨木霉的生长状态。
研究方法：利用随机扩增多态性DNA（RAPD）技术,从16个10聚体引物进行多态性筛选,其中1个引物扩增出对应哈茨木霉的条带。对该条带进行克隆测序,并设计5个20-23聚体引物。成功利用引物对2F2／2R2和2F2／2R3278分别特异性地扩增出哈茨木霉BpTloa菌株278bp和448bp的DNA片段。同时,用这两个引物对14个哈茨木霉菌株和几种不同的真菌菌株进行特异性对照试验,也只成功扩增出哈茨木霉菌株。此外,使用真菌DNA混合物和试验真菌群的DNA为模板,采用实时聚合酶链式反应（PCR）对引物对2F2／2R2进行评估。当仅使用100份SCAR标记物或哈茨木霉仅占整个菌群的0．1％时,仍能检测出哈茨木霉。
重要结论：本研究所建立的SCAR分子标记能有效监测菌群中的哈茨木霉的定殖和生长,具有较高特异性、灵敏度和准确度。 相似文献
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王子迎 《安徽教育学院学报》2005,23(6):94-96,105
采用随机扩增多态性DNA(RAPD)和简单序列重复区间扩增多态性(Inter-simple sequence repeat,ISSR)技术,利用12条RAPD引物和10条ISSR引物对10个安徽香菇菌株进行了DNA标记比较分析.结果表明,ISSR-PCR较RAPD-PCR稳定,更具可操作性;供试菌株存在比较显著的遗传变异,具有较丰富的遗传多样性. 相似文献
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毛加宁 《乐山师范学院学报》2008,23(5):32-34
利用RAPD技术,从248个随机寡核苷酸（10bp）中筛选出18个引物能在供试的Ⅱ优系杂交水稻及部分亲本间扩增出51条稳定性较好的多态性片段。其中有6个引物能在供试材料间稳定地扩增出19个强的多态性标记。利用这些标记能有效地区分各组合中不育系、保持系、恢复系和F1,并能看出各组合中不育系与保持系、不育系与恢复系、F1与亲本间的遗传关系。 相似文献
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《赤峰学院学报(自然科学版)》2021,(1)
为探讨微生物菌剂对番茄整个生育期生物性状以及产量结构的影响,本研究以番茄新品种威利斯特F1代为试材,选择枯草芽孢杆菌哈茨木霉单独喷施和复合处理在番茄幼苗移栽前、苗期、花期、结果期喷施叶面和根部,比较菌剂不同处理对番茄田间生理指标、产量指标的影响。结果表明,对生育期的调查,草芽孢杆菌哈茨木霉单独喷施和复合处理较对照处理延长了整个生育期3-5天;田间生长性状幼苗移栽率、株高、叶面积、茎粗均有增加,不同处理均能优化产量结构,单株结果数量、单果重、每小区产量都有不同程度的增加。因此,喷施微生物菌剂延长了番茄生育期,促进营养生长,优化了产量结果,提高了小区产量。其中喷施枯草芽孢杆菌和哈茨木霉复合剂对番茄生长的影响最大,结果个数和单果重分别比对照增加1.44个和5.6g,每小区(40m~2)产量增加5.6kg。哈茨木霉和枯草芽孢杆菌共同施用效果最好。研究结果为微生物菌剂在设施番茄上应用方法和推广提供了依据。 相似文献
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RAPD标记技术及其应用进展 总被引：2，自引：0，他引：2
RAPD标记技术是在PCR技术的基础上发展起来的一种运用随机引物扩增,寻找多态性DNA片段遗传标记的分子生物学技术,具有操作简便、敏感性高,容易发现DNA的多态性和通用性等优点.文章简单介绍了RAPD技术在物种的亲缘关系、种质资源的多样性、DNA指纹和种子纯度的鉴定、构建分子标记连锁图、基因定位和数量性状的选择、居群及种系遗传分析和遗传连锁图的构建等方面的应用进展. 相似文献
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为了对本课题组得到的大批优质棉花种质资源进行RAPD分子标记遗传多样性鉴定,我们进行了对棉花有效的引物对的筛选,并完成了24个优质棉花材料的遗传多样性分析.结果从48个随机引物对中筛选出了20对引物,这些引物对这24个优质棉花材料的有效性非常高,共扩增出113条谱带,平均每个引物扩增出5.65条,而且这20个随机引物对这24个材料的多态性谱带扩增效果非常明显,多态率高,能明显分辨出来源不同的材料.将这些多态性标记通过聚类软件分析,可将这24种材料明显的分为六类群,遗传多态性得到明显的体现. 相似文献
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研究了生防菌哈茨木霉对7种常见病原菌的抑制作用,探索其生防机制.结果表明:对峙培养时木霉菌对小麦纹枯病菌等7种病原菌菌丝生长均有抑制作用,其中对西瓜枯萎病菌的抑制率最高,达44.3%,对水稻恶苗病菌抑制率次之,为41.2%;木霉菌丝提取物对7种病原菌均有抑制效果,对水稻恶苗病菌抑制效果最为明显;显微观察可见木霉对小麦纹枯病菌有重寄生现象,表明生防机制为营养竞争、抗生作用和重寄生. 相似文献
9.
DNA技术鉴定动物物种研究评述 总被引：1，自引：0，他引：1
周用武 《通化师范学院学报》2008,29(2):48-51
文中对DNA技术用于动物物种鉴定常用的限制性片段多态（RFLP）、随机扩增片段长度多态（RAPD）、扩增片段长度多态（AFLP）、扩增片段限制性长度多态（PCR—RFLP）、物种特异性引物扩增和直接洲序法等6种方法进行了介绍,并对其研究状况和方法的优链点进行了评述,指出了DNA技术用于动物物种鉴定存在的问题及发晨方向。 相似文献
10.
采用单因子梯度试验法对影响雷公藤RAPD—PCIK反应的Mg^2＋浓度、dNTPs浓度、引物浓度、Taq DNA聚合酶的用量及DNA模板浓度进行了筛选。结果表明获得清晰、重复性高的雷公藤RAPD-PCR扩增条件为：20μL PCR反应体积中,2．0mmol·L^-1 MgCl2,0．2mmol·L^-1 dNTPs,0．2μmol·L^-1引物,50ng模板DNA,1UTaq DNA聚合酶。 相似文献
11.
本研究以NS5-NS6为引物,扩增真菌同源性序列ssu-rDNA片段,建立广范围真菌检测的方法。用此方法扩增医学主要致病真菌、细菌和人体细胞,结果所有真菌均扩增出一个约310bp的产物,而细菌和人体细胞均扩增阴性,1pg白色假丝酵母菌DNA即可检出。 相似文献
12.
枇杷属植物RAPD反应体系的优化与应用 总被引：2，自引：0，他引：2
采用CTAB—蛋白酶K法提取了48份枇杷种质的DNA,以西班牙枇杷品种Ullera为模板DNA,对枇杷属植物RAPD反应体系进行优化研究,结果表明:25μL反应体系中,Taq DNA聚合酶、Mg2+、引物、模板DNA和dNTPs等5种主要成分的适宜浓度或用量分别是:Mg2+为2.0 mmol/L,Taq DNA聚合酶为1.0 U,引物为0.25"mol/L,dNTPs为0.100—0.125 mmol/L,模板DNA为25—30 ng。利用该优化体系对48份枇杷种质进行RAPD随机扩增,经琼脂糖电泳获得了清晰的扩增图谱。 相似文献
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DNA分子标记技术及其原理 总被引：10，自引：0，他引：10
综述几种DNA分子标记技术：RFLP是用限制性内切酶切割不同个体基因组DNA后，含同源序列的醇切片段在长度上的差异，可靠性较高、但操作烦琐，信息含量低；染色体原位杂交是利用特异性核酸片段作探针，直接同染色体DNA片段杂交，在染色体上显示特异DNA，准确、直观，但技术非常复杂；PCR是模仿DNA在生物体内的自然复制过程来扩增DNA片段，安全性好，快速易行；RAPD是以人工合成的碱基顺序随机排列的寡核苷酸单链为引物，对所研究的基因组DNA进行PCR扩增，产生多态性的RAPD片段，可以检测多个基因位点，但不能识别杂合子位点；AFLP指纹技术是在RFLP与RAPD两种指纹技术基础上建立和发展起来的，有较高的稳定性，但对基因组纯度和反应条件要求较高；DNA芯片技术是一种以杂交测序基本理论为基础的新型生物技术，用于测序、基因表达、疾病诊断等，但造价、探针的密度与纯度还有待完善；小卫星DNA一般与RFLP技术结合以获得小卫星DNA指纹图谱，信息含量高，但它在染色体上分布不均匀；微卫星DNA既可用作探针获得指纹图谱，也可通过PCR方法进行微卫星位点多态性分析，但工作量大；ISSR即内部简单重复序列，也是一种新兴的分子标记技术，具有很好的稳定性和多态性。 相似文献
15.
采用改进的CTAB法提取中国特有濒危裸子植物白豆杉(Pseudotaxus chienii)嫩叶总DNA,进行RAPD分析.分别研究了模板DNA、引物、dNTPs、Mg2 和TaqDNA聚合酶用量对RAPD PCR扩增反应结果的影响.筛选并建立了适合于白豆杉RAPD扩增的反应体系:总体积25μL,其中10×PCR缓冲液(500 mmol/L KCl,100 mmol/L Tris-HCl,1.0%Triton X-100,20 mmol/L MgCl2)2.0μL,引物(1.5μmol/L)0.5μL,dNTPs(10 mmol/L)0.4μL,模板1μL(35 ng),Taq酶0.8μL(0.5 U),水20.3 μL. 相似文献
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以改进SDS法抽提濒危植物水杉嫩叶总DNA,进行随机扩增多态DNA(RAPD)分析,分别测试了镁离子,dNTP,模板DNA含量,引物和DNA聚合酶量对反应结果的影响,通过各因子的组合研究,可知水杉RAPD分析较适宜的扩增条件是:15μlPCR反应体积,1×Taq酶配套缓冲液(10mmol/LTris HCl pH 9,0.50mmol/L KCl,0.1％Triton X-100),1.5mmol/L MgCl_2,0.5U Taq酶(上海华美公司),5ng模板DNA,20pmol引物(上海Sangon公司);2μg/μlBSA;dATP、dCTP、dGTP、dTTP各0.2mmol/L。 相似文献
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中国桫椤科6种植物的RAPD分析 总被引：8，自引：1，他引：8
应用随机扩增多态性DNA (RAPD)的方法分析中国桫椤科 6种植物 :小羽桫椤(Cyatheatsangii)、粗齿桫椤 (Alsophiladenticulata)、黑桫椤 (Alsophilapodophylla)、白桫椤(Sphaeropterisbrunoniana)、海南白桫椤 (Sphaeropterisbrunoniana)、桫椤 (Alsophilaspinulosa)。经筛选 4 0个引物 ,发现 14个引物的带型清晰并呈多态性。采用UPGMA法对求出的遗传距离进行聚类分析 ,得到的结果显示 :所研究 6种植物明显地聚合为 3个类群 ,支持夏群的分类处理 相似文献
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正交设计在梨基因组RAPD优化体系中的应用 总被引：2，自引：0，他引：2
采用正交设计研究方法,建立了梨RAPD分析的PCR反应体系,成功地进行了RAPD扩增,筛选出梨RAPD的最佳方案为:25μl反应体系中包括引物0.5μmol.μL-1,dNTPs0.1mmol.L-1,模板DNA10ng,Taq酶1U,Mg2 4mmol.L-1,10buffer缓冲液2.5lμ,其余部分用无菌超纯水补平。PCR扩增循环为95℃3min,38℃1min,72℃2min1次循环;94℃1min,38℃1min,72℃2min,46次循环,最后72℃延伸10min。 相似文献
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目的:对RAPD的反应体系进行优化,以期建立稳定的临床检测系统,在控制院内感染的流行病研究中发挥更大的作用.方法:用RAPD技术进行基因分型.结果:引物浓度:浓度为0.5μmol/L 时扩增最好.DNA模板:浓度在0.50ng/μl 、2ng/μl均得到了良好的扩增效果.镁离子浓度:在2.0mmol/L、4mmol/L时扩增效果较好.退火温度:在30℃时扩增条带最清晰.循环参数:在35、45个循环时扩增效果均好.结论:本试验对RAPD反应条件进行优化,建立了较稳定的临床检测体系. 相似文献
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采用改进的CTAB法提取中国特有濒危裸子植物白豆杉(Pseudotaxus chienii)嫩叶总DNA,进行RAPD分析.分别研究了模板DNA、引物、dNTPs、Mg2 和TaqDNA聚合酶用量对RAPDPCR扩增反应结果的影响.筛选并建立了适合于白豆杉RAPD扩增的反应体系:总体积25μL,其中10×PCR缓冲液(500mmol/L KCl,100mmol/L Tris-HCl,1.0%Triton X-100,20mmol/L MgCl2)2.0μL,引物(1.5μmol/L)0.5μL,dNTPs(10mmol/L)0.4μL,模板1μL(35ng),Taq酶0.8μL(0.5U),水20.3μL. 相似文献